Иммуногистохимия 16тема. Игхисследования проводят после выполнения гистологического исследования
 Скачать 55.5 Kb.
|
|
Иммуногистохимия (ИГХ) – метод выявления точной локализации того или иного клеточного или тканевого компонента (антигена) благодаря связыванию его с мечеными антителами. Для проведения иммуногистохимического исследования используются фрагменты ткани опухоли, удаленной хирургическим путем или полученные в результате биопсии. ИГХ-исследование позволяет определить тип низкодифференцированной опухоли, гистогенетическую принадлежность, наличие в ткани опухоли специфических рецепторов гормонов, других сигнальных молекул. Иммуногистохимия востребована при дифференциальной диагностике опухолей, определении источника метастаза при неясном первичном очаге, оценке гормонального статуса опухоли, иммунофенотипировании опухолей, определении факторов прогноза опухолевого процесса и для адекватного выбора схемы химиотерапевтического лечения. Онкобелок HER2/neu (Human Epidermal growth factor Receptor 2) –трансмембранный гликопротеин, который является представителем семейства рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR). У человека рецептор HER2/neu выявляется в нормальных тканях, однако его гиперэкспрессия характерна только для опухолевых клеток. Ведущим механизмом увеличения количества HER2/neu является амплификация кодирующего его гена HER2/neu. Определение рецепторов эстрогена (ER) и прогестерона (PR) в опухолевой ткани при раке молочной железы используют для оценки чувствительности опухоли к гормональным препаратам и подбора схемы терапии. Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса рака молочной железы (PR, ER, ki-67, Her-2 neu) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для определения рецепторного статуса рака молочной железы. ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования. Иммуногистохимическое исследование Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс антиген-антитело. Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркёром. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов. Иммунногистохимическое исследование определяет характер иммунологических нарушений. Анализ выявляет пациенток с аутоиммунным воспалением и аутоиммунным ответом в эндометрии, что определяет тактику их ведения. Рак молочной железы (РМЖ) — злокачественная опухоль железистой ткани молочной железы. РМЖ занимает первое место среди всех злокачественных заболеваний у женщин. В зависимости от наличия биологических маркёров опухоли — экспрессии гормональных рецепторов (эстрогена и/или прогестерона), экспрессии HER-2 — выделяют гормон-рецептор-положительный, HER-2-положительный и тройной негативный РМЖ. HER-2/neu-положительные (HER-2+) типы рака молочной железы отличаются высокой экспрессией белка HER-2/neu; HER2/neu-негативные (HER-2) типы рака молочной железы отличаются низкой экспрессией или отсутствием белка HER-2/neu. Считается, что у одной из пяти женщин с раком груди опухоль является HER2-положительной. Большинство раковых опухолей молочной железы являются гормонально-зависимыми: эстрогены и прогестерон оказывают на них стимулирующий эффект (пролиферативный и неопластический). При HER-2-положительном раке молочной железы на поверхности опухолевых клеток присутствует избыток HER-2-рецепторов. Данное явление носит название «положительный HER-2-статус» и диагностируется у 15–20% женщин, страдающих РМЖ. HER-2 Рецептор эпидермального фактора роста человека 2-го типа, который присутствует в тканях и в норме участвует в регуляции деления и дифференцировки клеток. Его избыток на поверхности опухолевых клеток (гиперэкспрессия) предопределяет быстрый неконтролируемый рост новообразования, высокий риск метастазирования, низкую эффективность некоторых видов лечения. HER-2-положительный РМЖ является особенно агрессивной формой данного заболевания, поэтому точное определение HER-2-статуса имеет ключевое значение для выбора тактики лечения. Рецепторы к эстрогену (ER) и прогестерону (PR) Эстроген и прогестерон — основные женские половые гормоны. Они вырабатываются яичниками и являются основными регуляторами деятельности репродуктивной системы женщины. Рецепторы присутствуют в различных тканях, в том числе в молочных железах и матке. Рецепторы к эстрогену (ER) и прогестерону (PR) являются веществами белковой природы, которые локализованы на поверхности опухолевой клетки. Под влиянием женских половых гормонов, рецепторы формируют комплекс, который стимулирует появление новых опухолевых клеток. Разрушение этого механизма лежит в основе гормонотерапии. Иммуногистохимическое определение ER и PR способно повести дифференциальную диагностику характера опухоли, выявить чувствительность опухоли к гормонам. Анализ позволяет скорректировать и уточнить лечение, а также оценить эффективность. Опухоли с высоким содержанием рецепторов к эстрогенам и прогестерону являются высокодифференцированными. Они обладают низкой пролиферативной активностью и характеризуются не агрессивным течением. Опухоли с такими показателями хорошо отвечают на гормональную терапию и имеют хороший прогноз. Эффективность гормональной терапии составляет около 50% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к эстрогенам, и 75% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к обоим гормонам. Если опухолевые клетки имеют низкое число рецепторов к эстрогенам, гормональная терапия обычно неэффективна. Исключение составляют случаи, когда опухолевые клетки экспрессируют рецепторы только к прогестерону. При таком варианте гормональная терапия эффективна у 10% таких больных. Ki-67 Маркёр пролиферативной активности. Антиген экспрессируется только во время деления клетки, в периоде её покоя маркёр отсутствует. Показатель позволяет понять, находится ли заболевание в активной фазе или же фазе ремиссии. Показания к проведению ИГХ-исследования: рак молочной железы. Подготовка Подготовка определяется лечащим врачом. Диагностическое выскабливание слизистой оболочки матки рекомендовано проводить в среднюю и позднюю фазу пролиферации — на 7–10-й день менструального цикла. Материалом для исследования являются парафиновый блок и предметные стекла. В случае, если материалом является образец ткани в растворе формалина, дополнительно должна быть выполнена услуга изготовления стёкол. При проведении гистологического исследования в сторонней лаборатории необходимо предоставить протокол гистологического исследования. Для чего проводят иммуногистохимию при РМЖ? Иммуногистохимия нужна не для научной работы, а для практического использования: Обнаружение в клетках рецептора половых гормонов, чувствительного к эстрогену (ЭР) или прогестерону (ПР), прогнозирует чуть более плавное течение рака с меньшей вероятностью метастазирования, с преимущественной локализацией метастазов в костях, большую продолжительность жизни даже при генерализации процесса; Разная концентрация ЭР и ПР позволяет выбрать для конкретной женщины оптимальное лечение, так при высоком уровне ЭР в сочетании с ПР и даже без них можно рассчитывать на хороший результат гормональной терапии, без рецепторов обязательна химиотерапия; Наличие в клетке НЕR2 в высокой концентрации указывает на агрессивность рака, что требует химиотерапии и специфического нейтрализатора НЕR2; Сочетание позитивного гормонального статуса с НЕR2 вызывает сомнения в результативности гормонотерапии, поэтому в программу лечения включается химиотерапия; Высокая концентрация Ki-67 — свидетельство высокой степени злокачественности и, опять-таки, не позволяет избежать химиотерапии. Показания к иммуногистохимии при РМЖ При раке молочной железы для ИГХ только одно показания — определение степени агрессивности рака по его структурным компонентам для подбора оптимальной программы лечения. Обычный морфологический анализ — гистология показывает степень злокачественности опухоли и её клеточный состав, часто неоднородный, но не позволяет определить белковые структуры: Чувствительность каждой клетки к лекарствам определяется наличием у нее рецепторов половых гормонов; Активность клеточного размножение и скорость роста ракового узла контролирует белок НЕR2, если его слишком много, то рак будет расти быстрее и формировать защиту клетки от лекарств вплоть до полной устойчивости; Способность быстро воспроизводить замену погибшим клеткам, захватывая при этом новые территории, определяет маркер пролиферации Ki-67. Концентрацию всех этих клеточный субстанций и определяет ИГХ. Зерттеудің нәтижесі Формальды түрде ЭР 1% оң деп саналады,бірақ ЭР 10% дейін күмәнді, эндокриндік терапияның маңызды нәтижесіне үміт болып табылады. D. C. Allred бойынша жартылай сандық тәсілмен жүзеге асырылды. Сүт безі обырының рецепторлық статусын иммуногистохимиялық талдау келесі жауаптарды болжайды : 0 - ден 2 ұпайға дейін —гормондық тәуелділік жоқ; 3-8 баллмен —эндокриндік әсерге тәуелділік болуы мүмкін, балл көп болған сайын, рецепторлардың деңгейі соғұрлым жоғары, ал 3 баллмен обыр жасушаларының оныншы бөлігі ғана рецептор болады. НЕR2 анықтау кезінде жауаптардың градациялары: 0 және 1+ — сүт безінің сау жасушаларына ұқсас ақуыздың қалыпты мөлшері және ешқандай шараларды талап етпейді; 2+ — күмәнді талдау, нормадан сәл артық және нақты тәсілмен қайта тексеру қажет, ол ретінде FISH-ға жүгіну қажет, екі Жауап нұсқасын береді - " бар "немесе" жоқ»; 3+ — айқын арттыру, артық белсенділікті басу үшін таргеттік терапия қажет.0 және +1 нәтижесі HER2 теріс болып саналады; Ki-67 ақуызы: 15%- дан кем — пролиферацияның жоғары емес белсенділігі; 16% - 30 —орташа агрессивтілік; 30% жоғары — жоғары агрессия. Ki-67 Пролиферативті белсенділіктің маркері. Антиген жасушаның бөлінуі кезінде ғана экспрессияланады, оның тыныштық кезеңінде кезінде маркер жоқ болады,басқаша айтқанда көрінбейді. Көрсеткіш аурудың белсенді фазада немесе ремиссия фазасында екенін түсінуге мүмкіндік береді. |