Микробиология. Менингококки. Морфология и общие свойства
 Скачать 20.05 Kb.
|
|
Менингококки. Морфология и общие свойства Менингококки (N.meningitidis), вызывающие у людей менингококковую инфекцию, впервые изучены А.Ваксельбаумом в 1887 г. Клетки менингококка имеют сферическую или слегка овоидную форму. В препаратах, приготовленных из спинномозговой жидкости, клетки располагаются попарно. Обращенные друг к другу поверхности уплощены. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, имеют микрокапсулу и пили. Спор не образуют. Менингококки хемоорганотрофы, требовательны к условиям культивирования; аэробы, обладают цитохромоксидазой и каталазой. Культивируют менингококки на средах, содержащих нормальную сыворотку или дефибринированную кровь барана либо лошади. На сывороточном агаре образуют бесцветные нежные колонии вязкой консистенции. Рост менингококков стимулируется в условиях повышенной концентрации СО и повышенной влажности. Менингококки проявляют слабую сахаролитическую активность, расщепляют с образованием кислоты глюкозу и мальтозу. Образуют гиалуронидазу и нейраминидазу. Менингококки. Антигенные и вирулентные свойства Антигенные свойства У менингококков различают несколько антигенов. На основании иммунохимических различий капсульных антигенов менингококки делят на серовары A, B, C, D, X, Y, Z, W-135, 29E. Антигенами, разделяющими менингококки на подварианты, являются белки наружной мембраны клеточной стенки. Эти антигены обозначают арабскими цифрами. Заболевания чаще всего вызывают менингококки сероваров А, В, и С. Менингококки серовара А наиболее часто встречаются при генерализованных формах инфекции. Патогенность Факторами вирулентности менингококков являются капсульные полисахариды, обеспечивающие их резистентность к фагоцитозу, пили. С помощью которых бактерии прикрепляются к рецепторам эпителиальных клеток. Адгезивную функцию несут также белки наружной мембраны клеточной стенки. Менингококки продуцируют нейраминидазу и гиалуронидазу, способствующие их инвазии в ткани. Менингококки образуют эндотоксин - ЛПС клеточной стенки, который часто обнаруживается у больных в крови и спинномозговой жидкости. Он играет ведущую роль в развитии генерализованных форм инфекции и может вызвать эндотоксический шок. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции. Микроскопический метод На предметное стекло наносят каплю ликвора из осажденного после центрифугирования слоя и высушивают при комнатной температуре или в условиях термостата при 37°С. Далее на препарат наносят краситель (водно-спиртовой раствор метиленовой сини) и после 2-минутной экспозиции проводят тщательное, но осторожное промывание водопроводной водой. Препарат подсушивают и микроскопируют под иммерсией при большом увеличении, просматривая не менее 20 полей зрения или до обнаружения морфологически четких микробных клеток. Культуральный мазок по Граму в модификации Калины: На обезжиренное стекло наносят каплю стерильного физиологического раствора. В нем суспензируют культуру и туда же петлей вносят каплю спиртового раствора бриллиантовой зелени. После подсыхания препарат фиксируют над пламенем. Затем на препарат наливают основной краситель. Время экспозиции 1,5-2,0 мин. После этого краску сливают и стекло в наклонном положении промывают водой. Далее препарат в наклонном положении отмывают спиртом до отхождения облачков краски и немедленно промывают водой. Затем производят докрашивание препарата водным раствором фуксина в течение 2 мин, после этого окончательно промывают водой и просушивают. Культуральный мазок просматривают под иммерсией при большом увеличении: грамотрицательные бактерии выглядят ярко-розовыми, грамположительные - сине-черными. Мазок препарата «толстая капля» крови: На середину предметного стекла наносят каплю крови и распределяют с помощью чистого стерильного аппликатора так, чтобы диаметр мазка соответствовал величине пятикопеечной монеты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови. Данный фрагмент исследования выполняют непосредственно у постели больного при его поступлении в стационар. Далее препарат доставляют в бактериологическую лабораторию. Окраску мазка производят водно-спиртовым раствором метиленовой сини в течение 2-3 мин, без предварительной фиксации. После окрашивания препарат осторожно промывают водой и подсушивают на воздухе. Препарат смотрят под иммерсией при большом увеличении, просматривая не менее 20 полей зрения или до обнаружения морфологически четких микробных клеток. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции. Бактериологический метод Лабораторное подтверждение и выявление менингококков выполняют по следующим тестам: - характерный рост только на высокопитательных средах; - типичная морфология культурального мазка по Граму; - сахарологическая активность в отношении глюкозы и мальтозы; - выявление группоспецифических свойств; - обнаружение специфических антигенов в ликворе и/или сыворотке крови в реакциях латекс-агглютинации и ВИЭФ (экспресс-методы); - выявление специфических антител в сыворотке крови в реакции РНГА. При посеве на питательные среды и дальнейшей инкубацией в течение 24 часов при 37°С в атмосфере с 5-10% СО и повышенной влажностью проявляются следующие культуральные свойства: - на полужидкой питательной среде (0,1% полужидкий сывороточный агар) менингококки вызывают интенсивное помутнение в верхней части столбика среды; - на "двухфазной" питательной среде при посеве крови отмечают помутнение жидкой фазы и рост полупрозрачных сероватых колоний на границе плотной и жидкой фаз; - на чашках с "шоколадным" агаром менингококки растут в виде нежных полупрозрачных сероватых колоний с идеально ровными краями, с блестящей поверхностью, размером 1-2 мм. Имеют маслянистую консистенцию, не меняют цвета среды, не имеют запаха. С увеличением времени культивирования тинкториальные свойства меняются; - на чашках с сывороточным агаром менингококки растут в виде полупрозрачных, нежных голубоватых колоний с ровными краями и гладкой блестящей поверхностью; - на чашках без добавления нативных сыворотки и крови животного происхождения, также на чашках с добавлением желчи, менингококки не растут. При определении сахаролитической активности проводят учет результатов посева чистой культуры на плотные питательные среды с углеводами. Метод дает возможность дифференцировать различные виды нейссерий и некоторые другие виды микроорганизмов. Глюкозу и мальтозу ферментируют до кислоты. Морфология и общие свойства гонококков Гонококк - парный кокк (диплококк) бобовидной формы, грамотрицательный, расположен внутриклеточно (в цитоплазме лейкоцитов). Гонококки неподвижны, не образуют спор; имеют тонкие трубчатые нити (пили), с помощью которых они закрепляются на поверхности эпителиальных клеток, сперматозоидов, эритроцитов. Снаружи гонококки покрыты капсулоподобной субстанцией, затрудняющей их переваривание. Персистенция инфекции возможна внутри лейкоцитов, трихомонад, эпителиальных клеток (незавершённый фагоцитоз), что осложняет лечение. Гонококки высокочувствительны к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды: погибают при температуре выше 55°С, высыхании, обработке растворами антисептиков, под влиянием прямых солнечных лучей. Гонококк сохраняет жизнеспособность в свежем гное до высыхания. Основной путь заражения - половой (от инфицированного партнёра). Контагиозность инфекции для женщин составляет 50-70%, для мужчин - 25-50%. Гораздо реже гонорея передаётся бытовым путём (через грязное бельё, полотенца, мочалки), в основном у девочек. Возможность внутриутробного инфицирования не доказана. При неадекватном лечении могут образовываться L-формы гонококков, отличающиеся по своим морфологическим и биологическим характеристикам от типичных форм. L-формы - шаровидные, имеют различную величину и окраску. Они нечувствительны к препаратам, вызвавшим их образование, АТ и комплементу за счёт утраты части своих антигенных свойств. Персистенция L-форм затрудняет диагностику и лечение заболевания и способствует выживанию инфекции в организме в результате реверсии в вегетативные формы. В связи с широким использованием антибиотиков возникло большое количество штаммов гонококка, вырабатывающих фермент β-лактамазу и, соответственно, устойчивых к действию антибиотиков, содержащих β-лактамное кольцо. Лабораторная диагностика острых форм гонореи Материалом для исследования при острой форме гонореи является гнойное отделяемое уретры, влагалища, шейки матки, предстательной железы и других органов, пораженных гонококком, а также осадок и нити мочи. Гонококки хорошо воспринимают анилиновые красители. Как правило, мазки окрашивают по Граму и метиленовым синим. Гонококки обнаруживают по характерным признакам. Для обнаружения гонококков в мазке применяют метод прямой и непрямой иммунофлуоресценции. Лабораторная диагностика хронической гонореи При хронической гонорее, а также под влиянием химиотерапевтических сред морфология гонококков может быть изменена. В таких случаях прибегают к бактериологическому методу диагностики. Забор биоматериала в процессе диагностики гонореи мужчин осуществляется из уретры, при обследовании женщин - из канала шейки матки или влагалища. При наличии в анамнезе экстрагенитальных половых контактов для анализа берется соскоб из прямой кишки или глотки. Для серологической диагностики производят забор крови. Бактериологические обследование на гонорею. Включают посев на безасцитные среды при следующих условиях: pH от 7,2 до 7,4, содержание углекислого газа в атмосфере 10-20%, температура 37°С. Классической средой является "Среда для выращивания гонококков" Бактериологические методы позволяют оценить чувствительность инфекции к противомикробным препаратам и назначаются пациентам с выраженной симптоматикой гонореи или для подтверждения данных, полученных с помощью бактериоскопии. Колонии гонококка вырастают в течение 1-2 суток, хотя наблюдается поздний рост - на 7-8-е сутки, особенно если материалом для посева служит слизь из канала шейки матки. Все колонии гонококка имеют круглые очертания, ровные края, блестящую поверхность; они прозрачные, бесцветные или слегка беловатые, слизистого характера, легко снимаются с поверхности среды. При микроскопии окрашенных по методу Грама мазков из культур гонококки выглядят в основном отдельными грамотрицательными кокками, беспорядочно рассыпанными по периферии скопления и более густо расположенными в центре. Гонококки, как и другие нейссерии, вырабатывают цитохромоксидазу. Это выявляется путем заливки поверхности роста культуры 1% водным раствором диметилпарафенилендиамина или другим реактивом: сначала наблюдается покраснение колоний гонококка, а затем почернение. Расщепляет глюкозу до кислоты. ПЦР при подозрении гонореи. Процесс диагностики гонореи основан на копировании определенного участка ДНК, соответствующего заданным параметрам. Этот метод, обладающий самой высокой чувствительностью и специфичностью (до 98%), рекомендован для выявления экстрагенитальной гонореи. Серологическое обследование гонореи. Включают различные способы регистрации реакций «антиген-антитело». Для выявления гонококковой инфекции используется реакция Борде-Жангу (РСК). Метод является вспомогательным и рекомендуется для пациентов, предположительно страдающих хронической формой заболевания. |