Общая микробиология
 Скачать 1.12 Mb.
|
Раздел 3. Микрофлора организма человека, объектов внешней среды.Санитарно - показательные микроорганизмы, их характеристика, требования, предъявляемые к ним. Понятие о микробном числе, титре, индексе. Санитарно-показательные микроорганизмы являются постоянными обитателями поверхностей и полостей человеческого или животного организма. Обнаружение и в объектах внешней среды свидетельствует о загрязнение выделениями человека или животного. Чем обильнее такое загрязнение, тем больше возможность попадания в объект патогенных микробов. Санитарно-показательные бактерии – представители облигатной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, для которых средой обитания являются кишечник или респираторный тракт. Санитарно- показательными микроорганизмами могут быть только те, которые постоянно и в больших количествах содержатся в выделениях человека или животного, они должны сохранять жизнеспособность во внешней среде в течение сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов, выделяемых теми же путями, но не размножаться интенсивно во внешней среде. Они должны также легко обнаруживаться современными и довольно простыми методами исследования. Основными санитарно- показательными микроорганизмами в отношении кишечных инфекций, указывающими на фекальное загрязнение внешней среды (вода, почва), считают бактерии группы кишечных палочек (БГКП). В качестве дополнительных показателей при оценке некоторых объектов определяют наличие фекальных стрептококков (энтерококков) и клостридий. Свойства спб: -постоянно выделяются в большом количестве из организма во внешнюю среду -не имеют других мест обитания -способны сохраняться в окружающей среде в течение тех же сроков, что и патогенные бактерии, паразитирующие в кишечнике или респираторном тракте -не способны интенсивно размножаться на каких либо объектах вне организма хозяина и изменять свои свойства Микробное число – общее количество микробов в единице объема или массы исследуемого объекта (1 м3 воздуха, 1 г почвы, 1 мл воды) Содержание санитарно-показательных бактерий оценивают по титру и индексу: Титр – минимальный объем или масса исследуемого материала, в которых обнаруживают спб. Индекс – количество спб, содержащихся в 1 м3 воздуха, 1 г почвы, 1 мл воды. Микрофлора почвы. Факторы, влияющие на количественный и видовой состав микробов почвы. Почва как фактор передачи инфекционных заболеваний. Санитарно-показательные мо. Методы оценки санитарно-бактериологического состояния почвы. Почва – естественная среда мо, принимающих участие в круговороте веществ в природе, почвообразовании и самоочищении почвы. Микробы из почвы попадают в воздух и воду. Пахотный слой почвы толщиной 10-15 см содержит наибольшее количество мо. По мере углубления количество мо уменьшается вплоть до их исчезновения на глубине 3-4 м. К микрофлоре почвы относятся: - спорообразующие палочки родов Bacillus и Clostridium - аммонифицирующие – непатогенные бациллы, псевдомонады, протей - азотфиксирующие - Azotobacter, Azomonas, Mycobacterium - простейшие - грибы - цианобактерии Патогенные спорообразующие палочки могут длительно сохраняться и размножаться в почве. Представители семейства Enterobacteriaceae попав в почву с фекалиями, отмирают. В чистых почвах кишечная палочка и протей встречаются редко. Обнаружение бактерий группы кишечной палочки в значительных количествах указывает на загрязнение почвы фекалиями. Факторы, влияющие на качественный и количественный состав микроорганизмов почвы 1. Тип почвы (тундровая, подзолистая, черноземная, сероземная). 2.Влажность почвы. 3.Аэрация (Почвы, богатые влагой, плохо аэрируются. В этих условиях преобладают анаэробы, а песчаные почвы аэрируются лучше, поэтому в них больше аэробов.) 4.Температура почвы. 5.Адсорбционная способность почв. В почве большинство представителей нормальной и патогенной микрофлоры человека длительно не выживают. Классификация почвенных патогенных мо: Патогенные мо, постоянно обитающие в почве (возб. Ботулизма). Бактерии попадают в почву с испражнениями человека и животных, их споры сохраняются в ней неопределенно долго. Патогенные мо, дл которых почва – вторичный резервуар (возб. Сибирской язвы) – попадают в почву с фекалиями человека и животных, прочими выделениями, а также трупами животных. При благоприятных условиях они могут сохраняться и размножаться длительное время в виде спор. Патогенные мо, попадающие в почву с выделениями человека или животных и сохраняющиеся в течение нескольких месяцев или недель - в эту группу входят различные споронеобразующие бактерии. Основные факторы, приводящие к быстрой гибели мо, - неспособность к спорообразованию и антагонистические свойства микрофлоры почвы Эпидемиологическое значение почвы состоит в том, что в ней, несмотря на антагонизм почвенной сапрофитной микрофлоры, возбудители инфекционных заболеваний могут достаточно продолжительное время сохранять жизнеспособность, вирулентность и патогенность. Так, в почве, особенно в ее глубоких слоях, сальмонеллы брюшного тифа могут выживать до 400 сут. В течение этого времени они могут загрязнять подземные источники водоснабжения и заражать человека. Достаточно длительное время в почве могут сохраняться не только патогенные микроорганизмы, но и вирусы. Особенно долго (20-25 лет) в почве сохраняются споры анаэробных микроорганизмов, которые постоянно встречаются в почве населенных мест. К ним относятся возбудители столбняка, газовой гангрены, ботулизма, сибирской язвы. Длительное пребывание в почве указанных патогенных микроорганизмов и их спор является причиной возникновения соответствующих инфекционных заболеваний при попадании в рану человека загрязненной почвы, употреблении загрязненных пищевых продуктов. Загрязненная почва может выполнять роль фактора передачи человеку возбудителей как антропонозных, так и зооантропонозных инфекций. Среди антропонозных - кишечные инфекции бактериальной природы (брюшной тиф, паратифы А и Б, бактериальная и амебная дизентерия, холера, сальмонелле-зы, эшерихиоз), вирусной этиологии (гепатит А, энтеровирусные инфекции - полиомиелит, Коксаки, ECHO) и протозойной природы (амебиаз, лямблиоз). К зооантропонозам, которые могут распространяться через почву, относятся: лептоспироз, в частности безжелтушная форма, водная лихорадка, инфекционная желтуха, или болезнь Васильева-Вейля, бруцеллез, туляремия, сибирская язва. Через почву могут передаваться также микобактерии туберкулеза. Особенно велика роль почвы в передаче глистных инвазий (аскаридоза, трихо-цефаллеза, дифиллоботриоза, анкилостомидоза, стронгилоидоза). Для указанных инфекций и инвазий характерен фекально-оральный механизм передачи, который для кишечных инфекций является ведущим, а для других -одним из возможных. Фекально-оральный механизм передачи инфекционных заболеваний через почву - многоэтапный процесс, характеризующийся последовательным чередованием трех фаз: выделение возбудителя из организма в почву; пребывание возбудителя в почве; внедрение возбудителя в видово-детерминированный организм биологического хозяина и сводится к следующему. Патогенные микроорганизмы или яйца геогельминтов с экскрементами больного человека или носителя инфекции или же больного животного (при зооантропонозных инфекциях) попадают в почву, в которой какое-то время сохраняют жизнеспособность, патогенные и вирулентные свойства. Находясь в почве, возбудители инфекционных заболеваний могут попасть в воду подземных и поверхностных источников, а оттуда в питьевую воду, с которой попадают в организм человека. Кроме того, из почвы возбудители могут попасть на овощи, ягоды и фрукты, на руки. Их распространяют также грызуны, мухи и другие насекомые. Санитарно-показательными микроорганизмамипочвыявляются: а) E. сoli (а также бактерии группы кишечной палочки (БГКП) - p. Citrobacter, p. Enterobacter, p. Klebsiella); б) Str. faecalis; в) C. perfringens. Эти бактерии имеют общий путь выведения с возбудителями кишечных инфекций (с фекалиями) и служат показателями фекальной загрязнённости почвы. 1. общее микробное число (омч) почвы - общее количество микроорганизмов в 1 г почвы. 2. коли-титр почвы, перфрингенс-титр почвы и др. (оценивают количество санитарно-показательных микробов почвы). коли-титр почвы – наименьшее количество почвы в граммах, в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка кишечной палочки – E.coli. перфрингенс-титр почвы - наименьшее количество почвы в граммах, в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка возбудителя газовой гангрены - C. perfringens. Методы определения. 1. Определение ОМЧ почвы: а) посев 10-кратных разведений почвы (1:10, 1:100 и т.д.) в чашки Петри на МПА (для бактерий) и на сусло-агар или среду Сабуро (для грибов);посев можно делать в глубину (1 мл) или на поверхность (0,1 мл) среды; б) инкубация посевов (48 час) при 24°С для грибов и при 37°С для бактерий; в) подсчет числа колонийдля каждого разведения; в) расчет микробного числа почвы (с учетом навески почвы, разведения, объема посева), зная, что 1 колония – это 1 клетка. 2. Определение коли-титра почвы: а) посев10-кратных разведений почвы на жидкую среду Кесслера (содержит желчь, лактозу, пептон, генциановый фиолетовый, который подавляет рост многих микробов, кроме кишечной палочки); б) инкубация при 37°С, 24 часа; в) пересев положительных проб (образование газа и диффузное помутнение) на среду Эндо иинкубацияпри 37°С, 24 часа; г) на среде Эндо E. coli образует тёмно-красные колонии с металлическим блеском; проводят микроскопическоеподтверждение колоний E. coli (из подозрительной колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют; под микроскопом видны мелкие грам"-" палочки); д) расчет коли-титра (с учетом разведения и навески почвы определяют количество почвы в граммах, в котором обнаружена клетка кишечной палочки). 3. Определение перфрингенс-титра почвы: а) почвенную суспензию прогревают 10-15 мин при 80°С для того, чтобы неспоровые бактерии не росли на среде; б ) посев 10-кратных разведений почвы на среду Вильсона-Блера и инкубация при 37 - 43° С, 3-18часили посев на среду Тукаева(молочная среда) и инкубация 3 – 4 часа; в) насреде Вильсона-Блера C. perfringensобразует чёрные колонии и газ разрывает среду, а на среде Тукаева наблюдается створаживание молока, а газ разрывает сгустки казеина и вытесняет в верхнюю часть пробирки; наличие C. perfringensподтверждается микроскопически (готовят мазок, окрашивают по Грамму и микроскопируют, под микроскопом видны крупные грам «+» палочки) г) расчет перфрингенс-титра (с учетом разведения определяют количество почвы в граммах, в котором обнаружена клетка C. perfringens).Перфрингенс-титр определяется максимальным разведением почвенной суспензии, при посеве которого образуются на среде Вильсона-Блера характерные черные колонии. 49. Микрофлора воздуха. Воздух как фактор передачи респираторных инфекций. Санитарно-показательные мо. Методы оценки санитарно-бактериологического состояния воздуха. В воздух попадают мо из почвы, воды, а также с поверхности тела, из дыхательных путей и с каплями слюны человека и животных. Большее количество мо присутствует в воздухе крупных городов, меньшее – в воздухе сельской местности. Особенно мало мо в воздухе над лесами, горами и морями. Воздух рассматривают как фактор передачи респираторных инфекций, при которых возбудитель передается воздушно-капельным путем или воздушно-пылевым. Здесь обнаруживаются кокковидные и палочковидные бактерии, бациллы, клостридии, актиномицеты, грибы и вирусы. Для снижения микробной обсемененности воздуха проводят влажную уборку помещения в сочетании с вентиляцией и очисткой поступающего воздуха. Применяют аэрозольную дезинфекцию, обработку УФ-лучами. Санитарно-показательные мо: Staphylococcusaureus, Streptococcusviridans МБ методы оценки сан-бактериологического состояния возлуха: Седементационный метод – основан на принципе осаждения. Две чашки Петри с питательным агаром оставляют открытыми в течение 60 минут, после чего инкубируют при 37 градусах 1 сутки. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших в обеих чашках: менее 250 колоний – воздух чистый 250-500 колоний – загрязненный в средней степени Более 500 колоний – загрязненный Аспирационный метод является более точным. Посев производится автоматически с помощью специальных аппаратов. Примером может служить аппарат Кротова. Он устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через щель пластины, которая при этом вращается. Под пластиной находится чашка Петри. Т.о., происходит равномерное распределение мо по питательной среде. Расчет производят по формуле: Х= (а х 1000)/V, где а- количество выросших колоний V- объем пропущенного воздуха, дм3(л) 1000 – искомый объем, дм3(л) При исследовании воздуха стационаров осуществляют непосредственное выделение патогенных и условно-патогенных бактерий – возбудителей внутрибольничных инфекций. При выявлении возбудителей выявляют источники и пути распространения инфекции. Микрофлора воды. Санитарно-показательные мо. Методы оценки санитарно-бактериологического состояния воды. Поверхностные воды рек, озер, водохранилищ загрязняются сточными водами. Микробное загрязнение воды возрастает после обильных дождей и весеннего половодья. Проточные водоемы также обладают способностью к самоочищению. Утилизация органических отходов связана с деятельностью постоянно обитающих в воде мо (аутохтонная микрофлора). В пресных водоемах находятся различные бактерии: палочковидные (псевдомонады, аэромонады и тд.), кокковидные (микрококки), извитые и нитевидные (актиномицеты). На дне водоемов, в иле увеличивается количество анаэробов. При загрязнении воды органическими веществами появляется большое количество непостоянных представителей микрофлоры воды, которые исчезают в процессе самоочищения воды. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточными водами в озера и реки попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, энтеробактер, энтерококки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций, криптоспоридиоза и др.). Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный вибрион, легионеллы). В водоемах с высоким содержанием кислорода развиваются аэробные мо, активно окисляющие и минерализующие органическое вещество, вследствие чего патогенные бактерии лишаются источника питания и фактически не размножаются, а лишь сохраняют жизнеспособность. Санитарно-показательные мо: E. Coli и энтерококки Методы оценки: Титрационный (бродильный) метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенного количества воды на жидкие питательные среды накопления, подращивании БГКП при 37 градусах в последующим высевом на плотные питательные среды (среда Эндо), дифференциации выросших колоний и определение БГКП в 1 л воды. Метод мембранных фильтров. Суть метода заключается в фильтровании анализируемой жидкости через мембранные фильтры, задерживающие бактерии, после чего эти фильтры помещают на твердую питательную среду и подсчитывают выросшие на ней колонии бактерий. |