|
|
клеточная стенка. Ультраструктуры бактериальной клетки клеточная стенка картушевич Полина Денисовна 223 группа
Ультраструктуры бактериальной клетки: КЛЕТОЧНАЯ СТЕНКА
Картушевич Полина Денисовна 223 группа
Бактериальная клетка
Постоянные структуры:
- Клеточная стенка
- Цитоплазматическая мембрана
- Цитоплазма
- Рибосомы
- Мезосомы
- Нуклеоид
Непостоянные структуры – ЗАВИСЯТ ОТ УСЛОВИЙ СУЩЕСТВОВАНИЯ БАКТЕРИИ: Капсула, Жгутики, Споры, Включения, Пили, Плазмиды
По строению клеточной стенки прокариоты подразделяются на:
–грамположительные
–грамотрицательные
- Окрашивание бактерий по Граму – метод окраски, позволяющий разделить данную группу прокариотичеких микроорганизмов на грамотрицательные бактерии и грамположительные бактерии[2].
- Грамотрицательные и грамположительные бактерии отличаются строением клеточной стенки. Метод окрашивания бактерий по Граму был предложен в 1884 году датским ученым Х. Грамом[2]. К грамотрицательным бактериям, в частности, относятся кишечные палочки, сальмонеллы, бруцеллы, возбудители дизентерии, холеры, уксуснокислые бактерии, семейство Псевдомонадовые (Pseudomonadaceae).
- Основы и сущность метода Метод окрашивания бактерий по Граму основан на различной способности микроорганизмов удерживать в клетке красители трифенилметанового ряда – кристаллический фиолетовый или генциановый фиолетовый. Сущность метода основана на различии в химическом составе и строении клеточной стенки бактерий[2][1].
- Как уже было указано, все бактерии по этому признаку делят на две группы:
- грамположительные – красящиеся по Граму; грамотрицательные – не красящиеся по Граму[1].
- Техника окрашивания бактерий по Граму Методика поверки бактерий на окрашивание по Граму включает следующие операции: На обезжиренное предметное стекло наносят в трех местах три капли воды и готовят три тонких мазка различных видов бактерий. При этом по краям располагают контрольные мазки с заведомо известным отношением к окраске по Граму. В центре – мазок исследуемой культуры[1].
- Мазки высушивают и фиксируют в пламени спиртовки[1].
- Мазки окрашивают в течение одной минуты генцианвиолентом. Для этого на предметное стекло кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанной красителем, и смачивают ее водой[1].
- Бумажку с красителем удаляют, на препарат наносят раствор Люголя (водой промывать не надо) и выдерживают 60 секунд, до полного почернения мазка[1].
- Не промывая водой, препарат обрабатывают 96% спиртом в течение 15–20 с. При этом предметное стекло покачивают. Важно четко соблюдать указанное время обесцвечивания, поскольку при увеличении его продолжительности наблюдается обесцвечивание и грамположительных бактерий[1].
- Препарат промывают водой и накладывают на его поверхность полоску фильтровальной бумаги, пропитанной фуксином Пфейфера, смачивают ее водой и окрашивают в течение 60 секунд[1].
- Фильтровальную бумагу с красителем удаляют, препарат промывают водой и осушают чистой фильтровальной бумагой[1].
- На препарат наносят кедровое масло и рассматривают с иммерсионным объективом[1].
- После такой обработки грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый или синий цвет, а грамотрицательные – в красный
- Все бактерии по отношению к окраске по Граму делятся на грамположительные - темно-фиолетового цвета и грамотрицательные - красного. Способность окрашиваться в тот или иной цвет зависит от строения их клеточной стенки и коррелирует со многими другими свойствами бактерий. У грамположительных бактерий в клеточной стенке отсутствуют ароматические и серосодержащие аминокислоты, отмечается низкое содержание липидов, у грамотрицательных, напротив, эти вещества содержатся в большом количестве. Кроме того, у грамположительных бактерий имеется магниевая соль рибонуклеиновой кислоты, отсутствующая у грамотрицательных. Она и образует прочный химический комплекс с белком, генцианвиолетом и йодом, который не разрушается при кратковременном действии спирта. У грамотрицательных такой комплекс не образуется. Они легко обесцвечиваются под действием спирта. Фуксин докрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет.
Грамположительные бактерии
- В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов и белков. Большую часть массы (40—90 %) клеточной стенки этих бактерий составляет пептидогликан (синонимы: муреин, мукопептид), ковалентно связанный с тейхоевыми кислотами (от греч. teichos — стенка).
Грамотрицательные бактерии
- В клеточной стенке грамотрицательных бактерий пептидогликана содержится меньше (5—10 %).
- В состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий входит наружная мембрана, связанная посредством липопротеина с подлежащим слоем пептидогликана.
- Наружная мембрана имеет вид волнообразной трехслойной структуры Основной компонент этих мембран — бимолекулярный (двойной) слой липидов.
- Наружная мембрана является асимметричной мозаичной структурой, представленной липополисахаридами, фосфолипидами и белками. С внешней стороны ее расположен липополисахарид (ЛПС), состоящий из трех компонентов: липида А, ядра и О-специфической цепи полисахарида.
- Липополисахарид «заякорен» в наружной мембране липидом А придающим токсичность липополисахариду, отождествляемому поэтому с эндотоксином.
- N. B.!!! Грамположительные (поддающиеся окраске) бактерии – СИНИЙ ЦВЕТ (по Граму). Их оболочка состоит из одного слоя, внешняя мембрана отсутствует. Грамотрицательные – КРАСНЫЙ ЦВЕТ (по Граму)
- Грамотрицательные бактерии имеют оболочку, не удерживающую краситель (после промывки стенка обесцвечивается). Их наружная оболочка намного тоньше, чем у грамположительных, при этом она имеет два слоя – наружную мембрану и располагающуюся под ней бактериальную стенку.
- СПОСОБЫ ОБНАРУЖЕНИЯ: электронная микроскопия, плазмолиз, метод Грама; можно разрушить клеточную стенку при помощи лизоцима
Необычные клеточные стенки прокариот
- Скользящие бактерии – клеточная стенка эластичная, позволяет менять форму клеток при движении.
- Архебактерии – клеточные стенки могут содержать: (не муреин)
–псевдомуреин;
–кислый гетерополисахарид;
–только белок (не окрашиваются по Граму).
Спасибо за внимание!
|
|
|
Скачать 5.94 Mb.