Жидкостная хроматография. Жидкостная хроматография вэжх подготовила телманова ноила аналитическая химия 1 жидкостная хроматография
 Скачать 1.12 Mb.
|
ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ВЭЖХПОДГОТОВИЛА: ТЕЛМАНОВА НОИЛА Аналитическая химия - 1 ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯВ ЗАВИСИМОСТИ ОТ: ДИАМЕТРА И ДЛИНЫ КОЛОНКИ РАЗМЕРА ЧАСТИЦ СОРБЕНТА СПОСОБА УПАКОВКИ СОРБЕНТА В КОЛОНКЕ Низкоэффективная Высокоэффективная ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯАналитическая химия - 1 НЭЖХ ДИАМЕТР КОЛОНКИ ≈ N ММ ÷ N СМ ДЛИНА КОЛОНКИ ≈ N×10 СМ РАЗМЕР ЧАСТИЦ СОРБЕНТА > 10 МКМ ЗАПОЛНЕНИЕ КОЛОНКИ СОРБЕНТОМ - ВРУЧНУЮ В ПРЕПАРАТИВНЫХ ЦЕЛЯХ ВЭЖХИЗОКРАТИЧЕСКАЯ ГРАДИЕНТНАЯ МУЛЬТИКОЛОНОЧНАЯ МНОГОКОЛОНОЧНАЯ МИКРОКОЛОНОЧНАЯ КАПИЛЛЯРНАЯ В АНАЛИТИЧЕСКИХ ЦЕЛЯХ ОТЛИЧИЕ ВЭЖХ ОТ ГХВ ГХ ГАЗ-НОСИТЕЛЬ НЕ СОРБИРУЕТСЯ НЕПОДВИЖНОЙ ФАЗОЙ, А В ЖХ МОЛЕКУЛЫ ПФ МОГУТ СОРБИРОВАТЬСЯ НФ МОЛЕКУЛЫ ЖПФ СОРБИРУЮТСЯ НА ПОВЕРХНОСТИ НФ, МОЛЕКУЛЫ ОПРЕДЕЛЯЕМОГО СОЕДИНЕНИЯ ВЫТЕСНЯЮТ МОЛЕКУЛЫ ЭЛЮЕНТА С ПОВЕРХНОСТИ СОРБЕНТА ═> ↓ЭНЕРГИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МОЛЕКУЛ ВЕЩЕСТВА С ПОВЕРХНОСТЬЮ СОРБЕНТА ═> VR (ЖХ) < VR (ГХ), ДИАПАЗОН ЛИНЕЙНОСТИ ИЗОТЕРМЫ СОРБЦИИ ЖХ > ДИАПАЗОНА ЛИНЕЙНОСТИ ИЗОТЕРМЫ СОРБЦИИ ГХ. ОСОБЕННОСТИ ВЭЖХПараметры удерживания и селективность в ГХ зависят только от НФ, а в ЖХ – и от НФ, и от ПФ Варьируя элюент, можно менять параметры удерживания и селективность. Возможно градиентное элюирование. В ЖХ разделение обычно – при комнатной температуре Для ЖХ – более сложное оборудование: система дегазации, устройство создания градиента, насосы, измерители давления, смеситель… ОБЩАЯ СХЕМА ПРИБОРА ДЛЯ ВЭЖХ1 - ЕМКОСТЬ ДЛЯ ЭЛЮЕНТА, 2 – ФИЛЬТР, 3 – РЕГУЛЯТОР ДЛЯ ВЫРАВНИВАНИЯ ПУЛЬСАЦИИ ПРИ ПОДАЧЕ ЭЛЮЕНТА, 4 - МАНОМЕТР, 5 – КЛАПАН, РЕГУЛИРУЮЩИЙ ДАВЛЕНИЕ, 6 – КРАН ДЛЯ ВВОДА ПРОБЫ, 7 – ШПРИЦ, 8 – ПРЕДОХРАНИТЕЛЬНАЯ КОЛОНКА, 9 – АНАЛИТИЧЕСКАЯ КОЛОНКА. 9 Детектор Хроматограмма Детектор Элюат 8 5 6 7 Насос 4 3 2 1 КОЛОНКИПРЕДОХРАНИТЕЛЬНАЯ КОЛОНКА - КОРОТКАЯ, ЗАЩИЩАЕТ АНАЛИТИЧЕСКУЮ КОЛОНКУ ОТ ПЫЛИ, СМОЛ И ДРУГИХ ПРИМЕСЕЙ. ИСПОЛЬЗУЕТСЯ ДЛЯ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО РАЗДЕЛЕНИЯ ИЛИ СОРБЦИИ МЕШАЮЩИХ АНАЛИЗУ КОМПОНЕНТОВ. ДЕГАЗАЦИЯ ПФ - УДАЛЕНИЕ ВОЗДУШНЫХ ПУЗЫРЬКОВ ФИЛЬТРОВАНИЕ – ВНУТРИ КОЛОНКИ ФИЛЬТРЫ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПФ ОТ МЕХАНИЧЕСКИХ ПРИМЕСЕЙ, ДЛЯ УДАЛЕНИЯ ПЫЛИ. ДВУХНАСОСНАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ГРАДИЕНТНОГО ЭЛЮИРОВАНИЯ В ВЭЖХСильный раствори-тель Микропроцессор, контролирующий работу насосов Слабый растворитель Фильтр Фильтр Насос 2 Насос 1 Подача смешанного растворителя на колонку смеситель СИСТЕМА ВВОДА ПРОБЫШприц Резиновая мембрана Элюирующий растворитель Игла шприца Стеклянные шарики Колонка Насадка Колпачок, направляющий иглу Сетка из нержавеющей стали Через мембрану СИСТЕМА ВВОДА ПРОБЫОт насоса К колонке Шприц Место для ввода иглы Дозировочная петля От насоса К колонке Через кран Кран в положении Кран в положении «загрузка» «ввод» ДЕТЕКТОРЫУФ (254 НМ) АЛЬДЕГИДЫ, КЕТОНЫ, АРОМАТИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ. ТРЕБОВАНИЯ К ЭЛЮЕНТУ: ПРОЗРАЧНОСТЬ ДЛЯ УФ-ИЗЛУЧЕНИЯ. ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ (280 НМ) ПО 10-9 - 10-10 Г, ДИАПАЗОН ЛИНЕЙНОСТИ 5 ПОРЯДКОВ КОНЦЕНТРАЦИИ ДЕТЕКТОРЫДифференциальный рефрактометр ПО 10-6 г, диапазон линейности 4 порядка концентрации. Предельные соединения Кондуктометр ПО 10-3 мкг/мл, диапазон линейности 4 порядка концентрации. Ионная хр-фия. Нефелометр проточный лазерный В эксклюзионной хроматографии полимеров ДЕТЕКТОРЫСФМ (190-650 нм) Поглощение при постоянной длине волны во времени или спектр в диапазоне длин волн в остановленном потоке Вольтамперометрические детекторы С плёночной ячейкой – стеклоуглеродный дисковый электрод, объем 0.06-0.3 мкл. С трубчатой ячейкой – графитовое волокно. ПО – пг, диапазон линейности 3 порядка АДСОРБЦИОННАЯ - ЖТХДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ НЕИОННЫХ СОЕДИНЕНИЙ – ОТ УМЕРЕННО НЕПОЛЯРНЫХ ДО УМЕРЕННО ПОЛЯРНЫХ. НЕЛЬЗЯ - СОВСЕМ НЕПОЛЯРНЫЕ (УВ) И СИЛЬНОПОЛЯРНЫЕ (АМИНЫ, СПИРТЫ, КИСЛОТЫ). СОРБЕНТЫ (НФ)СОРБЕНТЫ ПРАВИЛЬНОЙ СФЕРИЧЕСКОЙ ФОРМЫ С УЗКИМ РАСПРЕДЕЛЕНИЕМ ПО РАЗМЕРАМ (3±0.5, 5±1, 10±1 МКМ) С ПОВЕРХНОСТЬЮ 200-600 М2/Г. СИЛИКАГЕЛЬ ≡SI-OH AL2O3 МОДИФИЦИРОВАННЫЕ СОРБЕНТЫ: ≡SI-O-SI-R, ГДЕ R = - ПОЛЯРНЫЕ: -(СH2)4-CN, -(СH2)4-NH2, -(СH2)4-OH - НЕПОЛЯРНЫЕ: -СH2-СH3, -(СH2)7-СH3, -(СH2)17-СH3, -СH2-С6H6, -C(СH3)3 ТРЕБОВАНИЯ К ПФЧИСТОТА ХИМИЧЕСКАЯ ИНЕРТНОСТЬ СОВМЕСТИМОСТЬ С ДЕТЕКТОРОМ ОПТИМАЛЬНАЯ ВЯЗКОСТЬ БЕЗОПАСНОСТЬ ДОСТУПНОСТЬ ДОСТАТОЧНАЯ РАСТВОРЯЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ ПО ОТНОШЕНИЮ К АНАЛИЗИРУЕМЫМ ВЕЩЕСТВАМ СМЕШИВАЕМОСТЬ ДРУГ С ДРУГОМ ТЕМПЕРАТУРА КИПЕНИЯ ВОЗМОЖНОСТЬ ИЗВЛЕЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВ ИЗ ЭЛЮАТА ЭЛЮЕНТЫ (ПФ)ЭЛЮОТРОПНЫЙ РЯД – РАСПОЛОЖЕНИЕ РАСТВОРИТЕЛЕЙ В СООТВЕТСТВИИ С ВОЗРАСТАНИЕМ ИХ ЭЛЮИРУЮЩЕЙ СИЛЫ. ЭЛЮИРУЮЩАЯ СИЛА РАСТВОРИТЕЛЯ – БЕЗРАЗМЕРНЫЙ ПАРАМЕТР, КОТОРЫЙ ЗАВИСИТ ОТ ФИЗИЧЕСКИХ (ПОВЕРХНОСТНОЕ НАТЯЖЕНИЕ, ВЯЗКОСТЬ) И ХИМИЧЕСКИХ (ПОЛЯРНОСТЬ) СВОЙСТВ ПФ ЭСР ПОКАЗЫВАЕТ, ВО СКОЛЬКО РАЗ ЭНЕРГИЯ СОРБЦИИ ДАННОГО ЭЛЮЕНТА БОЛЬШЕ, ЧЕМ ЭНЕРГИЯ СОРБЦИИ ЭЛЮЕНТА, ВЫБРАННОГО В КАЧЕСТВЕ СТАНДАРТА. ЭЛЮЕНТЫ (ПФ)В НОРМАЛЬНО-ФАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ СТАНДАРТ – ПЕНТАН, ДЛЯ НЕГО ƐО = 0. ПО ЭЛЮИРУЮЩЕЙ СИЛЕ РАСТВОРИТЕЛИ ДЕЛЯТСЯ НА СЛАБЫЕ И СИЛЬНЫЕ. СЛАБЫЕ – СЛАБО СОРБИРУЮТСЯ НФ, КОЭФФИЦИЕНТЫ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ СОРБИРУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ МЕЖДУ ПФ И НФ ВЫСОКИЕ. СИЛЬНЫЕ – СОРБИРУЮТСЯ СИЛЬНО. РАСТВОРИТЕЛЬ ТЕМ СИЛЬНЕЕ, ЧЕМ ВЫШЕ РАСТВОРИМОСТЬ В НЕМ ПРОБЫ И ЧЕМ СИЛЬНЕЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ РАСТВОРИТЕЛЬ-СОРБАТ. РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ - ЖЖХРАСПРЕДЕЛЕНИЕ ВЕЩЕСТВА МЕЖДУ ДВУМЯ НЕСМЕШИВАЮЩИМИСЯ ЖИДКОСТЯМИ, РАЗДЕЛЕНИЕ - ЗА СЧЕТ РАЗЛИЧНОЙ РАСТВОРИМОСТИ В ЖИДКОЙ НФ. ЖЖХ - ДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ ПОЧТИ ВСЕХ ТИПОВ СОЕДИНЕНИЙ, ОСОБЕННО ПОЛЯРНЫХ. ДЕТЕКТОРЫКондуктометрический детектор - измерение электропроводности элюата. Для снижения фоновой электропроводности после разделяющей колонки – подавляющая (компенсационная), где элюент преобразуется в воду или раствор с очень низкой электропроводностью, а разделяемые ионы – в сильные электролиты. Достоинство двухколоночной ИХ - ↓ПО и широкий диапазон линейности. Одноколоночная ИХ - элюенты с низкой электропроводностью (ароматические кислоты и их соли, рН = 3-8). ДЕТЕКТОРЫСПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКИЙ СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ !!! |