Главная страница
Навигация по странице:

  • Список полезных web-страниц

  • Строение и функции белков. Методы качественного и количественного анализа белков.

  • ПЕРВИЧНАЯ СТРУКТУРА 1-Й ЭТАП – ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА 2-Й ЭТАП – ФРАГМЕНТАЦИЯ ПОЛИПЕПТИДА

  • ЧЕТВЕРТИЧ-НАЯ СТРУКТУРА РЕНТГЕНОСТРУКТУРНЫЙ АНАЛИЗ, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ ИЗБИРАТЕЛЬНЫЙ ГИДРОЛИЗ ОЛИГОПЕПТИДЫ 3-Й ЭТАП

  • ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

  • Физико-химические свойства белков.

  • БЕЛОК В РАСТВОРЕ СТАБИЛИЗИРУЮТ 2 ФАКТОРА – ЗАРЯД И ГИДРАТНАЯ ОБОЛОЧКА ВЫСАЛИВАНИЕ ДЕНАТУРАЦИЯ МЕТОДЫ ОСАЖДЕНИЯ

  • УТРАЧИВАЕТСЯ БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СОХРАНЯЕТСЯ Рисунок 2. Графологическая структура «Методы осаждения белка»Примеры обучающих задач

  • Эталоны ответов на задачи Задача 1.

  • Методы выделения и очистки белков

  • ГОМОГЕНИЗАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ЭКСТРАКЦИЯ БЕЛКОВ ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ ВЫСАЛИВАНИЕ ХРОМАТОГРАФИЯ

  • ХРОМАТОГРАФИЯ УЛЬТРА- ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ Рисунок 3. Графологическая структура «Выделение и очистка белков»Примеры обучающих задач

  • Учебники ил и материал их электронных учебников основная литература


    Скачать 94.37 Kb.
    НазваниеУчебники ил и материал их электронных учебников основная литература
    Дата17.12.2018
    Размер94.37 Kb.
    Формат файлаdocx
    Имя файлаbiokhimija-1_kurs_lech-ped.docx
    ТипУчебники
    #60636


    ЗАКОНСПЕКТИРУЙТЕ ЭТОТ МАТЕРИАЛ И ЗАПОЛНИТЕ ТАБЛИЦЫ, ИСПОЛЬЗУЯ УЧЕБНИКИ ИЛ И МАТЕРИАЛ ИХ ЭЛЕКТРОННЫХ УЧЕБНИКОВ

    Основная литература:

    1. Биохимия : учебник / под ред. Е. С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 768 с. : ил. http://www.studentlibrary.ru 

    Список полезных web-страниц 

    Наглядная биохимия/ Я. Кольман, К.- Г. Рем, - Москва “Мир” 2000

    http://www.chem.msu.su/rus/teaching/kolman/index.htm

     

    Биохимия: Учеб. для вузов, Под ред. Е.С. Северина., 2003

    http://www.biochemistry.ru/biohimija_severina/B5873Content.html

     

    Биологическая химия под ред. Е.С. Северина, 2011 г (новая редакция учебника с упражнениями, тестами и задачами для студентов специальности Лечебное дело и Фармация)

    http://biochemistry.ru/Biologicheskajahimija2011/#/1/

     

     

    Очень полезный ресурс, в котором представлен хороший лекционный материал

    http://biokhimija.ru/lekcii-po-biohimii.html

    ♦ ◊ ♦

    Тема: Белки.
    Белки (протеины) – высокомолекулярные азотсодержащие органические соединения, играют важную роль в построении живой ткани и в осуществлении процессов жизнедеятельности. Особенности структуры и наличие ряда уникальных свойств обеспечивают функционирование белков как одного из основных материальных носителей жизни. Представление о структуре, физико-химических свойствах и биологических функциях белков являются теоретической основой изучения всех последующих разделов биологической химии.
    Строение и функции белков. Методы качественного и количественного анализа белков.
    Используя лекции и учебники по биохимии, изучите химический состав, строение, уровни организации белковой молекулы, биологические функции белков, письменно ответьте на вопросы в тетради. Используйте таблицу 1 и рисунок 1.

    Таблица 1.

    №№

    Задание

    Указания к выполнению задания

    1

    2

    3

    1.

    Вспомните структуру и свойства аминокислот, аминокислотный состав белков.


    1. Напишите общую формулу α-аминокислоты. Как классифицируются аминокислоты по строению бокового радикала? Напишите формулы аминокислот с неполярным радикалом. Напишите формулы α-аминокислот с полярными, но незаряженными радикалами, с полярными анионогенными радикалами, с полярными катионногенными радикалами.В виде каких частиц находятся α-аминокислоты в водных растворах при нейтральном значении рН?

    Напишите формулы трипептидов: а) пролил-глицил-аланин; б) лизил-фенилаланил-серин.

    Приведите формулы кислого, основного и нейтрального трипептидов.

    1. Вспомните функциональное многообразие белков – белки ферменты, белки-рецепторы, транспортные белки, антитела.

    3.Перечислите группы простых белков, охарактеризуйте их биологическую роль.

    4. Перечислите группы сложных белков, охарактеризуйте их биологическую роль. охарактеризуйте функции небелковой части (лиганда).

    Приведите примеры важнейших хромопротеидов, отметьте их биологическую роль.

    Какова функция липопротеинов плазмы крови? Перечислите основные группы липопротеинов сыворотки крови, отметьте клиническое значение определения липопротеинов в сыворотке крови.

    Зарисуйте схему строения биомембран как липопротеинового бислоя.

    Приведите примеры наиболее распространенных фосфопротеинов и охарактеризуйте их биологическую роль.

    2.

    Изучите уровни организации белковой молекулы.

    1. Дайте определение первичной структуры белка. Какая основная связь стабилизирует первичную структуру? Дайте определение конформации и нативной конформации полипептидной цепи. Дайте определение понятию «конформационная лабильность белков», ее значение.

    Дайте определение вторичной структуры. Какие формы вторичной структуры встречаются в природных белках? За счет каких связей стабилизируются конформации α-спирали?

    Аминокислотные радикалы каких α-аминокислот способствуют образованию α-спирали? Для какой формы вторичной структуры полипептидной цепи характерны межцепочечные водородные связи?

    Дайте определение понятия «третичная структура» полипептидной цепи. Какие связи обеспечивают стабильность третичной структуры полипептидной цепи? Между какими группами может возникнуть гидрофобное взаимодействие? Между аминокислотными остатками каких α-аминокислот возникает дисульфидная связь? Покажите на примере.

    Как располагаются полярные радикалы аминокислотных остатков при формировании третичной структуры полипептидной цепи в водной среде?

    Каковы основные факторы, определяющие трехмерную структуру белка?

    Какие белки называют гомологичными?

    Каков характер взаимосвязи между уровнями организации белковой молекулы и ее биологической активностью?

    Дайте определение четвертичной структуре белка.

    Какие связи стабилизируют четвертичную структуру белка?

    Что такое протомеры белковой молекулы?


    3.

    Изучите методы исследования первичной структуры белка.

    1. Какие методы гидролиза белка Вы знаете?

    2. В чем суть хроматографического анализа. Приведите классификацию хроматографических методов.

    3. Приведите примерную последовательность операций при установлении первичной структуры белка.

    4. Продумайте, какое практическое значение для медицины имеют исследование аминокислотного состава и первичной структуры белков.

    4.

    Ознакомьтесь с методами установления вторичной, третичной и четвертичной структуры белка.

    1.Перечислите и охарактеризуйте методы, позволяющие изучить вторичную, третичную и четвертичную структуру белка.

    5.

    Изучите, какими методами можно определить количественное содержание белка и аминокислот в биологических объектах.

    1.Сформулируйте принцип количественного определения белка биуретовым методом.

    3.Выпишите границы содержания белка в сыворотке крови в физиологичеких условиях и приведите примеры заболеваний, сопровождающихся гипо- и гиперпротеинемией.


    ПЕРВИЧНАЯ СТРУКТУРА

    1-Й ЭТАП – ОПРЕДЕЛЕНИЕ

    АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА

    2-Й ЭТАП – ФРАГМЕНТАЦИЯ

    ПОЛИПЕПТИДА

    ПОЛНЫЙ ГИДРОЛИЗ

    РАЗДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТЕФИКАЦИЯ СМЕСИ АМИНОКИСЛОТ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ

    ВТОРИЧНАЯ СТРУКТУРА

    ТРЕТИЧНАЯ СТРУКТУРА

    ЧЕТВЕРТИЧ-НАЯ СТРУКТУРА

    РЕНТГЕНОСТРУКТУРНЫЙ АНАЛИЗ, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ

    ИЗБИРАТЕЛЬНЫЙ ГИДРОЛИЗ

    ОЛИГОПЕПТИДЫ

    3-Й ЭТАП

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

    ДЕГРАДАЦИЯ ОЛИГОПЕПТИДОВ ПО ЭДМАНУ

    СОСТАВЛЕНИЕ КАРТ

    ПЕРЕКРЫВАЮЩИХСЯ ПЕПТИДОВ

    УСТАНОВЛЕНИЕ УНИКАЛЬНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ВСЕЙ ПОЛИПЕПТИДНОЙ ЦЕПИ
    Рисунок 1. Графологическая структура

    «Качественный анализ – установление структуры белка»

    Обучающие задачи


    Задача 1.Будет ли одинаковой интенсивность окраски, полученной в реакции с биуретовым реактивом, для 100 молекул альбумина (Mr 64000 D) и 100 молекул иммуноглобулина G (Mr 175000D)? В чем заключается принцип биуретовой реакции?

    Ответ. С биуретовым реактивом реагируют пептидные группы белков – образуется хелатный комплекс фиолетового цвета. По сравнению с иммуноглобулинами, альбумин содержит меньше остатков аминокислот, так как имеет меньшую молекулярную массу, следовательно, интенсивность окраски раствора альбумина будет меньше.

    Задача 2.Подавляющее большинство протеиногенных аминокислот дают синее окрашивание с нингидрином, а пролин и оксипролин – желтое. Объясните это различие, принимая во внимание химизм нингидриновой пробы и особенности структуры протеиногенных аминокислот.

    Ответ. Нингидрин является специфичным реагентом для -аминокислот, тогда как пролин и оксипролин являются иминокислотами. С -аминокислотами нингидрин реагирует по следующей схеме:

    нингидрин α - аминокислота


    продукт реакции сине-фиолетового цвета альдегид

    (светопоглощение в области 550-570 нм)
    Физико-химические свойства белков.



    При подготовке к занятию следует изучить обратимые и необратимые методы осаждения белков, их физико-химические свойства согласно таблице 2 и рисунку 2.

    Таблица 2.

    №№

    Задание

    Указания к выполнению задания

    1

    2

    3

    1.

    Изучите растворимость и осаждаемость белков.

    1. Какие физико-химические свойства белков обусловливают их растворимость? Чем обусловлена различная растворимость глобулярных и фибриллярных белков? Перечислите факторы, определяющие растворимость белков.

    2.Охарактеризуйте особенности белковых растворов. В чем суть нефелометрического определения содержания белка?

    3. Приведите два основных фактора стабилизации белка в растворе.

    4. В чем суть явления высаливания?

    5. Приведите примеры практического использования высаливания.

    6. Дайте определение явлению денатурации. Приведите классификацию видов денатурации.

    7.Объясните механизм денатурирующего действия температуры, солей тяжелых металлов, спиртов, фенолов.

    8. Приведите примеры практического использования денатурации белков.

    2.

    Изучите электрические свойства белков.

    1.Напишите схему диссоциации карбоксильной группы и аминогруппы в составе белка.

    2.Выпишите два основных фактора, определяющих заряд белковой молекулы.

    3.Напишите, что называется изоэлектрической точкой. Каковы свойства белков в изоэлектрическом состоянии? В какой среде будет находиться изоэлектрическая точка альбуминов и гистонов?


    БЕЛОК В РАСТВОРЕ СТАБИЛИЗИРУЮТ

    2 ФАКТОРА – ЗАРЯД И ГИДРАТНАЯ ОБОЛОЧКА

    ВЫСАЛИВАНИЕ

    ДЕНАТУРАЦИЯ

    МЕТОДЫ ОСАЖДЕНИЯ

    ДЕГИДРАТАЦИЯ И НЕЙТРАЛИЗАЦИЯ ЗАРЯДА БЕЛКОВЫХ ЧАСТИЦ

    НАРУШЕНИЕ ВТОРИЧНОЙ,

    ТРЕТИЧНОЙ И ЧЕТВЕРТИЧНОЙ СТРУКТУРЫ

    БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

    УТРАЧИВАЕТСЯ

    БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СОХРАНЯЕТСЯ
    Рисунок 2. Графологическая структура «Методы осаждения белка»

    Примеры обучающих задач

    Задача 1.Сделайте предположение об аминокислотном составе впервые выделенного пептида, принимая во внимание следующие экспериментальные данные:

    -пептид не обладает электрофоретической подвижностью в щелочной среде (рН 9,8);

    -при электрофорезе в кислой среде (рН5,6) движется к катоду;

    -не дает окрашивания при обработке концентрированной азотной кислотой (ксантопротеиновая проба отрицательна).
    Задача 2.Многие патологические состояния могут сопровождаться изменением рН мочи. Например, для цистита характерна щелочная реакция мочи. Объясните, почему при анализе мочи на содержание белка, в частности при осаждении белков кипячением, необходимо контролировать рН и, если необходимо, доводить его до слабокислой реакции?
    Задача 3.Белок, синтезируемый in vivo, принимает биологически активную конформацию. В то же время, при синтезе белка in vitro не всегда удается получить функционально активный белок, даже при отсутствии сбоев, ошибок в первичной структуре. Объясните этот феномен.

    Эталоны ответов на задачи

    Задача 1.Аминокислотный состав пептида отличается высоким содержанием диаминомонокарбоновых кислот – лизина и аргинина, в то же время, в структуре пептида отсутствуют ароматические и гетероциклические аминокислоты - фенилаланин, тирозин, гистидин и триптофан, дающие положительную ксантопротеиновую реакцию. В частности, тирозин с концентрированной азотной кислотой реагирует по следующей схеме:

    желтая окраска


    оранжевая окраска
    Задача 2.В сильнокислой и щелочной среде осаждению белков препятствует заряд (отрицательный в кислой и положительный в щелочной). Поэтому, если рН исследуемой мочи не соответствует слабокислой реакции, можно получить ложно отрицательный результат.
    Задача 3.В живой клетке процесс укладки синтезируемой полипептидной цепи - фолдинг регулируется особыми белками шаперонами. Эти белки контролируют формирование стабильной и биологически активной конформации, предотвращая образование из полипептидной цепи неспецифических клубков и агрегатов, а также участвуют в доставке белков к субклеточным мишеням.
    Методы выделения и очистки белков

    Таблица 3.

    №№

    Задание

    Указания к выполнению задания

    1

    2

    3

    1.

    Изучите методы выделения индивидуальных белков.

    1. Перечислите методы фракционирования белков, позволяющие получить индивидуальный белок.

    2. Кратко сформулируйте, на каких физико-химических свойствах основаны перечисленные методы.

    2.

    Изучите, почему белки обладают свойствами коллоидов.

    1.Выпишите способы определения молекулярной массы белков.

    2.Перечислите данные, подтверждающие высокую молекулярную массу белков.

    3.Чем можете подтвердить способность белков образовывать коллоидные растворы?

    5.Охарактеризуйте принцип метода диализа. Какое практическое значение имеет диализ?

    3.

    Вспомните электрические свойства белков.

    1. Вспомните механизм возникновения электрического заряда. Что такое изоэлектрическая точка?

    2.Охарактеризуйте явление электрофореза белков. Запомните виды электрофореза.

    3.Укажите факторы, от которых зависит скорость перемещения белковых молекул в поле постоянного электрического тока.

    4. Напишите, на какие фракции разделяют белки сыворотки крови при электрофорезе на бумаге. Выпишите протеинограмму – соотношение белковых фракций - здорового ребенка и взрослого человека.

    5. Изучите возможности электрофоретического разделения белков на полиакриламидном геле, принцип диск-электрофореза и его значение для разделения белков сыворотки крови.

    4.

    Повторите растворимость белков.

    1. Выясните, чем определяется растворимость белков, и какие факторы стабилизируют белковую молекулу в растворе.

    5.

    Изучите метод хроматографии белков.

    1.Выпишите классификацию методов хроматографического разделения белков по механизму разделения и технике проведения. Сформулируйте принцип метода адсорбционной, ионнообменной, афинной, и распределительной хроматографии. Кратко опишите процедуру гель-фильтрации и газожидкостной хроматографии.


    ХРОМАТОГРАФИЯ'>ГОМОГЕНИЗАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

    ЭКСТРАКЦИЯ БЕЛКОВ

    ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ

    ВЫСАЛИВАНИЕ

    ХРОМАТОГРАФИЯ

    ЭЛЕКТРОФОРЕЗ

    КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ

    ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ БЕЛОК

    ОЧИСТКА ОТ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ПРИМЕСЕЙ

    ДИАЛИЗ

    ГЕЛЬ-

    ХРОМАТОГРАФИЯ

    УЛЬТРА-

    ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
    Рисунок 3. Графологическая структура «Выделение и очистка белков»
    Примеры обучающих задач

    Задача 1.При электрофорезе на бумаге белков сыворотки крови больного Р.С. получили следующие результаты: альбумины-48,5%, α1-глобулины-12,6%, α2-глобулины-7,3%, β-глобулины-14,8%, γ-глобулины-16,8%. Выделите изменения, обнаруженные в белковом спектре крови больного и рассчитайте величину белкового коэффициента, если общее содержание белка в крови у данного больного составляло 62 г/л.
    Задача 2.Необходимо разделить смесь белков, содержащую церрулоплазмин (Mr151000, ИЭТ 4,4), β-лактоглобуллин (молекулярная масса 150000, ИЭТ 6,3) и γ-глобулин (молекулярная масса 37100, ИЭТ 5,2). Предложите методы разделения смеси этих белков. В какой последовательности будут выделяться эти белки из смеси?
    Эталоны ответов на задачи

    Задача 1.Снизилось процентное содержание альбуминов (в норме альбумины составляют 55,4-78,9%), повысилось содержание α1- и β-глобулинов. Белковый коэффициент снижен и составляет 0,93. Альбуминов в сыворотке крови больного содержится 30 г/л, глобулинов – 32 г/л.

    Задача 2.Для отделения β-лактоглобулина, значительно отличающегося по величине молекулярной массы, можно использовать метод гель-фильтрации. Для разделения церрулоплазмина и γ-глобулина, имеющих различные значения ИЭТ, целесообразно использовать электрофорез.


    написать администратору сайта