Бактериологические и серологические методы идентификации бактериальных инфекций
 Скачать 28.02 Kb.
|
|
Министерство образования и науки Российской Федерации Санкт – Петербургское государственное бюджетное Профессиональное образовательное учреждение «Медицинский колледж №3» РЕФЕРАТ По дисциплине «Микробиология» На тему «Бактериологические и серологические методы идентификации бактериальных инфекций» Выполнила: Студентка группы Л-37 Райкова Дарья Андреевна Проверила: Преподаватель микробиологии Иванова И. Ф. Санкт – Петербург 2021 Содержание Бак метод стр. 3 А) Питательные среды стр. 3 Б) Цель и манипуляции на всех этапах бак метода стр. 4 В) Антибиотикочувствительность стр. 5 Г) Фаготипирование стр. 5 Д) Изучение б/х и физилогических свойств микроорганизмов стр. 5 2. Серологические методы идентификации стр. 6 А) РА, РЛА стр. 6 1. Бак метод Бак метод состоит из трех этапов: 1 этап – получение изолированных колоний 2 этап – получение и накопление чистой культуры 3 этап – идентификация выделенной чистой культуры Цель бак метода – выделение и идентификация чистой культуры бактерий, определение количества м/о и их реакции на антибиотики. Длительность бак метода – 4-7 дней. А) Питательные среды Состав: органогены, микроэлементы, факторы роста. По консистенции: жидкие, полужидкие, плотные. По происхождению: натуральные, синтетические. По назначению: Общие (МПА, МПБ) Специальные: наколения, ЭДС, ДДС Транспортные ЭДС (элективно-дифференциальные среды) содержат элективный фактор (сдерживает рост сопутствующей флоры, не влияя на рост исследуемого м/о) и дифференциальный фактор. ДДС (дифференциально-диагностические среды) содержат только дифференциальный фактор, позволяющий дифференцировать м/о по их б/х активности. Культуральные свойства м/о: Величина Форма Консистенция Цвет Контур края Рельеф Поверхность Структура Б) Цель и манипуляции на всех этапах бак метода 1 этап – получение изолированных колоний Манипуляции: Макроскопическое изучение исследуемого материала Подготовка мат-ла к исследованию Микроскопия при необходимости Посев на среды накопления, ЭДС, ДДС методом механического разобщения Культивирование посева Пересев со сред накопления на ППС для получения изолированных колоний 2 этап – получение и накопление чистой культуры Манипуляции: Изучение культуральных свойств на ППС Изучение морфологических и тинкториальных свойств в характерной изолированной колонии Посев оставшегося мат-ла на скошенный агар для накопления чистой культуры Культивирование 3 этап – идентификация выделенной чистой культуры Манипуляции: Оценка роста на скошенном агаре Определение чистоты накопленной культуры Посев на определение б/х активности Посевы для определения чувствительности к антибиотикам и бактериофагам Культивирование Учет результатов и заключение Чистая культура – совокупность м/о одного вида, имеющих одинаковые морфологические и б/х свойства. Колония – потомство одной микробной клетки. Штамм - чистая культура вирусов, бактерий, изолированная в определенное время и в определенном месте. В) Антибиотикочувствительность Определяется методами серийных разведений и диско-диффузным. Диско-диффузный метод: Посев чистой культуры «газоном» Наложение стандартных дисков с а/б на поверхность агара Культивирование Заключение по зонам задержки роста м/о с помощью таблиц Антибиотикорезистентность: а) Первичная (обусловлена отсутствием у м/о структуры, на которую направлено действие а/б) б) Вторичная (формируется путем мутации) Г) Фаготипирование Определение чувствительности выделенной чистой культуры к видовым или типовым бактериофагам. Производится посев чистой культуры «газоном», далее, по методу Фишера, чашка Петри делится на сектора, в каждый из которых капается определенный бактериофаг. Учет результатов – по наличию стерильного пятна. Д) Изучение биохимических и физилогических свойств микроорганизмов Экзотоксины – высокоядовитые белки, термолабильные, являются сильными АГ, высоковирулентные. Эндотоксины – липополисахариды, термостабильны, слабые АГ, обладают общетоксическим действие. Анатоксины – получают из экзотоксинов под действие формалина, применяют для иммунизации. Ферменты вирулентности – признаки, кот определяют патогенность и вирулентность. Значение – по наличию факторов вирулентности патогенные м\о можно отличить от непатогенных. Гиалуронидаза – разрушает гиалуроновую к-ту межклеточного вещества соединительной ткани Нейронимидаза – разрушает нейраминовую к-ту Лецитиназа - разрушает лецитин мембран Коагулаза – свертывает плазму крови Серологические методы идентификации Серологическая реакция – результат взаимодействия Аг с Ат , который проявляется как в условиях плотной среды, так и в жидкой. Аг - чужеродные для организма органические вещества, на введение которого организм отвечает развитием иммунологических реакций. Ат – специфические белки крови (иммуноглобулины) Иммунный комплекс – взаимодействие гомологичных Аг и Ат и компонентами комплемента. Специфичность Ат – способность вступать во взаимодействие с Аг, аналогичным тому, кот индуцировал их образование. Специфичность Аг – способность связываться с активным центром Ат. А) РА, РЛА РА (реакция агглютинации) - склеивание и выпадение в осадок корпускулярных Аг, под действием Ат в присутствии электролита. РЛА (реакция латекс агглютинации) - принцип аналогичен РНГА (используют сенсибилизированные АГ или АТ, эритроциты человека или животных), применяют сенсибилизированные частицы полистирольного латекса, которые в присутствии гомологичного реагента склеиваются. Реакция агглютинации (РА) оценивается в крестах в зависимости от степени просветления жидкости и получившегося осадка : ++++ — полное просветление раствора, появление осадка в виде зонтика, который при встряхивании разбивается на хлопья; +++ — слегка подкрашенная жидкость; ++ — мутная жидкость, незначительный осадок; + — отрицательная реакция, мутная жидкость без осадка, либо осадок разбивается равномерно Спонтанная агглютинация наблюдается при суспендировании бактерий, которые находятся в R-форме, в физиологическом растворе и при нагревании. |