Энтеробактерии часть 1. Возбудители кишечных инфекций Микробиология брюшного тифа
 Скачать 1.15 Mb.
|
|
Возбудители кишечных инфекций Микробиология брюшного тифа Сальмонеллезы Общая характеристика семейства Enterobacteriaceae Острые бактериальные кишечные инфекции – диареи – наиболее распространённые инфекции. Их возбудителями часто являются представители семейства Enterobacteriaceae – оно объединяет бактерии, которым присущи следующие признаки: Короткие неспорообразующие палочки с закруглинными концами; Подвижные (перитрихии) или неподвижные, не образующие или образующие капсулу; Грамотрицательные; Ферментация глюкозы и ряд других углеводов; Непостоянство протеолитических свойств; Факультативные анаэробы в большинстве; Растут на обычных питательных средах и ДДС (Эндо, Левина, Плоскирева); Место обитания – кишечный тракт; Фекально-оральный механизм передачи; Нет цитохромоксидазы; Каталазопозитивные; Восстанавливают нитраты в нитриты; Хемоорганотрофы; Могут образовывать ацетоин при ферментации глюкозы (реакция Фогеса- Проскауэра). Семейство насчитывает более 30 родов и более 100 видов. Наиболее важными для человека являются: Escherichia coli Citrobacter Enterobacter Hafnia Klebsiella Salmonella Erwinia Serattia Edwardsiella Shigella Yersinia Proteus Morganella Providencia Для дифференцировки родов используют в основном биохимические признаки, для классификации внутри родов и видов изучают антигенное строение (О-, Н- и К- антигены). Микробиология брюшного тифа Брюшной тиф – тяжелое инфекционное заболевание с глубокой общей интоксикацией, бактериемией и поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника. Интоксикация проявляется сильной головной болью, помрачением сознания и бредом. Брюшной тиф как самостоятельную единицу выделил русский врач А.Г. Пятницкий в 1822 г. Возбудитель брюшного тифа – Salmonellla typhi – был обнаружен в 1880 году К. Эбертом, а выделен в 1884 г. в чистой культуре К. Гаффки. Вскоре выделены и изучены возбудители паратифов А и В – S. paratyphi A и S. paratyphi B . Морфология Короткие грамотрицательные палочки с закруглёнными концами, длиной 1-3,5 мкм и диаметром 0,5-0,8 мкм. Спор не образует, может образовывать микрокапсулу. Подвижные – перитрихии. Культивирование Сальмонеллы – факультативные анаэробы. Температурный оптимум – 37˚С, не требовательны к питательным средам. Рост на бульоне сопровождается помутнением и возможен осадок, на МПА – образуют круглые, гладкие полупрозрачные колонии. На среде Эндо – бледнорозовые гладкие колонии, на висмут- сульфит агаре – черные колонии. В случае диссоциации могут образовывать R- типа колонии. Элективной средой является желчь или желчный бульон (среда Раппорт – желчный бульон, глюкоза, индикатор Андреда, поплавок для улавливания газа) – рост сопровождается помутнением и изменением цвета среды (покраснение). Биохимические свойства Для возбудителей брюшного тифа и паратифов характерно: Проба с метиленовым красным положительна Не образуют индол Образуют сероводород Не разжижают желатин Восстанавливают нитраты в нитриты Не образуют ацетоин Лактозоотрицательные Salmonellla typhi ферментирует глюкозу и другие углеводы только до кислоты S . paratyphi A и S. paratyphi B ферментируют углеводы до кислоты и газа Salmonellla typhi по способности ферментировать ксилозу и арабинозу подразделяется на 4 типа (1 тип – ферментация ксилозы, 2 тип – не ферментирует ксилозу и арабинозу, 3 тип – ферментирует ксилозу и арабинозу, 4 тип – ферментация арабинозы) Антигенное строение Сальмонеллы имеют О- и Н- антигены. По О-антигену они подразделяются на 50 серогрупп, а по Н-антигену на серотипы. Специфичность О-антигена определяется полисахаридом ЛПС. Н- антиген имеет две фазы: I фаза – специфическая и включает более 80 вариантов, II фаза – неспецифическая и включает 9 вариантов. Также есть поверхностный антиген вирулентности – Vi-антиген. Количественное содержание Vi-антиген сольно варьируется, поэтому выделяют по Ф. Кауффману 3 группы: 1 – чистые Vi-формы, 2- малые Vi-формы и 3 – промежуточные Vi-формы. О-, Н- и Vi-антигены имеют выраженные иммуногенные свойства. Сальмонеллы также могут иметь К-антиген. Для серологической классификации сальмонелл принята классификация по Кауффману-Уайту, для идентификации сальмонелл применяют диагностические адсорбированные моно – поливалентные О- и Н- сыворотки. Также культуры сальмонелл тифа и паратифа можно подвергать фаготипированию, так как этот признак является стабильным и имеет эпидемиологическое значение. Резистентность Возбудители брюшного тифа и паратифов во внешней среде (вода, почва, пыль) сохраняются от нескольких дней до нескольких месяцев. В проточной воде могут выживать до 10 дней, в застойной – до 4 недель, на овощах и фруктах – 5-10 дней, на посуде – до 2 недель, в масле и сыре – до 3 месяцев, во льду – до 3 месяцев. Нагревание при 60˚С убивает через 30 мин., кипячение – мгновенно. Обычные химические дезинфектанты (хлор) убивают сальмонелл через несколько минут. Факторы патогенности Vi -антиген – адгезия, проникновение, антифагоцитарная активность. Эндотоксин – обладает высокой токсичностью. Ферменты агрессии – ДНК-аза, гиалуронидаза, фибринолизин и т.п. (встречается редко). Эпидемиология Источник – больной или бактерионоситель, могу быть и животные (в том числе и птица). Механизм передачи – фекально-оральный (вода, пища, молоко), возможен контактно-бытовой через предметы личного пользования. Восприимчивость высокая. Патогенез и клиника Инкубационный период – 7-25 дней . В патогенезе выделяют стадии: Стадия вторжения – проникает в тонкий кишечник через рот. Стадия инвазии – через лимфатические пути проникают в лимфоидные образования подслизистой оболочки тонкого кишечника (пейеровы бляшки и солитарные фолликулы) и, размножаясь в них, вызывают лимфангоит и лимфаденит (брюшнотифозные гранулы). Бактериемия – выход возбудителя в кровоток, начинается в конце инкубационного периода и продолжается в течение всей болезни. Стадия интоксикации вследствие распада бактерий и высвобождение эндотоксина. Стадия паренхиматозной диффузии – из крови сальмонеллы поглощаются макрофагами и разносится по всему организму. Возбудитель накапливается в желчных ходах печени, в желчном пузыре, где повторно размножаются. Также возбудитель обнаруживается в селезенке, лимфатических узлах, костном мозге, коже, почках и мочевыводящих путях и других органах. Выделительно-аллергическая стадия – начинается процесс освобождения от возбудителя через кишечник, потовые, молочные и слюнные железы, мочевыделительную систему, печень и желчный пузырь. Выделяющиеся из желчного пузыря сальмонеллы опять поступают в тонкий кишечник, откуда часть с испражнениями, а часть вновь вторгается в лимфатические узлы. Вторичное внедрение в уже сенсибилизированные узлы вызывает гиперергическую реакцию в виде некроза и образования язв, что опасно прободением стенки кишечника, внутреннего кровотечения и развитием перитонита. Стадия выздоровления – заживление язв, очищение от некротических налетов, восстановление функций организма. Клинически инфекция характеризуется следующими симптомами: Постепенное повышение температуры до 40-42˚С и длительная волнообразная лихорадка. Сильнейшая интоксикация и диарея. Розеолёзная сыпь на коже живота, груди и спины в следствие местных воспалительных процессов в поверхностных слоях кожи. Сильная головная боль, помрачение сознания и бред. Исходами заболевания могут быть – выздоровление, хроническое носительство (5%) и смерть. Постинфекционный иммунитет Прочный, продолжительный, повторные заболевания бывают редко. Иммунитет обусловлен антителами к О- , Н- и Vi-антигенам, клетками иммунной памяти и активностью фагоцитов. Лабораторная диагностика Основные методы – бактериологический и серологический. Бактериологический метод Материал для исследования: Кровь (гемокультура) – 1 неделя. Испражнения (копрокультура) – с 2 и 3 недели. Моча (уринокультура) – с конца 2 недели. Желчь (биликультура) – с 2 недели. Пунктат костного мозга (миелокультура) – с 1,2 недели. Экссудат розеол (розеолокультура) – с 2,3 недели. Выделение гемокультуры: 1 этап: кровь засевают на среду Рапопорт в соотношении 1:10 (на 10 мл среды 1 мл крови) и инкубируют при 37˚С до 8 дней. 2 этап: учет результатов в ср. Рапопорт (помутнение, осадок, покраснение среды, образование газа - S. paratyphi A и S. paratyphi B , без образования газа - Salmonellla typhi ) и пересев на среду Эндо или висму-сульфит агар. Инкубируют при 37˚С , 24 часа. 3 этап: учет результатов на ДДС. На среде Эндо – бледнорозовые гладкие колонии, на висмут-сульфит агаре – черные колонии. Изучение морфологических и тинкториальных свойств колоний. Пробная реакция агглютинации на стекле с поливалентной сальмонеллезной сывороткой. Пересев подозрительных колоний на среду Ресселя (глюкоза и лактоза) или Клиглера для выделения чистой культуры. 4 этап: идентификация чистой культуры с изучением морфологических, тинкториальных и биохимических свойств (см. выше). Сероидентификация с диагностическими моносыворотками Salmonellla typhi, S. paratyphi A и S . paratyphi B. Проведение фаготипирования со специфическими сальмонеллезными бактериофагами. Антибиотикочувствительность выделенного возбудителя. Выделение копрокультуры, уринокультуры и биликультуры: Предварительно засевают материал на среды обогащения (селенитовый бульон в соотношении 1:5), затем со среды обогащения пересевают на ДДС - Эндо или висму-сульфит агар – с целью выделения изолированных колоний и получения чистой культуры на среде Ресселя. Схема изучения и идентификации аналогична как при выделении гемокультуры. Серологический метод Материал – сыворотка больного с конца 1 недели болезни. Используют реакцию Видаля с раздельными О- и Н- диагностикумами сальмонеллы тифа, паратифозными А и В диагностикумами. Реакция Видаля Реакция Видаля по механизму относится к развернутой реакции агглютинации в пробирках. Первоначально делают базовое разведение сыворотки больного с физиологическим расвором 1:50 (0,1 мл сыворотки и 4,9 мл физ.р-ра). Затем основные разведения – 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600 в объеме 1 мл физиологического раствора. Таким образом необходимо сделать 4 ряда разведений сыворотки больного для соответсвующего диагностикума. Инкубируем пробирки 2 часа при 37˚С и ещё 18 часов при комнатной температуре. Учет результатов производим по степени агглютинации, определяя титр сыворотки больного к опредиленному диагностикуму. Минимально диагностический титр 1:200. Раньше всего появляются антитела к О- антигену, но титр их снижается после выздоровления (инфекционный Видаль). Н- антитела появляются позднее и сохраняются после болезни и прививок годами (анамнестический и вакцинальный Видаль). Для определения антигенов в крови и испражнениях больных могут быть использованы РСК, РПГА, ИФА с антительными диагностикумами. Для ускоренной диагностики можно использовать ДНК-зондирование. Определение бактерионосительства Материал – желчь, моча, испражнения, сыворотка человека. Методы: Бактериологический для выявления копрокультуры, уринокультуры и биликультуры (см. выше). Серологический – РПГА с эритроцитарными О-, Н- и Vi – диагностикумами для обнаружения специфических антител. Аллергическая проба с Vi-тифином, который дает местную реакцию в виде покраснения и припухлости в течение 20-30 минут, что говорит о наличии Vi-антител брюшного тифа у человека. Лечение Антибиотикотерапия (левомицетин, ампициллин, тетрациклины). Сальмонеллезный бактериофаг. Симптоматическая и патогенетическая терапия. Профилактика Вакцинация в очагах инфекции (химическая сорбированная брюшнотифозная моновакцина, TABte – тифо-паратифозно-столбнячная вакцина). Противоэпидемиологические и санитарно-гигиенические мероприятия: выявление, изоляция и лечение больных и бактерионосителей; введение карантина по эпидемиологическим показаниям, проведение мероприятий по бактериологическому контролю и дезинфекции окружающей среды, воды, пищи и различных объектов в очаге инфекции; наблюдение за контактными лицами. Сальмонеллезы Основные возбудители – S. enteritica, S. choleraesuis, S. anatum, S . typhimurium и другие, около 100 видов сальмонелл. Основные признаки Грамотрицательные палочки длиной 1,5-4.0 мкм Подвижные (перитрихии), спор и капсул не образуют Лактозоотрицательные Ферментируют глюкозу до кислоты и газа Имеют лизин- и орнитиндекарбоксилазы Образуют сероводород, не образуют индол Проба с метиленовым красным положительна Не образуют ацетоин Не имеют уреазу Культуральные свойства такие же, как у возбудителей тифа и паратифов Сальмонеллы имеют О- и Н- антигены. Также есть поверхностный антиген вирулентности – Vi-антиген. О-, Н- и Vi-антигены имеют выраженные иммуногенные свойства. Сальмонеллы также могут иметь К-антиген. Для серологической классификации сальмонелл принята классификация по Кауффману-Уайту, для идентификации сальмонелл применяют диагностические адсорбированные моно – поливалентные О- и Н- сыворотки. Резистентность Выдерживают нагревание до 70˚С в течение 30 минут. Устойчивость к высокой температуре повышается, когда сальмонеллы находятся в продуктах, особенно в мясе. Соление и копчение мяса оказывают слабое действие на сальмонеллы. Дезинфектанты убивают сальмонелл за 10-15 минут. Факторы патогенности Имеют факторы адгезии и колонизации (Vi-антиген), инвазии (Vi-антиген, гиалуронидаза). Выделяют при разрушении эндотоксин. Синтезируют два типа экзотоксина: термолабильный и термостабильный энтеротоксины, шигаподобные цитотоксины (нарушают водносолевой баланс и угнетают синтез белка в энтероцитах). Эпидемиология Источники – крупный рогатый скот, свиньи, птицы, куры, рыба и др. животные. Вторичными источниками являются больные люди и бактерионосители. Механизм передачи – фекально-оральный (вода, пища, молоко и молочные продукты, яйца, мясо), возможен контактно-бытовой через предметы личного пользования. Патогенез и клиника Сальмонеллезы могут протекать в различных формах: пищевые токсикоинфекции, сальмонеллезная диарея и генерализованные тифоподобные формы. Массивное обсеменение пищевых продуктов обусловливает пищевую токсикоинфекцию, при которой основные симптомы связаны с поступлением возбудителя в кровь, его распадом и высвобождением эндотоскина. В основе сальмонеллезной диареи лежит колонизация энтероцитов, повреждение микроворсинок и воспаление слизистой оболочки тонкого кишечника, высвобождение энтеротоксина и цитотоксина, что ведет к диареи и гибели клеток. Генерализованные формы обусловлены инвазией сальмонелл через эпителий в подлежащие ткани слизистой оболочки тонкого кишечника, проникновением в макрофаги, поступлением в лимфу и кровь с развитием выраженной бактериемии. Постинфекционный иммунитет Напряженный, но типоспецифический. Лабораторная диагностика Материал для исследования – испражнения, рвотные массы, кровь, промывные воды желудка, моча, остатки пищи. Метод – бактериологический. Проводится аналогично как и при брюшном тифе. Для окончательной идентификации выделенных культур используют поливалентные адсорбированные О- и Н- сыворотки, а затем – моновалентные. Обязательно проводят фаготипирование с О1- сальмонеллезным бактериофагом. Для выявления антител в сыворотке больного и переболевшего используют РПГА с поливалентными эритроцитарными диагностикумами. Лечение и профилактика Антибиотикотерапия (левомицетин, ампициллин, тетрациклины). Сальмонеллезный бактериофаг. Симптоматическая и патогенетическая терапия (промывание желудка, восстановление водно-солевого баланса, общеукрепляющие средства и т.д.) Вакцинация отсутствует Противоэпидемиологические и санитарно-гигиенические мероприятия: ветеринарный контроль животных и птицы; бактериологический контроль пищевых продуктов и воды; выявление, изоляция и лечение больных и бактерионосителей; введение карантина по эпидемиологическим показаниям, проведение мероприятий по дезинфекции окружающей среды, воды, пищи и различных объектов в очаге инфекции; наблюдение за контактными лицами. |