микробиология. коллоквиум 1 тема шпоры. 1. микробиологическая лаборатория и ее оборудование. Правила работы с микробиологической лабораторией
 Скачать 102.23 Kb.
|
|
1.микробиологическая лаборатория и ее оборудование. Правила работы с микробиологической лабораторией. Работать необходимо в халатах, шапочках и при необходимости масках. Вход без халата в лабораторию категорически запрещен В лаборатории запрещается принимать пищу На рабочем столе не должно быть ничего лишнего. Личные вещи хранят в специально отведенном месте. При попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности необходимо тщательно обработать это место дезинфицирующим раствором Хранение и уничтожение культур должны проводить специально обученные сотрудники, согласно инструкции. Движение культур внутри лаборатории необходимо регистрировать в рабочем журнале По окончании работы необходимо вымыть руки с мылом, а при необходимости дез. раствором Оборудование Термостат -аппарат в котором поддерживается постоянная температура для культивирования м/о. Оптимальная температура для размножения большинства бактерий является 37град. Термостаты бывают воздушным и водяными Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях. Холодильники. Используются в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин, сывороток и прочих биологически активных препаратов при температуре около 4°С. Центрифуга. Применяют для осаждения микроорганизмов, эритроцитов и других клеток. Сушилъно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Предназначен для стерилизации лабораторной посуды сухим жаром. Автоклав (паровой стерилизатор) предназначен для стерилизации паром под давлением питательных сред и уничтожением м/о 2.устройства микроскопа, правила, уход
3.Техника приготовления мазков, препаратов 1. На стекло петлей нанести каплю воды, внести в нее культуру и растереть, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. Диаметр мазка должен быть равен 1 см. 2. Высушить на воздухе. 3. Зафиксировать: предметное стекло мазком вверх 3 раза провести через пламя горелки. 4. Окрасить. 4.Простые и сложные методы окраски При простой окраске используется один краситель -м/с, водным фуксином, окраска по Бурри. Цель: выявление наличия микробов в патологическом материале. Изучение: форма бактерий, их расположение в мазке Сложные методы окраски(используются несколько красителей) -окраска по граму (основной метод окраски в бактериологии),Ожешки, нейссера, Циля-Нильсена, Бурии-Гинса -определение типа строения клеточной стенки 5.Окраска по Бурри 1. На стекло петлей нанести каплю спиртового раствора туши 2. Внести туда культуру и растереть 3. Высушить 4. Не фиксировать! 5. Микроскопировать с объективом х40 На черном или сером фоне видны неокрашенные клетки бактерий 6.окраска по Граму
7. Окраска по Циль-Нильсену. (для кислотоустойчивых бактерий)Возбудители туберкулеза и проказы.Особенностью микробов этой группы является то что они плохо воспринимают окраску. Для того чтобы окрасить кислотоустойчивые м/о приходится применять более концентрированные растворы красителя в подогретом состоянии с протравами и удлиненным сроком окраски.На фиксированный препарат – мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течение 3-5 мин. Снять бумагу, промыть мазок водой. Нанести 5 % раствор серной кислоты на 3-5 сек до обесцвечивания. Промыть водой. Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин. Промыть водой, высушить, микроскопировать. При окраске препаратов кислотоустойчивые бактреи окрашиваются фуксином в рубиново-красный цвети не обесцвечиваются кислотой Не кислотоустойчивые бактерии, а также элементы ткани и лейкоциты под действием кислоты становятся бесцветными и приобретают цвет дополнительного красителя (синий) 8.Окраска по нейссеру. 1.Фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2-3 мин 2.Нанести раствор люголя 10-30 сек 3.промыть водой 4.нанести водный раствор везувина или хризоидина 0,5-1 мин 5.промыть водой, высушить 6.микроскопировать с объективом 90 Зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет, цитоплазма клеток в желтый 9.Окраска по бурри-гинсу Некоторые виды бактерий продуцируют слизистое вещество, которое концентрируясь вокруг тела микробной клетки, образует капсулу. Данная окраска служит для выявления у бактерий капсул. 1.На середину предметного стекла наносят капельку туши и смешивают ее петлей с каплей культуры. 2.Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть и фиксируют над пламенем горелки. 3.Затем промывают дистиллированной водой и красят 5-10 мин фуксином. 4.Затем вновь мазок промывают водой и высушивают. При микроскопии бактерии окрашиваются в красный цвет, фон черный, а капсулы неокрашенные. 10. окраска по ожешко Этот метод служит для выявления у бактерий спор. Споры имеют вид круглых или овальной формы образований, находящихся в теле микробной клетки. Различают три вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное – спора находится в центре тела микроба, субтерминальное – спора расположена ближе к одному из ее концов, терминальное – спора располагается на конце палочки. 1. На высушенный нефиксированный мазок наливают 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2мин над пламенем горелки до закипания. 2. Остывший препарат промывают водой, высушивают и фиксируют над пламенем спиртовки. 3. Затем на мазок наносят раствор фуксина Циля и нагревают над пламенем спиртовки до отхождения паров. 4. После того как препарат остынет, обесцвечивают его 5% раствором серной кислоты, промывают водой и докрашивают метиленовым синим в течении 3-5 мин, затем промывают водой и подсушивают. Споры, окрашенные фуксином имеют красный цвет, тело микробной клетки – синий цвет. 13.медицинская микробиология и предмет ее изучения. Задачи медицинской микробиологии Микробиология-наука изучающие м/о м/о-организмы невидимые невооруженном взглядом (микроскопический объект=микроб): вирусы, прионы, бактерии, хламидии, риккетсии, простейшие, грибы микробы: -болезнетворные(патогенные); -условно-патогенные Задачи мед микробиол: изучение структуры и свойств патогенных микробов изучение взаимоотношения микроба с организмом человека(инфекции), а именно: патогенеза. диагностики. лечении. Профилактики 14. Основоположники микробиологии как науки: Заслуги Л. Пастера: 1) Открытие патогенных организмов -стафилококк -пневмококк -клостридии 2) Приготовление живых (ослабленных) вакцин -бешенство -сибирская язва 3) Микробная природа брожения 4) Микробная природа болезней шелковичных червей, вина и пива 5) Невозможность самозарождения микроорганизмов 6) Стерилизации сухим жаром и пастеризация (нагревание до 56-65 град. с последующим быстрым охлаждением) Заслуги Р. Коха: 1) Открытие патогенных микроорганизмов - сибиреязвенная палочка - холерный вибрион (запятая Коха) - туберкулезная палочка (палочка Коха) 2) Разработка основных правил идентификации патогенных микробов как этиологических агентов = триада Генле-Коха а) выделить данный микроб от больного б) получить чистую культуру в) заразить ею лабораторных животных с последующим развитием у него схожей клинической картины 3) Плотные питательные среды 4) Анилиновые красители 5) Иммерсионный объектив 6) Микрофотография 7) Стерилизация текучим паром 15. Д. Ивановский (1864-1920) -открытие вирусов -сформулировал теорию вирусных инфеций Открытие вирусов сыграло огромную роль в развитии ряда научных дисциплин: биологии, медицины, ветеринарии и фитопатологии. Оно позволило расшифровать этиологию таких заболеваний, как бешенство, оспа, энцефалиты и многих других. Ивановский занимался также изучением процесса спиртового брожения и влияния на него кислорода, хлорофилла и других пигментов зеленых листьев, участвующих в процессе фотосинтеза. Известны также его работы и по общей сельскохозяйственной микробиологии. Ивановский был дарвинистом, подчеркивал зависимость организмов от условий окружающей среды и доказывал эволюционное значение этого факта. В дальнейшем провел научное исследование воздушного питания растений, сосредоточив внимание на изучении состояния хлорофилла растений, значении каротина и ксантофилла для растений, устойчивости хлорофилла к свету в живом листе и второго максимума ассимиляции. Эти исследования проводил совместно с М. С. Цветом – создателем метода адсорбированного хроматографического анализа. 16. Работы Мечникова и Эрлиха, их значение: И. Мечников (1845-1916): 1) основоположник клеточной теории иммунитета. 2) Автор учения о фагоцитозе. 3) Занимался вопросами профилактики холеры и других инфекционных заболеваний П. Эрлих (1854-1916) немецкий химик, бактериолог, иммунолог: 1) Предложил гуморальную теорию иммунитета 2) Основоположник химиотерапии инфекционных болезней 3) Разработал препарат 606 (сальвасаран) для лечения сифилиса 17. Классификация микроорганизмов: Отдел => Класс=> Порядок => Семейство => Род => Вид => Варианты Признаки исп. для таксономич. класиф.: Морфологические: 1) Величина, форма микроорганизма, расположение на препарате 2) Особенности ультраструктуры: наличие спор, капсул, жгутиков Тинкториальные: отношение к красителям. Культурные: особенности роста на жидких и плотных питательных средах: характер колоний, скорость роста и т.д. Особенности питания: 1) Углеродное = ауто- или гетеротрофы 2) Азотные 3) Условие питательных веществ ауксотрофами и прототрофами Тип дыхания: аэробный, анаэробный, факультативно- анаэробный, микроаэрофильный. Биохим. св-ва: способность ферментировать углеводы, белки, жиры. Антигенные свойства: наличие антигенов у микроорганизма. Химический состав: состав и содержание основных сахаров, аминокислот, белков. Св-ва генома: величина, объем, молекулярная масса генома, степень гомологии с другими геномами, способность к реабилитации, наличие внехромосомных факторов. Чувствительность в бактериофагам: в патологии человека ведущую роль играет хемосинтезирующие микроорганизмы. В зависимости от источников азота хемотрофы подразделяются на прототрофы – микроорганизмы, способные синтезировать все необходимые им органические соединения (углеводы, АК, и др.) из глюкозы и солей аммония. Ауксотрофы – микроорганизмы, не способное синтезировать какое-либо из указанных соединений. Они ассимулируют эти соединения и другие факторы роста в готовом виде из окружающей среды или организма хозяина. Принципы классификации бактерий: Бактерии с тонкой клеточной стенкой, грамотрицательные (протеобактерии и др.) Бактерии с толстой клеточной стенкой, грамположительные Бактерии без клеточной стенки – микоплазмы 18. Морфология бактерий: 1) имеющие определенную форму - круглые (кокки) а) идеальный шар – стафилококки б) овальные – стрептококки в) ланцетовидные – пневмококки г) бобовидные – нейссерии 2) не имеющие определенной формы а) микроплазмы 19. Строение бактериальной клетки: Органеллы бактериальной клетки (обязательные): Нуклеоид – циркулярно замкнутая суперспилизованная двухцепочная молекула ДНК = «бактериальная хромосома» Цитоплазма – аналогичная цитоплазме клетки Цитоплазматическая мембрана – аналогичная ЦПМ эукариотической клетки, но без стеринов (стерины содержатся в ЦПМ лишь у микоплазм) Клеточная стенка - играет формообразующую роль - предохраняет клетку от осмотического лизиса - имеет два типа строения (грамположительная и грамотрицательная КС) - отсутствует у микоплазм 5) Рибосомы – аналогичны рибосомам эукариотической клетки, но меньшей молекулярной массы Мезосомы = впячивания ЦПМ: (синтез АТФ) - центр энергетического метоболизма - участие в клеточном делении Органеллы бактериальной клетки (необязательные): Плазмиды = ДНК аналогично нуклеоиду строения, но меньшего молекулярного веса; в одной клетке может быть несколько копий одной плазмиды Цитоплазматические включения – как правило, запасы питательных веществ; н-р, зерна волютина – полифосфаты, кристаллы серы Защитные приспособления -спора (эндоспора) - капсула 4) Жгутики - органоиды движения 5) Реснички (пили, фибрин) = полые белковые (белок пилин) трубочки на поверхности клетки - общего типа – для адгезии на питательном субстрате - половые (конъюгативные) – для передачи ДНК от одной клетки к другой 20. Спора и спорообразование у бактерий Спора – покоящаяся форма, позволяющая сохранить наследственную информацию бактериальной клетки в не благоприятных условиях внешней среды. Функция – защита от: - неблагоприятных физико-химических факторов внешней среды - истощение питательной среды Строение – ДНК, окруженная многослойной оболочкой, в т.ч. пептидогликановый (кортекс) Место образования: - внешняя среда (не в организме человека) - искусственная питательная среда Факторы, обуславливающие термоустойчивость: - практически полное отсутствие свободной воды - повышенная концентрация кальция - наличие дипиколиновый кислоты - особое строение белка - особое строение пептидогликана кортекса Стадии образования споры: Формирование спорогенной зоны Образование проспоры Образование кортекса и диппиколиновой к-ты Образование внешней оболочки, содержащий соли кальция Отмирание вегетативной части клетки Стадии прорастания споры: Набухание Активизация берментов Разрушение плотных оболочек Выход ростовой трубки Синтез клеточной стенки 21. Капсулы бактерий Макрокапсула – выраженный слизистый слой, покрывающий КС и имеющий фибрилярное строение Образуется в человеческом организме; питательной среде, содержащей сыворотку крови. Состоит из: чаще – полисахаридов, реже – антител Функция состоит в защите бактериальной клетки от: фагоцитов, антител Бактерии обладающие капсулой особенно выражена у: клебсиелл, пневмококка, бацилл сибирской язвы. Выявление: 1) в мазке у патологического материала – любым методом окраски. 2) специальные методы окраски. Микрокапсула – тесно прилегающие к КС мукополисахаридние фибриллы. Образуется в человеческом организме; питательной среде, содержащей сыворотку крови. Состоит из мукописахарид. Функция состоит в защите бактериальной клетки от: фагоцитов, антител Многие бактерии обладают капсулой. Выявить можно при помощи электронно-микроскопического исследования 22.подвижностьбактерий и методы ее изученияОрганы движения бактерий-жгутики-осевая нитьТип движения жгутиков:-вращательныйВыявление жгутиков-косвенное (по факту подвижности бактерий)-прямое (специальные методы окраски, фазово контрастная микроскопия (у лофотрихов), электронная микроскопия)Классификация бактерий по числу и расположению жгутиков |
