сабак. Практикалық сабақ 12 микробиология. Рамазанова Эльза вт27 Практикалы саба 12
 Скачать 22.16 Kb.
|
|
Рамазанова Эльза ВТ-27 Практикалық сабақ 12 Патогенді микобактериялардың және микоплазмалардың зертханалық диагностикасы Қоздырғыштарды зертханалық зерттеу әдістері Медицинадағы Mycobacterium туберкулезі сондай-ақ Кохтың таяқшасы ретінде белгілі. Бұл патогендік микроорганизмдер. Бактериум мөлшері үлкен және ұзартылған нысаны бар, ол тығыз сыртқы қабығы бар. Грек тілінен аударғанда «myco» - «саңырауқұлақ» деген мағынаны білдіреді, ол кочтың шөгіндісін мицелияға ұқсастығын білдіреді. Бұл микроорганизмдер өте батыл. Микобактерия туберкулезінің түрлері Бұл топтың барлық микроорганизмдерін адамдар үшін қауіпті және шартты патогенді деп саралауға болады. Сонымен қатар, туберкулездің қоздырғышы болып табылатын бактерия басқа өлшемдерге сәйкес жіктелуі мүмкін. Дифференциация келесі ерекшеліктерге сәйкес жүзеге асырылады: өсу қарқыны; дамудың оңтайлы температурасы; бактериялардың пигментке қабілеттілігі. Барлық микобактериялардың туберкулезі М. туберкулез деп аталатын бір топта біріктірілген. Оның өкілдері: М. африканум; M. microti; M. canettii; BC bovis BCG; М. Саргай; M. pinnipedii және тағы басқалар. Қалған бактериялар туберкулезден тыс топ болып саналады. Бұл микроорганизмдерді қамтиды: M. ішіндегіштер; M. terrae; М. scrofulaceum; М. челона; M. fortuitum; М. липр және т.б. Микобактериялар туберкулездің дамуына себепші болады. Бұл қауіпті. Туберкулездің микобактерияларының келесі топтары ерекшеленеді: Фотохромогендік - бұл түрдің өкілдері қараңғыда түссіз, бірақ жарыққа шыққанда олар ашық-қызғылт түсті болады. Бактальды дамытудың қолайлы температурасы - 32 ° С. Скотохромогендік - бұл микроорганизмдер қараңғыда қалыптасады, себебі олардың аттары грек тілінен шыққан скотос «қараңғылықты» білдіреді. Өсу қарқыны 30-дан 60 күнге дейін өзгереді. Бактілі бала балаға немесе тозған ағзаға енген кезде лимфа жүйесі бұзылады. Нейрохромогендік - бұл топтың өкілдері дерлік түссіз, бірақ жарыққа шыққанда олар ашық түсті сары түске ие болады. Дамудың ұзақтығы - 2-4 апта. Жылдам өсіп - осы топтың өкілдері түссіз және пигментті болуы мүмкін. Олардың дамуы жылдам қарқынмен жүріп жатыр. Жасалған сәттен бастап соңғы құрылған микроорганизмнің фазасына дейін 7-ден 10 күнге дейін өтеді. Бұл ауруды анықтау үшін түрлі диагностикалық әдістерді қолдануға болады. Аппараттық құралдарды рәсімдеу және зертханалық зерттеулерді қолдану. Біріншісі диагностиканың мұндай әдістерін қамтиды: Флюорография - нәтижелерді минуттармен алуға мүмкіндік береді; Рентген сәулелері - суреттер тікелей және бүйірлік проекцияда орындалады; Есептелген томография - ең объективті әдіс (ол ең дәл нәтиже береді). Зертханалық диагностикалық әдістерге мыналар жатады: микобактерия туберкулезі бойынша қақырықты талдау; тізбекті полимеразды реакция әдісі; қан мен зәрді жалпы талдау; микроскоптың жағындылары; туберкулездің микобактерияларына антиденелерді анықтауға мүмкіндік беретін ферментке байланысты иммуноферментті талдау; тіндік биопсия. Микобактерия туберкулезі үшін қан сынағы Бұл тест иммундық және ферментативті реакцияларды анықтауды қамтиды. Алғашқы кезеңде антигендер белгілі бір ұяшық туралы ақпаратты тасымалдайтын молекулаларға қатысады. Егер иммундық жүйе құпия кодты танымаса, ол «дабыл» сигналын береді. Антиденелер «сыртқы» антигендерге байланады және оның жасушаны байланыстырады. Ферментативті реакция бір зат басқа бірге айналғанда пайда болады. Дененің жасушаларында орын алған күрделі биохимиялық процестердің арқасында туберкулездің микобактерияларына қарсы антиденелер анықталады. Бұл талдау бос асқазанда орындалады. Бұған қоса, оны жүзеге асыруға бірнеше күн қалғанда пациент қуырылған тағамдарды және майлы тағамдарды тастау керек. Биологиялық сұйықтық вакуум жүйесі арқылы жиналады. Сау адамда G және M тобына жататын антиденелер қанға қатыспайды. Осы заттардың табылуы өкпедегі инфекцияның болуын көрсетеді. Алайда, осы антиденелердің бірыңғай анықтауы анық емес диагнозды жеткізуге мүмкіндік бермейді. Науқасты растау үшін, микроскопты, флюорографияны немесе рентген сәулелерін тағайындауға болады. Микобактерия туберкулезі үшін қақырықты тексеру Осы талдауды орындау үшін стерильді контейнер қолданылады. Микробактерия туберкулезінде қақырықты жинау алдында бірден науқас өзінің тістерін тазалауы керек. Егер бұл жасалмаса, оның нәтижелері ауыз қуысының зиянды микроорганизмдерімен бұрмалануы мүмкін. Таңертең микобактерия туберкулезінде қақырықты жақсы - түнгі ұйқыдан кейін. Ол стерильді контейнерге ұрады, ол дереу жабық болуы керек. Құпияны қараңғы және салқын жерде сақтаңыз. Балқуды жинау уақытынан бастап оңтайлы уақыт 2 сағатты құрайды. Ол келесі әдістермен жүзеге асырылады: бактериоскопиялық; бактериологиялық. Бірінші әдіс микроскопты қолдануды қамтиды. Екінші әдіс бойынша зерттеу мынадай түрде жүргізіледі: Күкірт арнайы «реагент» арқылы сұйылтылады. Түтікше құрылғыға жіберіледі, ол бактериялардың өсуі үшін ерекше жағдайлар жасайды. Жаңадан пайда болған көмірқышқыл газы бояумен біріктіріледі. Флуоресценция деңгейі сынақ үлгісіндегі микроорганизмдердің түріне бағаланады. Микобактерия туберкулезінің қасиеттері Бұл зиянды микроорганизмдердің сипаттамалары олардың химиялық құрамымен анықталады. Кохтің таяқшасы - 80% су және 3% күл. Құрғақ қалдық құрамында ақуыздардың 40% және полисахаридтердің саны бар. Atipical mycobacterium tuberculosis (сондай-ақ, осы топтың басқа микроорганизмдері) өте улы болып табылады. Ол Кохтың тірі де, өлген таяқына да тән. Mycobacterium tuberculosis - сыртқы ортадағы тұрақтылық Кохтың сөресі басқа бақталастардан «аман қалуымен» ерекшеленеді. Mycobacterium tuberculosis келесі ортаға төзімді: қышқыл; алкоголь; сілтілі. Суда Кохтың таяғы 150 күнге дейін зиянды әсерін сақтайды. Сүтті өнімдерде бұл сиырлар 10 айға дейін өмір сүреді. Туберкулездің микобактериясының қандай температурада өлетінін біле отырып, оның көбеюіне жол бермейсіз. Тікелей күн сәулесі Кахтың таяқшасын 4-5 сағатта бейтараптайды. Бұдан басқа, микроорганизмдер жарты сағат 85 ° C немесе одан жоғары температурада өледі. Микоплазма-сиырдағы плевропневмонияны зерттеу кезінде ашылған жасуша қабырғасы жоқ бактериялар, бір клеткалы микроорганизмдер класы. Микоплазмалар, ең төмен ұйымдастырылған, өздігінен көбейетін тірі организмдер болып табылады, олардың генетикалық ақпаратының көлемі Escherichia coli-ге қарағанда 4 есе аз. Микоплазмалар басқа бактериялардан қатаң жасуша қабырғасының болмауымен (нәтижесінде сыртқы ортадан тек цитоплазмалық мембрана бөлінеді) және айқын полиморфизммен ерекшеленеді. Бір түрдің мәдениетінде үлкен және кіші сфералық, эллипс тәрізді, диск тәрізді, өзек тәрізді және филиформды, оның ішінде тармақталған (осыған байланысты барлық микоплазмалар бір уақытта актиномицеттер қатарына енген) жасушаларды ажыратуға болады. Көбеюдің әртүрлі әдістері сипатталған: фрагментация, екілік бөліну, бүршік. Бөлу кезінде алынған жасушалар мөлшеріне тең емес, көбінесе олардың біреуі тіпті өміршең емес. Микоплазмаларға ең кішкентай белгілі жасушалық микроорганизмдер, оның ішінде қоректік ортадағы тәуелсіз көбеюдің теориялық шегінен аз формалар жатады (сфералық жасушалар үшін бұл шек диаметрі 20 нм болатын ұзындығы 0,15—0,20 мкм және филиформалар үшін 13 мкм құрайды). Микоплазмалар кең ортада өсе алады: қарапайым минералдан бастап күрделі органикалық заттарға дейін, бір бөлігі тек қабылдаушы организмде болады. Микоплазмалардың алмасу өнімдері (пероксидтер, нуклеаздар, гемолизиндер) қабылдаушы жасушаға деструктивті әсер етеді. Бұрын микоплазмалар негізінен адамдар мен жоғары жануарларды паразиттейді деп есептелген. Енді табиғатта микоплазмалардың таралуы және экологиялық рөлі әлдеқайда кең екендігі көрсетілген. Олар топырақта, тас көмірде және ыстық бұлақтарда кездеседі, сапротрофтар, симбиотикалық формалар табылды. Әр түрлі түрлер қатаң аэробтар немесе міндетті анаэробтар. Микоплазмаларды анықтау әдістері екі топқа бөлінеді — культуралық және балама. Культуралық әдістер биологиялық материалдың үлгілерін өсіруге негізделген, онда микоплазмалардың болуы тексеріледі, селективті (sin. және анаэробты жағдайларда агар қоректік орталарды қоса отырып, сұйық. Балама әдістер полимеразды тізбекті реакцияға (ПТР), флуоресцентті таңбаланған зондтары бар микоплазмалардың ррнқ-ны будандастыруға және микоплазмалардың метаболикалық ферменттерінің белсенділігін анықтауға негізделген. Микоплазмаларды өсіруге арналған орта Микоплазмалар-талап етілетін микроорганизмдер. Микоплазмалар арнайы элективті (селективті) сорпалық ортада өсіріледі. Микоплазмаларға арналған орталарда әртүрлі сығындылар мен пептондар, натрий хлориді, төмен концентрациядағы агар бар (0,3 % [w/v] жартылай сұйық, пробиркалардағы бағандар немесе 1,3 % [w/v] Петри шыныаяқтары). Сонымен, ірі қара мал етінің сығындысы, ірі қара малдың жүрегінің панкреатиялық гидролизаты (SCRS) және казеин азот, көміртек, дәрумендер мен аминқышқылдарының көздерін қамтамасыз етеді, сонымен қатар көміртегі көзі болып табылады. Натрий хлориді ортадағы осмотикалық тепе-теңдікті сақтайды. Төмен концентрациядағы Агар ең үлкен (мүмкін) колониялардың қалыптасуын қамтамасыз етеді. Микоплазмалар агар бағанасында өсіп, сфералық пішінді колонияларды құрайды, олар Петри шыныаяқтарында немесе жартылай сұйық агар бағаналары бар пробиркаларда микроскоптың кішкентай ұлғаюымен қарастырылады. Сонымен қатар, микоплазмаларды өсіру үшін ашытқы сығындысы және жылқы сарысуы (1,6—20 % [v/v]) сияқты байытатын қоспалар селективті ортаға қосылады. Ашытқы сығындысы-нуклеин қышқылдарының прекурсорларының көзі, ал жылқы сарысуы — микоплазмалардың өсуін ынталандыратын холестериннің көзі. Микоплазманы анықтаудың қолданбалы аспектілері Медициналық бақылау зертханаларында микоплазмаларды жедел бақылау үшін ПТР негізінен әмбебап праймерлерден 23s және 16s гендеріне дейін қолданылады, олар микоплазмалардың әртүрлі түрлерінің арасында гомология дәрежесі жоғары. Үлгіні неғұрлым мұқият зерттеу және толық сипаттау үшін цитоиммунофлуоресценттік микроскопия әдісімен немесе/және индикаторлық (бақылау) культура әдісімен үйлесімде культуралық әдіс қолданылады. Айта кету керек, емдік мақсатта қолданылатын препараттардағы микоплазмаларды анықтаудың стандартты әдісі (ақуыздық фармацевтика, вакциналар, сарысулар) мәдени әдіс пен индикаторлық культура әдісінің үйлесімі болып табылады, ал ПТР әлі де "стандарт"ретінде келісілмеген. Кейбір мамандардың пікірінше, бұл ПТР әдісімен үлкен көлемдегі сынамаларды талдау мүмкін еместігімен байланысты, онда микролиттердің ретті сынамасының көлемі (микоплазмалық ДНҚ-ның болжамды концентрациясына байланысты 5-15 мкл), ал культуралық әдіспен индикаторлық культура әдісімен бірге миллилитр ретінің үлкен көлемін талдауға болады (мысалы, 10 мл үлгінің селективті ортасы бар колбаны себу). Үлкен көлемді пайдалану препараттың партиясын (Лотты) сипаттау кезінде әдістің сезімталдығын ескерумен негізделеді. Mycoplasma pneumoniae-жеңіл SARS деп аталатын респираторлық инфекцияның қоздырғышы. Кейбір зерттеушілер Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium және Ureaplasma urealyticum тыныс алу және урогенитальды трактілердің, иммундық, эндокриндік және жүйке жүйелерінің, сондай-ақ тірек-қимыл аппаратының патологиясын дамытуға жауапты деп санайды. Басқалары микоплазмалардың адам патогенезіндегі маңызды рөлін жоққа шығарады. Микоплазмоз Mycoplasma genitalium тудырған микоплазмоз міндетті емдеуге жатады. Урогенитальды микоплазмалардың басқа түрлері: Mycoplasma hominis және Ureaplasma urealyticum — шартты патогенді микроорганизмдерге жатады. |