Контрольная микробиология. Базовый признак, используемый для классификации микроорганизмов тип клеточной организации по восходящей вид, род, триба или колено, семейство, порядок, класс, отдел, царство
 Скачать 64 Kb.
|
|
Б1. 1.Таксономия-раздел систематики, изучающий принципы классификации организмов Искусственная(объединяет организмы в группы на основе сходства их важнейших свойств) Естественная систематика(конечная цель – объединение родственных форм, связанных общностью происхождения и установление иерархического соподчинения отдельных групп.) Базовый признак, используемый для классификации микроорганизмов – тип клеточной организации. по восходящей: вид, род, триба или колено, семейство, порядок, класс, отдел, царство. при необходимости вводят – подтриба или подколено, подсемейство, подпорядок, подкласс, подотдел. В основе таксономии микроорганизмов лежат след.свойства:Морфологические(общие критерии: величина, форма, агрегация, наличие капсулы, эндоспор, жгутиков ) и тинкториальные (способность окрашиваться красителями .по Граму: Грамположительные, Грамотрицательные);подвижность(скользящие бактерии(за счет волнообразных сокращений тела), плавающие(движение обеспечивают жгутики или реснички));способность к спорообразованию;физиологическая активность(по способу питания, по типу получения энергии, по отношению к кислороду(аэробные, анаэробные и факультативные));биохимические свойства; антигенные свойства (родоспецифичные, видоспецифичные,сероватоспецифичные);чувствительность к бактериофагам; химический состав;генетическое сродство. 2.Большинство способов основано на использовании диф.диагностики сред, включающих различные индикаторы; способность к ферментации; оценивают по изменению окраски среды вследствие образования кислот,вызывающих изменение окраски индикатора; пестрый ряд – применяют среды Гиса(МПБ, индикатор, углеводы и тд, желтый →красный); стеклянные поплавки для определения способности микроорг-в ферментировать углеводы с образованием кислоты и газа; расщепление белков – нек-е бактерии проявляют протеолитическую активность, выделяя протеазы, катализирующие расщепление белков;образование аммиака(проводят посев в МПБ, закрепляют полоску лакм.бумаги,бумага синеет);образование индола и сероводорода(посев в МПБ,бумажки пропитывают щавелевой кислотой,ацет.свинца.индол-краснеет, сероводород – чернеет.) 3.Цель:идентификация исслед-й культуры и определение ее а/бграммы.Отмечают хар-р роста выделенной ч.культуры.Визуально ч.культура хар-ся однородным ростом.При микроскопическом исслед. окрашенного мазка,приготовленного из такой культуры,в нем обнаруж. морфологические и тинкториально однородные клетки.Проводят посев культуры на «пестрый ряд»:полужидкие среды Гиса с индикатором ВР,глюкоза,лактоза,манит и МПБ.Основой изучения б/х-х св-в мо с целью их идентификации является определение промежуточных и конечных продуктов метаболизма.Посев исслед. культуры в столбик полужидкого агара-позволяют определить отношение к молекулярному О2.Определение а/бграммы диско-диффузным методом. Б2. 1.Вид-популяция мо,обладающих в стандартных условиях,сходными фенотипич. и генотипич. хар-ми.Штамм-культура мо,выделенная из определенного источника(организм,окр. среда).Клоном назыв. культуру мо,полученную из 1 материнской клетки. Многие виды бактерий подразделяются по одному признаку на биолог. варианты-биовары. Биовары, различающиеся по антигенным св-ам называются сероварами,по чувствительности к фагу- фаговарами. 2.Принцип получ. ч/к-разобщение микробных Кл.Способы разоб-я:а)механ-е:-посев «штрих с площадкой»;-метод секторных посевов;-метод Дригальского;-метод Коха;б)химич-й:-обработка исслед. материала хим. в-вами,учитывая физиологию;-добавление антимикробных в-в в пит.среды;в)биологический:-заражение лаб животных;-прогревание исслед. материала при выделение спорообразующих бактерий;-культивирование при ↓t. 3.Печь Пастера(стерилизация сухим жаром)-основан на бактерицидном действии нагретого до 165-180С воздуха.Сух. жаром стерилизуют стеклянную посуду:чашки Петри,пробирки,пипетки. Б3. 1.Капсула-аморфное,сильно обводненное в-во.М.б. макро и микро.По хим. природе представлена большим кол-вом воды и полисахаридов.Ф-ции:-защита от фагоцитоза,а/б;-адгезия;-антигенная.Бактерии могут образовывать капсулоподобное в-во-липидно-полисахаридное в-во,не прочно связано,явл. продуктом метаболизма самой кл.Д/выяв. капсул окраска по Зырянову. 2.Пит. средой назыв. среды,содержащие различные соединения сложного или простого состава,которые применяют д/размножения бактерий в лаб. условиях.Требования:должна содержать все необходимые д/размнож. определенных мо в-в в легкоусвояемой форме,иметь оптимальную влажность,вязкость,рН,быть изотоничной и по возможности прозрачной.Каждую среду стерилизуют. 3.Стерилизация-полное уничтожение вегетативных форм мо и их спор.Дезинф-ия-уничтож. патогенных д/чела мо с помощью хим. в-в(хлорамин 0,5-5%,лизол 3-5%). Б4. 1.Споры-сохран. генетич. информации при неблаг. условиях.Оно хар-но д/палочковидных бактерий.Оболочка споры многослойна,сост. из белков,липидов,кальция.В центре споры уплотненная цитоплазма и нуклеоид. 2.Ферменты:-регуляторные-воспринимают метаболические сигналы и в соответсвии с ними измен. свою каталитическую активность;-эффекторные (оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы).Определенный субстрат в среде вызывает синтез ферментов,обеспечивающих его катаболизм-идуцибильные ферменты. Ферменты,синтезируемые вне зависимости от условий среды-конститутивные ф. 3.Химический:К чашке прикрепляют пакетик со смесью хим.в-в(пирогаллол, К2СО3,тальк).герметизируют.В-ва вступают в реакцию за счет выделения конденсата, что способствует поглощ.О2,и выделением СО2.ПРИБОРЫ:ч.Петри.МЕТОДЫ:Битера.СРЕДЫ:Тиса и др. Б5. 1.Жгутики-из белка флагелина.Ф-ция:-движение;-антигенные с-ва. Выявление:-Прямой метод-окраска по Лейфсону(оптическое увеличение размеров жгутика),определение кол-ва и расположение;-косвенный-по подвижности бактерий.Расположение:-по всей поверхности-перетрихии;-один толстый жгутик-монотрихии;-политрихии-бактерии,имеющие одиночный по виду жгутик,образованный пучком из 2-50 жгутиков;-полярные жгутики прикреплены к одному или обоим концам. 2.О2:-строгие аэробы-способны получать энергию только путем дыхания;-облигатные анаэробы-у них отсутствует ферменты,расщипляющие токсические соед-я О2;-факультативные анаэробы-растут как в присутствии,так и в отсут. О2;-аэротолерантность бактерий-способны расти в присутствии атмосферного О2,но не использовать его в качестве источника энергии;-микроаэрофильные-нуждаются в О2 д/получ. энергии, но лучше растут при повыш. содержании СО2. 3.Физический:для создания вакуума с дозированным содержанием кислорода.ПРИБОРЫ:микроанаэростат(герметический закрывающийся сосуд,снабженный манометром,в к-ый помещают посевы и откачивают воздух),термостат.МЕТОДЫ:для культивирования анаэробов.СРЕДЫ: Кита-Тароцци. Б6. 1.Нуклеоид-эквивалент ядра,без ядер. мембраны,нет хромосом и не делится митозом.Основа:кольцевая 2хнитивая цепь ДНК,немного РНК. Рибосомы-сост. из 2х субъединиц 30S и 50S. Не объединены в эндоплазматическую сеть,м. б. мишенью д/а/б. 2.Суть бак.метода исслед. (Кох)-выделение ч/к предполагаемого возбуд.,определение его видовой принадлежности с целью дс-ки заб. и определение а/бграммы с целью рациональной антимикробной химиотерапии. «Золотой стандарт»-т.к. результаты микробиологических исслед. позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исслед. материале.зависит от вида заболевания,локализации возбудителя и этапа его развития. 3.Стерилизация паром под Д в автоклаве-пит. среды,перевяз. материал, белье стерил. при Д 1атм 15-20мин,пит среды с углеводами-0,5 атм 15мин, а обеззараживание инфицированного материала 1,5-2 атм 20-25мин. Б7. 1.L-формы:под воздействием некоторых внешних факторов бактерии могут терять кл. стенку, образуя L-формы.Форма таких кл м.б. разнообразной.Подобные превращания м.б. спонтанными или индуцированными(под воздействием а/б).Выделяют стабильныеи нестабильные формы. Первые не способны к реверсии(обрат восстановлению в исход форму), а вторые реверсируют после удаления проичинного фактора. Образ L-форм можно рассматривать как важный механизм приспособления бактерий к неблаг условиям. 2.культуральные признаки:морфологические особенности колоний бактерий; характер роста на плотных и жидких питательных средах биохимические признаки: сахаролитические свойства;протеолитические свойства, среды Гиса, реакции на NH³, индол,сероводород. 3.посевы производят в строго анаэробных условиях, сначала на питательные среды, типа Кита-Тароцци, затем пересеивают на плотные среды. Комбинированный: в пробирку с расплавленным и охлажд.сахарным агаром вносят исслед.материал.Содержимое набирают в Пастеровскую пробирку, оба конца запаивают, Помещают в термостат на 2-3 суток. видимые колонии извлекают с помощью петли.ПРИБОРЫ:Пастер.пипетка, термостат.МЕТОДЫ:Виньяль-Вейона.СРЕДЫ:охлажд.сахарный агар. Б8. 1.Микроскопичиский метод включает приготов мазков д/микроскоп-я.В большинстве случаев результаты исслед-й носят ориентировочный хар-р (определяют отношение возбуд к окраске), т.к. многие мо лишены морфол-х и тиктор-х св-в.Но можно определить некоторые морф признаки(наличие ядра,включений),а также установить факт наличия или отсутствия мо. 2.Диф-диагностические среды(Хисса)-для идентификации отдельных типов,видов бактерий. Основа органич и неорганич соединения,пептонная вода,бульон. Элективные и селективные среды(ЖСА,КТА)-предназначены д/первичного посева материала или д/пересева с консервирующих сред или сред обогащения с целью получения ч/к. Основные(МПБ,МПА).Специальные(Левенштейна-Ненсена)-д/конкретного вида или группы.Накопления(магниевая среда).Транспортные(Кери Блера). 3.Биологический.в ч.Петри наливают пит.агар с 1% глюкозы.посредине чашки вырезают канавку, половинки засеивают культурами аэробов и анаэробов, закрывают, герметизируют, и помещают вверх дном в термостат. аэробы создают благ.условия для анаэробов.МЕТОД: Форнера.ПРИБОРЫ:ч.Петри, термостат, скальпель.СРЕДЫ:пит.агар с 1-2% глюкозы. Б9. 1.Кл. стенка-биогетерополимер сложного состава.Все бак делятся на Грам+ (стенка многослойна 30-40 пептидогликана и он прошит тейхоевыми аминокт-ми),а Грам-(1 слой пептидогликана +наружная мембрана:липопротеин,фосфалипид).Ф-ции:- формообразование,-защита,-на поверхности рецепторы д/прикрепления бактериофагов,-транспорт.Метод выявления-Грам. 2.Пассив. перенос-в-ва поступают в бак. кл. за счет различия их концентраций по обе стороны ЦПМ;поступают до выравнивания градиента концентрации с внеш. р-ром;без энерго затрат.Пассив. диффузия:-простая-перенос целиком зависит от размеров молекул и их липофильности;-облегченная-проникновение облегчают «помощники»-специфические мембранные белки-пермеазы,способствующих прохождению различных молекул ч/з ЦПМ=образ. комплекс «в-во-пермеаза»=после преодоления ЦПМ комплекс диссоциирует,а пермиаза используется д/последующего проведения др. молекул. Актив перенос-транспорт в-в происходит против градиента концентрации,требует затрат энергии и реализуется при помощи специф. переносчиков.У бактерий подобный тип поступления в-в доминирует (транспортируются сахара,белки). Транспорт,обусловленный фосфорилированием- энергозависимый процесс,используемый при утилизации углеводов. 3.Цель-получ изолированных колоний. Из исслед. материала готовят мазок,окраш. по Грамму и микроскопируют. Исслед. материал наносят на поверхность пит. агара в чашку Петри. После посева чашку переворачивают дном кверху,подписывают и помещают в термостат t37С 18-24ч. Б10. 1.Для изучения морфологии бактерий из них готовят прижизненные препараты и фикзированные мазки, которые окрашивают анилиновым красителем.Микроскопич.методы:микробиологические методы позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исслед.материале;биологические методы направлены на определение токсинов возб. в исслед.материале и на обнаружение возбудителя.Светооптич.микроскопия,темнопольная микроскопия(живые бактерии),фазово-контрастная микроскопия(живые, неокраш),поляризационная м-я,интерференционная м-я,люминесцентная м-я,электронная.МЕТОДЫ.сложные:Грам,Циль-Нильсен(кислоустойчивые бактерии).зерна волютина по Нейссеру, капсулы по методу Бурри-Гинса. Леффлер,Грея, Бейли (жгутики),(спор по методу Ожешки) 2. Рост-увелич клеток без измен числа бактерий в популяции.Размножение-хар-ся временем генерации,т.е. интервал времени за который число бактерий удваивается. Размнож простым поперечным делением,иногда почкованием или фрагментацией. Фазы:-исходно-стационарная;-лаг-фаза-соответствует периоду физиологического приспособления(синтез и сборка рибосом);-логарифмическая-хар-ся max S клеточного деления,в этой фазе в среде происходит max накопление метаболитов бактерий(токсинов);-стационарная-устанавливается равновесие м/д клеточным ростом,делением и процессом отмирания кл;-фаза отмирания-включает период логарифмической гибели,переходящий в период уменьшения скорости отмирания бактерий. 3.2 этап.Цель-накопление ч/к.Прсматривают чашки и изучают изолированные колонии,обращая внимание на их форму,величину,консистенцию и др. признаки.Д/определения морфологии кл и их тинкториальных св-в из части исслед колонии готовят мазок,окрашивают по Грамму и микроскопируют.Д/выделения и накопления ч/к одну изолированную колонию пересевают в отдельную пробирку со скошенным агаром. Б11. 1.Признаки Прокариоты Эукариоты размер 1-10мкм 10-100мкм анаероб. дых. + - фиксация азота + - мембран. структуры - + Генетический материал располож Нет мембраны, отграничивающей Отграничен от цитоплазмы его от цитоплазмы мембраной форма Кольцевая молекула ДНК Хромосома внехромосомная ДНК Располог. в плазмидах В митохондриях гистоны - + тип деления Бинарный Митотический Синтез белка рибосома 70S(50S и 30s) 80S(60S и 40S) метод синтеза Рибосомы, свободного Рибосомы в составе расположены в цитоплазме шероховатых ЭПС Клеточная стенка структурные Образована Содержит хитин или элементы пептидогликанами целлюлозу стеролы - + 2.Питание.Клетки всех живых существ, от самых примитивных форм,до высокоразвитых животных и растений,не только состоят из одних и тех же веществ,но и используют одни и те же механизмы для получения энергии и для роста. голозойный-переваривают плотные частички пищи в основном за счет их гидролиза. голофитный-утилизируют пит.в-ва в виде относительно простых молекул в виде водных растворов. 3.Применение хим.в-в(подавляющих жизнедеятельность микроорганизмов и известных еще с глубокой древности,) – основа метода антисептики.Эффективность зависит от концентрации и времени контакта с микробом.Хим.в-ва могут подавлять рост и размножение микроорганизмов, вызывая СТАТИЧЕСКИЙ эффект, либо вызывать их гибель- МИКРОБИЦИДНЫЙ эффект.Дезинфектанты – хим.средства неспецифического действия, применяемые для обработки помещений, оборудования и различных предметов.Легко растворимы в воде, действуют быстро, дешевые, не оказывают вредного воздействия на организм челка.ХЛОРСОДЕРЖАЩИЕ препараты-газообразный хлор, хлорная известь, хлорамин-Б(для обеззараживания питьевой воды применяют в виде таблеток).АЛЬДЕГИДЫ-алкилируют аминогруппы белков, вызывая гибель микроорг.применяют как консерванты (формальдегид, глутаральдегид).ФЕНОЛЫ-денатурируют белки и нарушают структуру клет.стенки(производные фенола:хлорофен, тимол, салол и тд).ГАЗЫ-двуокись серы – для обработки складов.окиси этилена – для уничтожения спор миркоорг.при стерилизации. Б12. 1. L-формы:под воздействием некоторых внешних факторов бактерии могут терять кл. стенку, образуя L-формы.Форма таких кл м.б. разнообразной.Подобные превращания м.б. спонтанными или индуцированными(под воздействием а/б).Выделяют стабильныеи нестабильные формы. Первые не способны к реверсии(обрат восстановлению в исход форму), а вторые реверсируют после удаления проичинного фактора. Образ L-форм можно рассматривать как важный механизм приспособления бактерий к неблаг условиям. 2.Принципы культивирования:а)подбор пит. сред в соответсвии с физиолог. потребностями бактерий и задачами исследования;б)t(психрофилы 0-20С,мезофиллы 20-45С, термофилы 45-70С);в)время(18-24ч большинство,время генерации 15-20ч);г)потребность в молекулярном О2(аэробы-строгие-микроаэробы-капнофилы;факультативные анаэробы; анаэробы-строгие- аэротолерантные). 3.4этап бакметода.Учет результатов.Выдача ответа. Цель-идентификация исследуемой культуры(определение вида,биовара,серовара исслед. культуры) и определение ее антибиотикограммы. |