Серологические методы. Охарактеризовать методы оценки иммунного статуса пациента
 Скачать 23.94 Kb.
|
|
Охарактеризовать методы оценки иммунного статуса пациента. Ответ: Выделяют несколько разновидностей методов оценки иммунного статуса: А) Оценка клеточной системы иммунитета (клеточного иммунитета) включает в себя: определение общего числа лимфоцитов; определение числа зрелых Т-лимфоцитов и их субпопуляций – хелперов и цитоксических Т-лифоцитов; определение реакции Т-лимфоцитов на ФГА в реакции бластной трансформации; определение соотношения CD4+\CD8+; постановка кожных проб ГЗТ; дополнительные уточняющие методы (определение CD25 и HLA-DR на Т-лимфоцитах, исследование продукции цитокинов, определение пролиферативного ответа на специфический антиген в РБТЛ, определение готовности клеток к апоптозу по апоптозному антигену FAS-CD95). Б) Оценка В-клеточной системы иммунитета (гуморального иммунитета) включает в себя: определение числа В-лимфоцитов (CD20+ или CD19+); определение количества неспецифических иммуноглобулинов; определение циркулирующих в крови иммунных комплексов; определение функциональной активности лимфоцитов с помощью реакции бластной трансформации лимфоцитов на В-клеточный митоген, а также дополнительные уточняющие методы (определение количества специфических иммуноглобулинов, определение продукции интрелейкина-6, определение секторного IgA). В) Определение компонентов комплемента в сыворотке крови и функциональной активности комплемента (CH50). Г) Система фагоцитов (нейтрофилов) включающая в себя: определение числа нейтрофилов; определение фагоцитарного числа и индекса фагоцитоза; определение бактерицидного фагоцитов; а также дополнительные уточняющие методы (определение активности хемотаксиса фагоцитов, определение способности нейтрофилов к адгезии к пластику и наличия клеток с адгезивными молекулами. Также серологические методы используются при диагностике иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей, суть метода заключается в изучении антител и антигенов с помощью реакции антиген-антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях организма, а также тканях организма. Охарактеризовать реакции агглютинации. Ответ: Реакция агглютинации – склеивание корпускул антителами в присутствии электролитов. Проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящего из корпускул, «склеенных» антителами. Эту реакцию используют для: определения возбудителя, выделенного от пациента (используется ориентировочная реакция, где к капле агглютинирующей сыворотки добавляют взвесь бактерий, а также развернутая реакция, где к разведениям сыворотки добавляют взвесь бактерий); определение антител в сыворотке крови пациента при помощи диагностикума (С О-диагностикумом для О-антигена и с Н-диагностикумом для Н-антигена); определение групп крови по системе АВО при помощи агглютинации эритроцитов антителами иммунной сыворотки против антигеном крови А(II) и В (III). Охарактеризовать реакции непрямой гемагглютинации. Ответ: Выявление антител сыворотки крови больного с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, представляющего из себя эритроциты с адсорбированными на них антигенами, на которые взаимодействуют соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции, эритроциты оседают в виде «пуговки». Эту реакцию ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведением сыворотки крови пациента, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум. При диагностике некоторых токсинов (например, ботулинического) используют антительный эритроцитарный диагностикум. Такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемаагглютинации – РОНГА. Охарактеризовать реакцию коагглютинации. Ответ: Эту реакцию применяют для определения антигенов с помощью антительного диагностикума – антител, адсорированных на белке А-клеток стафилококка. Белок А имеет сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, поэтому такие бактерии, обработанные иммунной диагностической сывороткой, неспецифически адсорбируют антитела сыворотки. Антитела диагностикума взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба. Охарактеризовать реакцию Кумбса. Ответ: С помощью реакции Кумбса диагностируют патологические состояния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов, например, гемолитическую болезнь новорожденных: эритроциты резус-положительного плода соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые перешли через плаценту от резус-отрицательной матери. Можно также выявлять неполные антитела против антигенных микробов. Охарактеризовать реакцию торможения гемагглютинации РТГА. Ответ: Эта реакция основана на блокаде антигенов (гемагглютининов) вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи) могут агглютинировать эритроциты различных животных. Охарактеризовать реакции преципитации. Ответ: Эта реакция основана на формировании и осаждении комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах: избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса. Есть несколько разновидностей реакции преципитации: А) Реакция кольцепреципитации. Проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Если о качестве антигенов в реакции используют прокипяченные и профильтрованные экстракты тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации. Б) Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони. Ход постановки реакции: растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки, в них раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат о виде белой полосы. Интерпретация: У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных антигенов линии преципитата сливаются, у неидентичных — пересекаются. В) Реакция радиальной иммунодиффузии используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др. Ход постановки реакции: иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген (Аг) в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Г) Иммуноэлектрофорез представляет собой сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации. Ход постановки реакции: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется о геле с помощью электрофореза, затем в канавку геля параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку. Антитела иммунной сыворотки диффундируют в гель и образуют в месте «встречи» с антигеном линии преципитации. Е) Реакцию флоккуляции применяют для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина. Интерпретация основана на появлении опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин-антитоксин или анатоксин-антитоксин. Охарактеризовать реакции иммунофлюоресценции. Ответ: Эту реакцию используют для выявления антигенов микробов или определения антител. Различают разновидности: А) Прямой метод основан на способности светиться в УФ-лучах, люминесцентного микроскопа, тканей или микробов, чьи антигены обработаны иммунными сыворотками. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Б) Непрямой метод также основан на способности светиться в УФ-лучах. Мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. Интерпретация: образование комплекса микроб+антимикробные кроличьи антитела+антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Охарактеризовать реакции иммуноферментного анализа. Ответ: Эти реакции основаны на использовании конъюгированных антител с ферментом-меткой. Используется для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней. в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минимальных концентрациях. А) Твердофазный ИФА основан на использовании одного из компонента иммунной реакции сорбированного на твердом носителе. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты промыванием. Б) Конкурентный ИФА используется для определения антител: искомые антитела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе. Охарактеризовать реакции иммуноблоттинга. Ответ: Этот метод является высокочувствительным для выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФЛ или РИА. Ход исследования: антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» («пятнами») антигенов. На эти полоски наносят сыворотку пациента. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Контроль: образовавшийся на полоске комплекс [антиген+антитело пациента+антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента. 930186 Годлевский И.А. |