Методы выявления вирусов
 Скачать 42 Kb.
|
|
Методы выявления вирусов. Выявление вирусов в куриных эмбрионах Скорлупу эмбриона обрабатывают спиртом, йодом. Стерильными ножницами подрезают скорлупу выше границы воздушной полости. Снимают подскорлупную оболочку и извлекают материал с накопленным вирусом. Изучают состояние хорионаллантоисной оболочки (например, вирусы герпеса, оспы вызывают образование бляшек, т.е. очагов погибших клеток, кровоизлияния). Для выявления присутствия вирусов ставят РГА Это неспецифическая реакция, основанная на способности вирусов, имеющих в оболочке гемагглютинин, склеивать эритроциты морской свинки, курицы, 0 группы крови человека. РГА ставят на стекле и в планшетках с лунками. Постановка РГА на стекле На предметное стекло наносят каплю вируссодержащего материала (аллантоисную или амниотическую жидкость, экстракт ХАО) затем каплю 1% взвеси куриных эритроцитов. При наличии вируса в материале происходит гемагглютинация. на стекле в лунках       + - + - Для идентификации вируса ставят РТГА Это специфическая реакция, основанная на нейтрализации гемагглютинина вируса гомологичной противовирусной сывороткой. РТГА ставится на стекле и в планшетках с лунками. Постановка РТГА на стекле На предметное стекло наносят каплю противовирусной сыворотки, каплю вируссодержащего материала и каплю 5% взвеси куриных эритроцитов. на стекле в лунках + - + - РГА и РТГА используются для диагностики: гриппа паратита оспы герпеса некоторых энтеровирусных инфекций Выявление вирусов в культурах клеток и тканей Феноменами, по которым определяют наличие вируса, являются: 1) ЦПД проявляется в деструкции монослоя клеточных культур вплоть до полной дегенерации  культура клеток до заражения ЦПД вируса 2) гемадсорбция способность к адсорбции эритроцитов клеток, зараженных вирусом 3) бляшкообразование это образование бляшек в зараженной культуре клеток под слоем специального агарового покрытия. В агаре имеется краситель, которым окрашиваются живые клетки. Погибшие клетки теряют способность удерживать краситель и обесцвечиваются, следовательно, в агаре видны бесцветные клетки.   4)цветная проба основана на способности вируса изменять метаболизм зараженной культуры, что определяется по цвету среды. Не зараженная клеточная культура в процессе метаболизма выделяет кислые продукты, меняется рН среды и, в результате этого, изменяется цвет среды с красного на желтый. В зараженной вирусом культуре изменяется метаболизм, и цвет среды остается красным.     неизмененная среда рост клеток рост вирусов 5) включения это особые образования, вызванные вирусами, которые могут располагаться в цитоплазме или ядре клеток. Например: вирус бешенства образует включения в цитоплазме нейронов - тельца Бабеша-Негри, вирус оспы – тельца Гварниери. Аденовирусы образуют включения в ядре клеток. Включения выявляются с помощью специальных методов окраски, например, по Романовскому, Туревичу, Манну или с помощью люминесцентной микроскопии. Для идентификации вирусов используется реакция нейтрализации того феномена, который вызывает вирус. Для этого смешивают накопленный вирус со специфической сывороткой и вводят материал в клеточную культуру. При соответствии вируса и специфической сыворотки феномен не наблюдается. Кроме того, для определения вида вируса используются серологические реакции: РСК, РНГА, РП, ИФА, РИФ. Методы лабораторной диагностики в вирусологии: 1) вирусоскопический это выявление присутствия вируса в патологическом материале с помощью электронной и люминесцентной микроскопии, а также с помощью применения специальных методов окраски и последующего изучения препарата в световом микроскопе. 2) вирусологический выделение вируса из патологического материала, его индикация и идентификация 3) серологический исследование сыворотки больного для обнаружения в ней специфических Ат или, в некоторых случаях вирусных Аг (при гепатите В определяется HbsAg) 4) экспресс методы современные методы диагностики ИФА, РИФ, ПЦР. |