Методы диагностики ИППП. УИРС методы Диагностики ИППП.. Современные методы диагностики иппп
 Скачать 26.43 Kb.
|
|
Федеральное Государственное Бюджетное Общеобразовательное Учреждение Высшего Образования УИРС Тема:Современные методы диагностики ИППП Выполнил: Проверила: 2020 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ СУЩЕСТВУЮЩИЕ МЕТОДЫ МИКРОСКОПИЯ ПЦР РЕАКЦИЯ NASBA ИФА КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ МЕТОД ТЕСТ НА ВПЧ НОВЫЕ МЕТОДЫ ВВЕДЕНИЕ В настоящее время одной из актуальных проблем акушерско-гинекологической практики является широкое распространение среди популяции инфекций, передающихся половым путем (ИППП), которые оказывают неблагоприятное влияние на репродуктивную функцию женщин, а также ухудшают перинатальные исходы у их потомства. Основными возбудителями ИППП являются: Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrheae, Treponema pallidum, Micoplasma genitalium, Ureaplasma urealiticum, Herpes II, цитомегаловирус (ЦМВ), вирус папилломы человека (ВПЧ). Распространение ИППП в мире колоссально. Ежегодно трихомониаз диагностируется у 174 млн человек, хламидиоз – у 92 млн, гонорея – у 62 млн, сифилис – у 12 млн, уреаплаз- моз–у 174млн. ИППП вызывают разнообразную акушерскую патологию: неразвивающуюся беременность, привычное невынашивание беременности, преждевременный разрыв плодного пузыря, преждевременные роды, послеродовый эндометрит, хориоамнионит, плацентит, внутриутробное инфицирование плода, внутриутробную гибель плода, пороки раз- вития плода, неудачи в попытках эктракорпорального оплодотворения. Основными методами, позволяющими диагностировать ИППП, на сегодняшний день являются: микроскопия нативного мазка полимеразная цепная реакция реакция транскриптационной амплификации NASBA иммунофлюоресцентный анализ иммуноферментный анализ культуральный метод ВПЧ Digene-test Микроскопия нативного мазка из уретры, содержимого задней стенки влагалища и шейки матки. Полученный соскоб наносится на стекло и окрашивается специальными красителями (по Грамму), позволяющими под микроскопом более четко различить бактерии. С помощью мазка оценивают следующие показатели: количество лейкоцитов, эритроцитов, эпителия, состав флоры, наличие трихомонад, гонококков, грибков, лактобацилл. Мазок является обязательным, но предварительным видом диагностики половых инфекций, поскольку вирусные, хламидийные и микоплазменные инфекции фактически не определяются с помощью мазка. Специфичность и чувствительность данного метода для диагностики гонококковой инфекции составляют 45–70% и 70% соответственно, трихомониаза – 60% и 90%, кандидозного вагинита – 100% и 65% . Отрицательной стороной метода является отсутствие возможности определения разновидности возбудителя. В этом случае, в качестве дополнительного исследования на ЗППП проводится бакпосев выделений на питательные среды. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – качественный и количественный анализ содержания ДНК в биологических средах и субстратах. Качественная ПЦР (Polymerase chain reaction – PCR, в англоязычном варианте) применяется тогда, когда достаточно только выявить наличие фрагментов ДНК, а количественная (ПЦР в режиме реального времени – Real-Time PCR) – если необходимо получить информацию о вирусной нагрузке (количестве вируса), адекватности назначенного лечения или его результативности, о риске обострения заболевания. Высокая специфичность позволяет определять уникальную последовательность нуклеотидов, характерную только для конкретного возбудителя. Специфичность и чувствительность данного метода при диагностике хламидийной и микоплазменной инфекций составляют более 90%, чувствительность при диагностике вируса простого герпеса и цитомегаловируса составляет 95–97%, специфичность – 90–100%. Метод может использоваться как скрининговый для выявления гонококков . Усовершенствованный метод ПЦР в режиме реального времени (Real-Time) лишен целого ряда недостатков своих предшественников, что значительно повышает его точность. Принцип детекции накопления флуоресцентного сигнала в процессе ПЦР-амплификации открыл широкие возможности перед молекулярной диагностикой. Наибольшая ценность данного метода заключается в возможности количественных измерений. Причем, в отличие от традиционных подходов (например, ПЦР с гибридизационно-ферментной детекцией) метод Real-Time ПЦР позволяет проводить количественные измерения в более широком линейном диапазоне за меньшее количество времени. RAPD-ПЦР (Random Amplified Polimorphic DNA) – молекулярно-генетический метод исследования, основанный на ПЦР ДНК с участием произвольных праймеров (RAPD-анализ). Метод исследует локусы ДНК с помощью одиночных праймеров, узнающих комплементарные участки на обеих цепях ДНК. В отличие от аллозимного, метод позволяет анализировать не только уникальную, но также некодирующую часть ДНК. К недостаткам метода следует отнести низкую воспроизводимость результатов, обусловленную повышенной чувствительностью к условиям реакции: концентрации ионов магния, соотношению праймер/матрица, температурному режиму. В связи с чем, метод не нашел массового применения в клинической практике. Тем не менее, RAPD-анализ может быть использован как экспресс-метод выявления генетического полиморфизма и как источник уникальных локус-специфичных маркеров Реакция транскриптационной амплификации NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplificaition) является в настоящее время наиболее чувствительным тестом, применяемым для диагностики различных инфекций. NASBA тест – это метод детекции РНК, основанный на одновременном действии трех ферментов: обратной транскриптазы, РНК- азы и РНК-полимеразы. Этот метод обладает очень высокой чувствительностью, поскольку мишенью для исследования являются молекулы РНК рибосом микроорганизмов. Количество рибосом в одной бактериальной клетке огромно, до нескольких десятков тысяч, что приводит к тому, что выявление возбудителя возможно даже в тех случаях, когда его количество слишком мало. Тем самым данный метод обладает преимуществом перед ПЦР. Это актуально в случаях латентного, скрытого течения инфекции, а также метод может быть с успехом использован для контроля после лечения. Специфичность и чувствительность метода при диагностике гонореи составляет 100% и 90% соответственно, хламидийной инфекции приближается к 100%. Метод NASBA следует использовать в качестве стандарта после лечения тех или иных инфекций, поскольку нередки случаи ложноположительных результатов ПЦР после лечения . Иммуноферментный анализ (ИФА) – метод, в основе которого лежит иммунная реакция антигена с антителом с последующей детекцией окрашенных продуктов ферментативной реакции при исследовании клинических образцов в сравнении с негативными и позитивными контролями. Серологические методы позволяют дифференцировать острые и хронические формы, выделить стадию заболевания и выявлять практически здоровых носителей. Специфичность и чувствительность метода при диагностике сифилиса, цитомегаловируса, вируса простого герпеса – около 100%. Серологические методы диагностики при хламидиозе широкого применения не нашли, поскольку сам факт обнаружения антител к хламидиями еще не означает, что у больного возбудитель присутствует на момент обследования. Возможно, хламидиоз был излечен в прошлом. Достоинство метода: быстрота, непосредственное определение возбудителя в небольшом объеме исследования, недостаток – ложноотрицательные результаты при гонорейном и хламидийном процессе, зависимость от человеческого фактора Культуральный метод (бактериологический посев) – стандарт обнаружения всех видов инфекций. Его применение ограничено, так как сложно, неудобно транспортировать собранный материал. Культуральный метод является высокоспецифическим методом для выявления половых инфекций (при диагностике гонореи, трихомониаза, хламидиоза, микоплазм, специ- фичность составляет около 90%). Он заключается в исследовании с помощью специальных сред материала, полученного из влагалища или уретры. В настоящее время существуют отечественные и зарубежные питательные среды, широко используемые для диагностики гонореи, – элективные и селективные с основой из мясопептонного агара, а также с добавлением антибиотиков. Культуральный метод исследования является «золотым стандартом» в диагностике трихомониаза. Созданы многочисленные прописи питательных сред, выпускаемых в России и за рубежом, и используемых при сомнительных результатах микроскопии, хроническом рецидивирующем трихомонозе, обследовании детей, беременных женщин. Облигатный внутриклеточный паразитизм хламидий не дает возможности выращивать их на обычных искусственных питательных средах, для выделения хламидий используются клеточные линии L-929, McCoy, Hela. Элективные питательные среды для микоплазм содержат сыворотку лошади и дрожжевой экстракт, а для U. urealyticum — и мочевину. Культуральная диагностика с использованием жидких питательных сред относится к количественным методам. Для выделения вирусов простого герпеса используют культуры клеток и проводят посев исследуемого материала на куриные эмбрионы. В культурах клеток вирусы образуют бляшки (бляшки, образованные ВПГ 2-го типа крупнее) и дают характерный цитопатический эффект на куриных эмбрионах. Высокая чувствительность метода обусловлена тем, что происходит культивирование специфического и подавление сопутствующего содержимого материала (при диагностике гонореи, трихомониаза, хламидиоза, микоплазменной инфекции, чувствительность метода составляет 80–90%). Наиболее часто этот метод используется для диагностики мико- и уреаплазм . ВПЧ Digene – test – это единственный в мире лабораторный тест, обладающий наивысшей клинической чувствительностью, позволяющий, наряду с цитологическим иссле- дованием, достоверно определить отсутствие или наличие предрасположенности к раку шейки матки. Это значит, что ВПЧ Digene - test определяет клинически значимую концен- трацию вируса, которая характеризует угрожающий уровень инфекции, приводящий к развитию неоплазии шейки матки. Исследование автоматизировано, обеспечено автоматической верификацией результатов и выдачей заключений. Прогностическая ценность теста – 99%. Чувствительность – свыше 95%. Большинство авторов считает, что монодиагностика может давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты, особенно в тех регионах, где нет высокочувствительных и специфичных методов диагностики. Поэтому наиболее оптимальным следует считать следующий алгоритм постановки диагноза. Для диагностики хламидийной инфекции предпочтительны ПЦР и ПИФ (НПИФ); мико- и уреаплазм – ПЦР и культуральный метод; герпетической и цитомегаловирусной инфекций – ПЦР и ИФА; трихомониаза – нативный мазок на флору; гонореи – нативный мазок и посев из цервикального канала, уретры, прямой кишки; сифилиса – ИФА; вируса папилломы человека – ПЦР, Digene-test. Новые методы За последние десятилетия появилось множество новых методов диагностики ИППП . Многие из них демонстрируют высокие диагностические характеристи- ки: CPA (Cross-priming amplification) – 93,7–98,2% и 100%, петельная изотремическая амплификация (LAMP – Loop-mediated amplification) – 94,7–95% и 85,7%, диагностическая чувствительность и специфичность, соответственно . Некоторые методы обладают преимуществами перед «классическими» методами выявления ИППП. Методика диагностики N. gonorrhoeae, C.trachomatis с помощью биосенсоров может быть реализована на портативном ап- парате, что позволит выявлять эти ИППП вне лаборатории, например, в тех областях и странах, где лаборатории труднодоступны [16]. CPA позволяет детектировать наличие или отсутствие N. go- norrhoeae или C. trachomatis «невооруженным» глазом по соответствующему окрашиванию, что делает этот метод простым в использовании СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ Акушерство. Клинические лекции : учебное пособие / Под ред. проф. О.В. Макарова. - 2014. - 640 с. Современные методы диагностики и лечения инфекций, передающихся половым путемл.В. Боровкова, Е.В. челнокова, кафедра акушерства и гинекологии ФПКВ и ПО ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития» Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология 2015: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. — 5-е изд., перераб. и доп. — М.: Деловой экспресс, 2016. — 768 с. Современные методы диагностики инфекций, передаваемых половым путем А.С.Коновалов, А.В.Ходяков, А.Г.Зуева, Г.Х.Хайруллина ООО «НекстБио», Москва Российский университет дружбы народов, Москва |