ФС_Рибофлавин_27.04.2021. Статья рибофлавин фс
 Скачать 40.86 Kb.
|
|
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Субстанция представляет собой продукт ферментации. Cодержит не менее 97,0 % и не более 103,0 % рибофлавина C17H20N4O6 в пересчёте на сухое вещество. Описание. Жёлтый или оранжево-жёлтый кристаллический порошок. *Проявляет полиморфизм. Растворы рибофлавина неустойчивы на свету, особенно в присутствии щелочей. Растворимость. Очень мало растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96 %. Подлинность 1. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»). Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля (2-10 мкм). Подвижная фаза (ПФ). Вода. Испытуемый раствор. К 25 мг субстанции прибавляют 10 мл воды, встряхивают в течение 5 мин и фильтруют. Раствор стандартного образца рибофлавина. К 25 мг стандартного образца рибофлавина прибавляют 10 мл воды, встряхивают в течение 5 мин и фильтруют. На линию старта пластинки наносят: - 1 точка: 2 мкл метиленхлорида и затем 2 мкл испытуемого раствора; - 2 точка: 2 мкл метиленхлорида и затем 2 мкл раствора стандартного образца рибофлавина. Пластинку с нанесёнными пробами сушат в токе холодного воздуха, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80-90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат в токе холодного воздуха до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и цвету флуоресценции должна соответствовать зоне адсорбции рибофлавина на хроматограмме раствора стандартного образца рибофлавина. 2. Спектрофотометрия. Спектр поглощения испытуемого раствора должен иметь максимумы при 223 нм, 267 нм, 373 нм и 444 нм. Отношение оптических плотностей A373/A267 должно составлять от 0,31 до 0,33. Отношение оптических плотностей A444/A267 должно составлять от 0,36 до 0,39. Испытуемый раствор. Смешивают равные объемы испытуемого раствора, полученного в испытании «Количественное определение», и воды. 3. Качественная реакция. Растворяют 1 мг субстанции в 100 мл воды. В проходящем свете раствор должен иметь бледно-зеленовато-желтый цвет, в отраженном свете интенсивную желтовато-зеленую флуоресценцию, которая должна исчезать при добавлении минеральных кислот или щелочей. Удельное вращение. От -135,0 до -115,0 в пересчете на сухое вещество (ОФС «Поляриметрия»). Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50,0 мг субстанции, растворяют в натрия гидроксида растворе 0,5 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Раствор используют в течение 30 мин. Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»). Все растворы используют сразу после приготовления и защищают от света. Растворитель. Натрия ацетата раствор 0,1 М. Подвижная фаза А (ПФА). Фосфорная кислота концентрированная—вода 1:1000. Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил. Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,12 г субстанции, растворяют в 10 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М, при необходимости обрабатывая ультразвуком, и доводят объём раствора растворителем до метки. Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки. Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в 1 мл натрия гидроксида раствора 0,5 М, выдерживают в дневном свете в течение 1,5 ч, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30 %, и доводят объём раствора водой до метки (содержит примеси A и B). Раствор для идентификации пиков. Содержимое флакона стандартного образца рибофлавина для идентификации пиков (содержит примеси С и D) растворяют в 1 мл смеси ПФБ—ПФА 1:9, при необходимости обрабатывая ультразвуком. Примечание Примесь А: 7,8,10-триметилбензо[g]птеридин-2,4(3H,10H)-дион, CAS 1088-56-8. Примесь В: 7,8-диметилбензо[g]птеридин-2,4(1H,3H)-дион, CAS 1086-80-2. Примесь С: 6,7-диметил-8-[(2S,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]птеридин-2,4(3H,8H)-дион, CAS 5118-16-1. Примесь D: 8-(гидроксиметил)-7-метил-10-[(2S,3S,4R)-2,3,4,5-тетрагидроксипентил]бензо[g]птеридин-2,4(3H,10H)-дион, CAS 52134-62-0. Хроматографические условия
Режим хроматографирования
Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для идентификации пиков, раствор сравнения и испытуемый раствор. Относительное время удерживания соединений. Рибофлавин – 1 (около 16 мин); примесь С – около 0,2; примесь D – около 0,5; примесь А – около 1,4; примесь В – около 1,9. Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси А и примеси В должно быть не менее 5. Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь А – 0,7; примесь В и D – 1,4, примесь С – 2,3. Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора: - площадь пика примеси А не должна превышать 0,25-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,025 %); - площадь пика каждой из примесей B, С и D не должна превышать двукратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2 %); - площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %); - суммарная площадь пиков всех примесей не должна превышать пятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %). Не учитывают пики, кроме пика примеси А, площадь которых составляет менее 0,5-площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %). Потеря в массе при высушивании. Не более 1,5 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют около 1 г (точная навеска) субстанции. Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют около 1 г (точная навеска) субстанции. Тяжелые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы», метод 1, в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1. **Бактериальные эндотоксины. Не более 7,1 ЕЭ на 1 мг рибофлавина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители». Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота». Количественное определение. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»). Раствор натрия ацетата. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 14,0 г натрия ацетата тригидрата, растворяют воде и доводят объём раствора водой до метки. Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 500 мл помещают около 65 мг (точная навеска) субстанции, суспендируют с 5 мл воды до полного смачивания, растворяют в 5 мл натрия гидроксида раствора 8,5 %, прибавляют 100 мл воды, 2,5 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 20,0 мл полученного раствора, прибавляют 3,5 мл раствора натрия ацетата и доводят объём раствора водой до метки. Раствор защищают от света. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 444 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения воду. Содержание рибофлавина C17H20N4O6 в пересчёте на сухое вещество в процентах (Х) вычисляют по формуле: 
Хранение. В защищённом от света месте. *Приводится для информации. **Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
);