Диагностика анемий, определение гемоглобина. анемии, гемоглобин. Гема токрита
 Скачать 3.48 Mb.
|
|
Анемия — это уменьшение общего объема циркулирующих эритроцитов ниже нормы. При анемии снижается способность крови переносить кислород, что ведет к гипоксии тканей. На практике определить количество эритроцитов не так просто, и анемию обычно диагностируют, основываясь на снижении уровня гема токрита (отношение плотно осажденных эритроцитов к общему объему крови) и концентрации гемоглобина ниже нормы. Эти показатели коррелируют с количеством эритроцитов, за исключением случаев изменения объема плазмы вследствие задержки жидкости или дегидратации. Существует множество различных классификаций анемий. -Этиологическая (По механизму возникновения анемий); -Клиническая классификация анемий в соответствии с нарушением морфологии самих эритроцитов, часто с указанием причины этого явления, с учетом размеров эритроцитов (нормоци- ты, микроциты или макроциты), степени их насыщения гемоглобином, о чем свидетельствует цвет клеток (нормохромные или гипохромные), и их формы. Микроцитарные гипохромные анемии возникают в результате нарушений синтеза гемоглобина, тогда как макроцитарные анемии большей частью обусловлены нарушениями созревания эритроидных клеток-пред- шественников в костном мозге. Нормоцитарные нор- мохромиые анемии имеют различное происхождение; в некоторых случаях причину можно определить, исследуя изменения формы эритроцитов (лучше всего путем визуального изучения мазков крови). При исследовании мазков также можно определить другие качественные показатели, однако для этого необходимо применение специальных методов в лабораториях. К наиболее важным характеристикам эритроцитов относятся: средний объем клетки, выражаемый в фемтолитрах (фл); среднее содержание гемоглобина в клетке, выражаемое в пикограммах (пг); средняя концентрация гемоглобина в клетке в данном объеме плотно осажденных эритроцитов, выражаемая в граммах на децилитр (г/дл); ширина распределения эритроцитов (коэффициент вариации объема эритроцитов).  Клиническая классификацияанемий: по величине среднего диаметра эритроцитов: Нормоцитарные (средний диаметр эритроцитов 7,2-7,5 мкм); Микроцитарные (средний диаметр эритроцитов <6,5 мкм); Макроцитарные (средний диаметр эритроцитов >8,0 мкм); Мегалоцитарные (средний диаметр эритроцитов ≥12 мкм) По величине среднего содержания гемоглобина в эритроците (MCH, mean corpuscular hemoglobin, выражается в пг – пикограммах) Нормохромные (МСН 27-32 пг) Гипохромные (МСН <27 пг) Гиперхромные (МСН > 32 пг) По величине среднего объёма эритроцитов (MCV, mean corpuscular volume, выражается в фемтолитрах, или мкм3): Нормоцитарные (MCV 80-100 фл); Микроцитарные (MCV<80 фл) Макроцитарные (MCV > 100 фл) По уровню ретикулоцитов в периферической крови Регенераторные (количество ретикулоцитов 0,5-5%) Гиперрегенераторные (количество ретикулоцитов >5%) Гипо- или арегенераторные (количество ретикулоцитов снижено или они отсутствуют, несмотря на тяжелое течение анемии). Уровень ретикулоцитов является показателем регенераторной функции костного мозга в отношении эритропоэза. К нормохромным анемиям относятся анемии: острые постгеморрагические (в первые дни после кровопотери), гипо- и апластические, енсфероцитарные гемолитические, аутоиммунные гемолитические, метапластические (при лейкозах, миеломной болезни и др), при эндокринных нарушениях (ипофункция надпочечников), болезнях почек, хронических инфекциях. К гипохромным анемиям относятся: железодефицитные, сидеробластные, некоторые миелотоксические, гемолитические (талассемия). Гиперхромными бывают В12-(фолиево)-дефицитные, некоторые гемолитические анемии (наследственный микросфероцитоз, если среди эритроцитов в мазке преобладают микросфероциты). Иногда В12-дефицитная анемия бывает нормохромной. К нормоцитарным относятся острые постгеморрагические, апластические, аутоиммунные гемолитические анемии. К микроцитарным относятся железодефицитные, сидеробластные анемии, к макроцитарным – В12-(фолиево)-дефицитные анемии. К регенераторным относят постгеморрагические анемии; к гиперрегенераторным – гемолитические анемии, особенно состояние после гемолитического криза; к гипо- и арегенераторным – гипопластические, апластические анемии.  Патологические формы эритроцитов: Пойкилоцитоз – появление в периферической крови эритроцитов измененной формы. Сфероциты – шаровидной формы, большая толщина, отсутствует центральное просветление. Бывают сфероциты нормальных размеров и микросфероциты. Сфероцитоз бывает приобретенный и наследственный, патогенез – аномалия мембран эритроцитов. Заболевания и состояния: гемолитическая анемия Миньяковского-Шоффара (наследственный микросфероцитоз); аутоиммунные гемолитические анемии; гемолитические анемии, вызванные ожогами; несовместимость перелитой крови по системе АВ0; ДВС-синдром; септицемия; искусственные сосуды/клапаны сердца. Овалоциты (эллиптоиды). При гемолитических анемиях – наследственном овалоцитозе, талассемии; при тяжелых железодефицитах; мегалобластных анемиях; анемиях при лейкозах; миелодиспластических синдромах. Мишеневидные эритроциты (лептоциты или таргетные клетки) – плоские, бледные эритроциты с центральным скоплением гемоглобина в виде мишени. При талассемии; тяжелой ЖДА; серповидно-клеточной анемии; после спленэктомии, при заболеваниях печени с желтухой; механической желтухе; алкоголизме; отравлении свинцом. Стоматоциты – эритроциты, центральное просветление в которых имеет форму узкой линейной полоски или своей изогнутостью напоминает форму рта. Встречаются при наследственном стоматоцитозе (форма гемолитической анемии), иммунных формах гемолитических анемий; после гемотрансфузий; при циррозе и опухолях печени; механической желтухе; остром алкогольном отравлении; микроангиопатии. Акантоциты – эритроциты зубчатой формы. Может быть следствием неправильной фиксации мазка. При наследственном акантоцитозе (форма гемолитической анемии); тяжелых заболеваниях печени (циррозах, токсических гепатитах, при метастазах в печень); при нарушениях обмена липидов, после спленэктомии, после спленэктомии, при гепаринотерапии, алкоголизме, дефиците пируваткиназы в эритроцитах. Эхиноциты -эритроциты с несколькими или множественными выростами, как бы покрытые шипами, колючками. При уремии, тромбоцитопенической пурпуре, раке желудка, остром кровотечении. Каплевидные эритроциты – при токсических гепатитах, миелофиброзе. МДС (миелодиспластическом синдроме). Серповидные эритроциты (дрепаноциты) – при серповидно-клеточной анемии (форма гемолитической анемии). Шизоциты – обломки, фрагменты разрушенных эритроцитов. При тяжелых анемиях, ДВС-синдроме; васкулитах; гломерулонефритах; уремии; искусственных сосудах и клапанах сердца. Определение гемоглобина крови Гемоглобинцианидный метод с применением ацетоцианангидрида. Принцип: гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетоцианангидридом окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид), интенсивность его окраски пропорциональна содержанию гемоглобина. Реактивы: Трансформирующий раствор: ацетоцианангидрин – 0,5 мл, калий железосинеродистый (красная кровяная соль) – 200 мг; натридвууглекислый (бикарбонат натрия) – 1 г; дистиллированная вода – до 1 л. Стабилен при хранении в посуде из темного стекла при комнатной температуре в течение нескольких месяцев.Припоявлении осадка или обесцвечивания раствор непригоден для употребления. Калибровочный раствор цианметгемоглобина (гемиглобинцианида) в качестве калибровочного раствора могут применяться стандартные растворы гемиглобинцианида или сухие навески гемоглобина. В последнем случае калибровочный раствор готовят по инструкции. В настоящее время клинико-диагностические лаборатории для определения концентрации гемоглобина пользуются готовыми наборами реагентов. Выпускаемыми рядом фирм. Наборы имеют соответствующие инструкции для работы. Специальное оборудование: 1) фотометр (обычный или автоматизированный) спектрофотометр или гемоглобинометр 2)Пипетка на 0,02 мл 3) колба мерная на 1,0 л. Ход определения: Опытная пробы 0,02 мл крови (капилляр Сали) приливают к 5,0 мл трансформирующего раствора (разведение в 251 раз), тщательно перемешивают, оставляют при комнатной температуре стоять 10 минут, после чего измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы. Холостая проба – трансформирующий раствор или вода. Стандартный раствор измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу. Расчет содержания гемоглобина производят по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору цианметгемоглбина (гемиглобинцианида) или по формуле:  Где Аоп – абсорбция опытной пробы; Аст – абсорбция стандартного раствора; С – коцентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе; К – коэффициент разведения крови; 0,01 – коэффициент пересчета из милиграмм-процентов в граммы на литр. Построение калибровочного графика: из стандартного раствора готовят разведение согласно приведенной схеме:
Измеряют против холостой пробы. Измерение можно проводить на спектрофотометре при длине волны 540 нм, либо на гемоглобинометре. Референсные значения гемоглобина: у женщин 120-140 г/л; у мужчин 130-160 г/л. Приготовление мазка крови.      |