А. Левенгука, Л. Пастера, Р. Коха. 2 Открытия Открытия А. Левенгука, Л. Пастера, Р. Коха, И. Мечникова, п эрлиха
 Скачать 6.07 Mb.
|
|
Наиболее точная дифференциация осуществляется с использованием моноклональных антител (МКА), распознающих только одну антигенную детерминанту. Основными видами бактериальных антигенов являются: - соматические или О- антигены (у грамотрицательных бактерий специфичность определяется дезоксисахарами полисахаридов ЛПС); - жгутиковые или Н- антигены (белковые); - поверхностные или капсульные К- антигены. Выделяют протективные антигены, обеспечивающие защиту (протекцию) против соответствующих инфекций, что используется для создания вакцин. Суперантигены (некоторые экзотоксины, например- стафилококковый) вызывают чрезмерно сильную иммунную реакцию, часто приводят к побочным реакциям, развитию иммунодефицита или аутоиммунных реакций. Многообразие понятия “антиген”. Антигены разделены на полные (иммуногенные), всегда проявляющие иммуногенные и антигенные свойства, и неполные (гаптены), не способные самостоятельно вызывать иммунный ответ. Гаптены обладают антигенностью, что обусловливает их специфичность, способность избирательно взаимодействовать с антителами или рецепторами лимфоцитов, определяться иммунологическими реакциями. Гаптены могут стать иммуногенными при связывании с иммуногенным носителем (например, белком), т.е. становятся полными. За специфичность антигена отвечает гаптенная часть, за иммуногенность- носитель (чаще белок). Иммуногенность зависит от ряда причин (молекулярного веса, подвижности молекул антигена, формы, структуры, способности к изменению Антигенность белков является проявлением их чужеродности, а ее специфичность зависит от аминокислотной последовательности белков, вторичной, третичной и четвертичной (т.е. от общей конформации белковой молекулы) структуры, от поверхностно расположенных детерминантных групп и концевых аминокислотных остатков. Коллоидное состояние и растворимость- обязательные свойства антигенов. Специфичность антигенов зависит от особых участков молекул белков и полисахаридов, называемых эпитопами. Эпитопы или антигенные детерминанты- фрагменты молекул антигена, вызывающие иммунный ответ и определяющие его специфичность. Антигенные детерминанты избирательно реагируют с антителами или антиген- распознающими рецепторами клетки. Структура многих антигенных детерминант известна. У белков это обычно фрагменты из 8- 20 выступающих на поверхности аминокислотных остатков, у полисахаридов- выступающие О- боковые дезоксисахаридные цепи в составе ЛПС, у вируса гриппа- гемагглютинин, у вируса иммунодефицита человека- мембранный гликопептид. Эпитопы качественно могут отличаться, к каждому могут образовываться “свои” антитела. Антигены, содержащие одну антигенную детерминанту, называют моновалентными, ряд эпитопов- поливалентными. Полимерные антигены содержат в большом количестве идентичные эпитопы (флагеллины, ЛПС). Основные типы антигенной специфичности (зависят от специфичности эпитопов). 1.Видовая- характерна для всех особей одного вида (общие эпитопы). 2.Групповая- внутри вида (изоантигены, которые характерны для отдельных групп). Пример- группы крови (АВО и др.). 3.Гетероспецифичность- наличие общих антигенных детерминант у организмов различных таксономических групп. Имеются перекрестно- реагирующие антигены у бактерий и тканей макроорганизма. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АГ::!!! а. Антиген Форсмана- типичный перекрестно- реагирующий антиген, выявлен в эритроцитах кошек, собак, овец, почке морской свинки. б.Rh- система эритроцитов. У человека Rh- антигены агглютинируют антитела к эритроцитам обезьян Macacus rhesus, т.е. являются перекрестными. в. Известны общие антигенные детерминанты эритроцитов человека и палочки чумы, вирусов оспы и гриппа. г. Еще пример- белок А стрептококка и ткани миокарда (клапанный аппарат). 4.Патологическая. При различных патологических изменениях тканей происходят изменения химических 40 Материал составлен by zOrg, для экзамена по микробиологии ИвГМА 2015 год соединений, что может изменять нормальную антигенную специфичность. АГ-вирусов: вирусный АГ м.б.стр-м и нестр-м. Стр-е пред-ны в-ми ,кодируемые н.к. и Кл-ми метаболитами, захват-ми вирионами при почковании. Нестр-е АГ-не входят в сос-в вириона,а образ-ся в инфиц.кл.на разл-х этапах репродукции в.У вирусов выд-т:ядерные,кА-е,суперкап-е АГУ параи ортомиксовир-в им-ся повер-е V-АГ-гемаглют- н и нейроменидаза. Методы определения смотри ниже в серологических реакциях. 27. Серологическия реации. Механизм реакций, Реакции двухвалентных и одновалентных антител с антигенами. Практическое применение. В микробиологической практике нашли широкое применение реакции взаимодействия антигенов с иммунными сыворотками. Эти реакции получили название серологических, так как для их постановки используют сыворотку (serum), содержащую антитела. Данные антитела появляются в сыворотке в ходе иммунного ответа макроорганизма на внедрение в него микроорганизмов, несущих определенные чужеродные антигенные комплексы. Однако следует особо подчеркнуть тот факт, что для обнаружения проникновения и колонизации микробами макроорганизма используют не только сыворотки, полученные от больных, но также определяют наличие антигенов микроорганизмов, что дает возможность идентификации возбудителей инфекционных заболеваний. Существует много разновидностей этих реакций, но в настоящем пособии будут представлены лишь основные из них, поскольку некоторые реакции, несмотря на их высокую информативность, применяются сейчас уже гораздо реже, чем это было ранее, например – определение опсонического индекса (в диагностике бруцеллеза, сыпного тифа и др.), реакция Исаева-Пфейффера (в диагностике холеры) и др.. Связано это в первую очередь с появлением новых методов обнаружения антигенов, антител и их комплексов, что позволяет быстро и точно выполнять идентификационные мероприятия и ставить диагноз заболевания с использованием современного лабораторного оборудования. ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОМИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ Все иммуномикробиологические методы (ИМ) можно подразделить на 3 группы: I. ИМ, основанные на прямом взаимодействии антигена с антителом (реакции агглютинации, преципитации, гемагглютинации, иммобилизации и др.); II. ИМ, основанные на опосредованном взаимодействии антигена с антителом (реакции непрямой гемагглютинации, коагглютинации, латекс-агглютинации, угольной агломерации, бентонит-агглютинации, связывания комплемента и др.); III. ИМ с использованием меченых антител или антигенов (метод флюоресцирующих антител, иммуноферментный и радиоиммунный анализы, спиниммунологический и другие методы). При протекании реакций в иммунологических методах характерно наличие следующих фаз: 1) специфическая (невидимая) фаза – связывание детерминантной группы (эпитопа) антигена с паратопом - активным центром иммуноглобулина; 2) неспецифическая (видимая) фаза – образующийся комплекс антиген+антитело утрачивает растворимость и выпадает в осадок в виде хлопьев. Однако это явление возможно лишь в электролитной среде, например в 0,85% растворе натрия хлорида. Р-я агглют-ии: Аггл-я-наз.склеивание микробов или др.кл.при возд-и на них спец-х АТ в прис-ии электролита.Р-я аггл-ии быв-т спец.и неспец. 1)Спец.-прим.для диаг-ки многих ифн-х забол-й.Быв-т 2 типов: а)Опред-е вида или типа микроба(р-я груббера) б) обнар-е АТ в сыв.кр.больного(Р-я Видаля). Р-я грубера –став-ся для обнар-я неизв-х АГ с пом.изв-х АТ. Выд-т 2 р-ии груббера: 41 Материал составлен by zOrg, для экзамена по микробиологии ИвГМА 2015 год 1)Ориен-я р-я на стекле:стяв-ся когда болезнь м.б.выз-на раз.видами микробов,для облег-я работы ставят проверено ориен-ю р-ю(при лаб.диаг.бюш.тифа,паратифов)на пред.ст.наносят сыв.,развед-ю 1:10 или 1:25,разв-т в физ.р-ре,покач-т ст.в те.2-3мин.,до появ-я агглют-и.Набл-т за появ-м зерен аглютината в кап-х. 2)развер-я р-я Грубера:ставят с 1 сыв.,реагир-й препол-но в ориен-й р-ии.(ставят для окон-йт идентиф-ии и опред.титра)для вып.данной р-ии надо взять аггл.сыв.с указанным титром.Из основного развед-я аггл.сыв.готовят ряд послед-х двукрат-х разв-й сыв-ки до титра,берут ряд проб-к ,в т.ч.и контр-е,во все вносят по 1 мл физ.р-ра,затем в 1 пр.вносят 1 мл осн-го рзв-я аггл.сыв.,после из 1 проб.берут 1 мл сыв.и переел-т во 2-ю и т.д.,и титруем до ого разв-я кот.б.указан на ампуле После пригот-я сыв.в каждую прою-ку вносят взвесь микробов,встряхивают,в тер-т на 18-20ч.Р-я счит.+если аггл-я микробов наст-т при разв-ии сыв.от 2\3титра и до ее окон-гог титра. Р-я кастеллани-р-я истощения-для получ.моновал.сыв.-устранить групповую аггл-ю можно,удалив из сыв.АТ в отнош-е АГ,явл-ся общими для гомолог.микрба.Это дост-ся путем смешивания густой взвеси микробов и сыв.,дающих групп.аггл-ю.,что ведет к адсорб-ии на их пов-ти АТ. Р-я Видаля-для диаг.брыш.тифа и всех видо в тифов(для обнар-я любого инф-го забол-я).Исп-т:исслед.сыв.,0,85% р- р NaCl ,АГ-диаг-м.Диаг-м-взвесь в р-ре убитых микробов,сохр-х свою АГ стр-ру.Сначала гот-т осн-е разв-е в зав-ти от титра,затем дел-т серию разв-й путем послед-го преноса из 1 проб.в др.1 мл.В контр-й проб.вносят изотон-й р-р NaCl,затем в каждую проб.вносят микробы,проб.встряхивают и в термостат.Р-я счит.+ если аллг-я выражена не менее 2-мя ++. Р-я преципитации:для диаг-ки ряда инф.забол-й б.и вирусов:сиб.язвы,чумы,натур.оспы,полимиелита. К р-ии прецип.отн-ся АГ-мелка частица(ДНК,б.,лек-во,яд)при доб-ии АТ проис-т помут-е р-ра,только в зоне эквив-ти.Вып-е нераствор-гог комплекса:АГ-АТ в виде осадка набл-ся при эквив-х соотн-х ингредиента. 1)Р-я кольцо прец-ии-еси на столбик с АТ осторожно наслаив-ть АГ,то на грание обаз-ся кольцо(осторожно насл-ть для попад-я в зону экв-ти)-узкая проб-ка вносит 0,2мл прецмп.сыв-ки,пипеткой медл-но насл-т 0,1мл р-раАГ. Через 2-3 мин.в случае +р-ии на границе между сыв.и исслед.АГ появ-ся преципитат в виде белого кольца. 2)П-я пре-ии в агаре: Ча-ки залив.агаром,в кот.вырез-т несл.луночект на равном раст.др.от др.В центр вносят сыв.сод-ю АТ,в ост-е –АГ. На месте встречи АГ-АТ –мутные полоски-дуги прец-ии.Позв-т опред-ть токсигенность исслед.б.(напр.дифтер.палочку)с пом.антитоксич.сыв. 3)Р-я имунофлюоресценции:к АГ+АТ(меченые флюрохромом)-образ-ся светящийся комп-с-обнар-ся при люмин-й микроскопии.Цель:для почсчета лимф-в,для опред-я формы обьекта,локал-ии на среде тк. и т.д. Р-я связыв-я компл-та-исп-т компл-т кт.сод-ся в сыв.кр.морс.свинки.мГемолит-я акт-ть комп-та термолаб-на и посл- тью утрачена при прогревании сыв.в теч.30мин.при 56*С.При адсорб-ии комп-та на комп-се АГ-АТ его дейс-е прояв- ся в р-ии лизиса АГ.Для учета рез-в вводят гемолит-ю с-му. Она сост-т из взвеси эр-в барана в изотон.р-ре хлорина натрия и гемолит.сыв.кролика.Полож-я р-я –хар-ся здержкой гемолиза вслед-ии адсорб-ии комп-та с-мо АГ- АТ.отриц.р-я-хар-ся налич-м гемолиза,т.к.своб-й комп-т связ-ся с сис-й эр-ты барана-гемол-я сыв.кролика.РСК облад- т высокой чуст-тью и спец-тью,что позв-т ее исп-ть для серодиаг-ки многих забол-й,а также для выяв-я АГ в кр.боьного. Р-я Кумбса: Позв-т обнар-ть неполные АТ,блокир-е или тормозящие аглют.АТ.1)непрямой м.-уст.нал-е несвяз-х АТ в сыв.больного 2)прямой м.-уст-т нал-е в кр.больных АТ,связ-х с эр-митех-к апост-ки:1)опыткая проб-ка: эр-ты больного+антиглоб-я сыв. 2)контрольная:эр-ты+норм-я сыв.+антиглоб.сыв. 3)исслед.сыв.+эр-ты(без резус АГ)+Антиглоб.сыв. 28. Серологический метод дигностики инфекционных болезней. Современные приёмы сородиагностики. Иммунофлюорисцентный, иммуноферментный и радиационный анализ В микробиологической практике нашли широкое применение реакции взаимодействия антигенов с иммунными сыворотками. Эти реакции получили название серологических, так как для их постановки используют сыворотку (serum), содержащую антитела. 42 Материал составлен by zOrg, для экзамена по микробиологии ИвГМА 2015 год Данные антитела появляются в сыворотке в ходе иммунного ответа макроорганизма на внедрение в него микроорганизмов, несущих определенные чужеродные антигенные комплексы. Однако следует особо подчеркнуть тот факт, что для обнаружения проникновения и колонизации микробами макроорганизма используют не только сыворотки, полученные от больных, но также определяют наличие антигенов микроорганизмов, что дает возможность идентификации возбудителей инфекционных заболеваний. Существует много разновидностей этих реакций, но в настоящем пособии будут представлены лишь основные из них, поскольку некоторые реакции, несмотря на их высокую информативность, применяются сейчас уже гораздо реже, чем это было ранее, например – определение опсонического индекса (в диагностике бруцеллеза, сыпного тифа и др.), реакция Исаева-Пфейффера (в диагностике холеры) и др.. Связано это в первую очередь с появлением новых методов обнаружения антигенов, антител и их комплексов, что позволяет быстро и точно выполнять идентификационные мероприятия и ставить диагноз заболевания с использованием современного лабораторного оборудования. ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОМИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ Все иммуномикробиологические методы (ИМ) можно подразделить на 3 группы: I. ИМ, основанные на прямом взаимодействии антигена с антителом (реакции агглютинации, преципитации, гемагглютинации, иммобилизации и др.); II. ИМ, основанные на опосредованном взаимодействии антигена с антителом (реакции непрямой гемагглютинации, коагглютинации, латекс-агглютинации, угольной агломерации, бентонит-агглютинации, связывания комплемента и др.); III. ИМ с использованием меченых антител или антигенов (метод флюоресцирующих антител, иммуноферментный и радиоиммунный анализы, спиниммунологический и другие методы). При протекании реакций в иммунологических методах характерно наличие следующих фаз: 1) специфическая (невидимая) фаза – связывание детерминантной группы (эпитопа) антигена с паратопом - активным центром иммуноглобулина; 2) неспецифическая (видимая) фаза – образующийся комплекс антиген+антитело утрачивает растворимость и выпадает в осадок в виде хлопьев. Однако это явление возможно лишь в электролитной среде, например в 0,85% растворе натрия хлорида. 31.Р-я имунофлюоресценции.Имунофер.анализ,имуноблотинг: Имунофлюорес-й анализ-явл-ся экспресс-диаг-й,высокочувс-й. Выд-т 2 метода: 1)Прямой м.-(м.Кунса)- к исслед-й взвеси микробов,фиксир-й на стекле доб-т сыв-ку,меченую флюрохромом(изотиоцианит флуоресцеина),образ-ся комп-с АГ-АТ при освечение УФ дает ярко зел.цв. 2)непрямой м.-исп-т в осн-м диагн-е сыв.против к-л микроба,доб-е этой сыв.к используемой взвеси микробов выз-т образ-е комп-са АГ-АТ.Этот комп-с выяв-ся с пом.универ-й флуоресц-й сыв.,сод-й АТ гамма-глоб-й фракции кр.того вида жив.,от кот.была пол-на диагн-я сыв-ка. Свят-йся комп-с выяв-т при люминесцентом микроскопии. Непрямой м. можно исп-ть для выяв-я АТ в сыв.кр. Имунофер-й анализ: наиб.широко расп-й имунол-й метод. Выд-т неск.методов: 1)Прямой твердофазный ИФА: сыв.инкуб-т с АГ,фикс-м на тв.суб-те,после инкуб-ии АТ несвяз-ся с АГ удал-т многократным промыв-м.Далее вносят меченую фер-м антисыв.к АТ-м,связав-ся с АГ.Оценка рез-та:опред-т кол-во фер-та-маркера,кот.связ-н с АТ. 2)Конкурентный твердофазный ИФА:позв-т непоср-н регист-ть АГ с АТ,а не анал-ть 2-е его измен-я.Метод отл-ся высой чувс-тью-от 70-90% для разл-х возб-й.сущ-т в 2-х вар-х: а)с АТ-позит-й сыв.,т.е.в ней есть спец-е АТ к АГ,фикс-му на пов-ти твер.фазы микропланшетки.Мех-м:спец.тела в исслед-й сыв.связ-т с АГ,фиксир-й на тв.суб-те.Спец-е тела меченные фер-м не взаим-т со свя-ми АГ-сод-е маркера низкое. б)АТ-негативной сыв.(в ней нет спец.АТ к исслед-му АГ).Мех-м: неспецюАТ в исслед.сыв.не связ-т АГ,фиксир-е на тв.суб-те Спец-е АТ,меченые фер-м взам-т со связ-ми АГ-сод-е маркера высокое. Имуноблоттинг:метод идентификации Аг с пом.соов-х сыв.На практике прим-т для идентиф-ии Аг ВИЧ. Мех- м:сначала электрофорезом в полиакриловом геле выд-т Аг вируса,затем на полосу преципитата наклад-т 43 Материал составлен by zOrg, для экзамена по микробиологии ИвГМА 2015 год носитель(нитроцел-ю пленку)и продол-т электрофорез.После чего на пленку наносят сыв.пациента и инкуб-т.После отмывания несвяз-х АТ проводят ИФА-на пленку наносят Антисыв.к Ig чел-ка,меченую фер-м,и хромогенный суб- т,измен-й окраску при взам-ии с фер-м.При нал-ии комп-са АГ-АТ-антисыв-ка к Ig на носителя пов-ся окраш-е пятна. 29. Иммунопрофилактика, иммунотерапия и иммунокоррекция. Иммунотропные препараты. Вакцины и их виды. Анатоксины. Календарь прививок. Иммунотерапия- метод лечения, при котором осуществляется воздействие на иммунную систему: подавление иммунного ответа (иммуносупрессия), стимуляция ответа (иммуностимуляция), восстановление иммунодефицитов (иммунокоррекция). В прикладном, более узком смысле иммунотерапия использует специфические методы серотерапии (применение иммунных сывороток, иммуноглобулинов), вакцинотерапии (лечебные вакцины), иммунокоррекции (десенсибилизация и др.). Иммунопрофилактика - способ предупреждения инфекционных заболеваний путем создания искусственного специфического иммунитета. Выделяют вакцинопрофилактику (создание активного иммунитета за счет вакцин, антигенов) и серопрофилактику (пассивный иммунитет за счет введения в организм специфических антител - иммуноглобулинов). Иммуномодулирующая терапия. Способы иммуномодуляции условно можно разделить на методы иммуностимуляции и иммунодепрессии. Иммуностимуляторы. Иммуностимулирующей активностью обладают препараты тимуса и их синтетические аналоги, левамизол (декарис), цитокины, препараты адамантанового ряда, некоторые соли, природные соединения, полиэлектролиты. |