Иммунологические реакции. Иммунологические реакции. Серологические реакции
 Скачать 259.32 Kb.
|
СРОП №7 По дисциплине «Микробиология» На тему: «Иммунологические реакции. Серологические реакции» Содержание Введение Реакция агглютинации Реакция преципитации и ее варианты Реакция нейтрализации Введение Реакция антиген-антитело является основой многих высоко чувствительных иммунологических исследований. Это обусловлено строгой специфичностью выработавшихся антител, на определенный антиген. Т.е. антитела к определенному антигену будут связываться только с этим антигеном (антигенной детерминантой, эпитопом) и ни с каким другим. Взаимодействие антиген-антитело основано на принципе взаимного узнавания, обусловленного их конформационной комплементарностью. При иммунизации животных образуются антитела, которые содержатся в сыворотке крови. Они могут быть обнаружены путем проведения реакции in vitro со специфическим антигеном. Такие реакции называют серологическими – от лат. serum – сыворотка. Поэтому все методы исследования, основанные на использовании иммунных сывороток, называют серологическими. Они находят широкое применение для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, беременности, гормональных нарушений, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней и т.д. Реакция агглютинации Агглютинация(от лат.agglutinatio— склеивание) — склеивание (соединение) антигеннесущих корпускулярных частиц (цельные клетки, частицы латекса и др.) молекулами стецифических антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината), состоящего из корпускул (например, бактерий), "склеенных" антителами. Агглютинаты обычно видны невооруженным глазом. Важно помнить, что в этих реакциях принимают участие антигены в виде частиц (корпускул - микробные клетки, эритроциты и др.), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок. Для появления реакции необходимо присутствие электролитов (например, изотонического раствора хлорида натрия), снижающих электрический заряд комплексов АГ+АТ и ускоряющих процесс агглютинации. В зависимости от вида используемого иммунодиагностикума различают реакцию микробной агглютинации, гемагглютинации (агглютинация эритроцитов), латекс-агглютинации и т. д. Реакция агглютинации используется с диагностической целью в двух направлениях: 1) для определения неизвестного микроба (антигена), выделенного от больного. Реакция в этом случае ставится с известной диагностической агглютинирующей сывороткой, полученной путем иммунизации кроликов известным видом микробов (серологическая идентификация микроба); 2) для выявления агглютининов в сыворотке больного к известному виду микробов. Реакция ставится со стандартным микробным диагностикумом (в качестве антигена) ― и сывороткой больного (серодиагностика заболевания). Различают прямую и непрямую реакции агглютинации Реакция прямой агглютинации - в этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглютинируют корпускулярные антигены (агглютиногены). Реакция прямой агглютинации клеток. Чаще всего реакция агглютинации в клинике ставится для определения группы крови, которая основана на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов. Для определения групп крови используют стандартные изогемагглютинирующие сыворотки крови доноров, содержащие известные анти-А или анти-В антитела. Реакцию ставят на стекле или пластинах. При наличии на эритроцитах А антигена (2-я группа крови), В антигена (3-я группа крови) или обоих антигенов (4-я группа крови) соответствующие сыворотки агглютинируют эритроциты. В последнее время широко используют Цоликлоны - солевые растворы моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека. Применяется также проба на совместимость крови, когда капли крови донора и реципиента смешивают и оценивают агглютинацию. В клиниках применяют реакцию агглютинации лейкоцитов, тромбоцитов и других клеток для выявления аутоантител, а также для определения антигенов на этих клетках. Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации В ней используют эритроциты (эритроциты барана) или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса, целлюлозы, полистирола, оксида бария и др.), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют эритроцитарным антигенным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами, называют эритроцитарным иммуноглобулиновым диагностикумом и применяют для выявления антигенов.  В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный антигенный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика, установление серологического диагноза). Если нагрузить эритроциты антителами, то их можно применять для выявления антигенов. Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или лунок в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговки». Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики бактериальных заболеваний (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), заболеваний, вызванных простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину. Антиглобулиновая проба Кумбса (реакция р. Кумбса) Используются для выявления "неполных" (неагглютинирующих) антиэритроцитарных антител, которые образуются при различных заболеваниях: резус-конфликте, аутоиммунных заболеваниях, некоторых инфекциях. В реакции участвуют: сыворотка больного, в которой определяют неполные антитела, корпускулярный антиген-диагностикум, антиглобулиновая сыворотка, содержащая антитела к человеческому глобулину. В зависимости от этого проводится прямая или непрямая реакция Кумбса. Прямая реакция: к отмытым эритроцитам крови больного добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку. Если на эритроцитах есть неполные антитела (иммуноглобулины), что наблюдается при гемолитической анемии, резус-конфликте (эритроциты плода), то они агглютинируются. Например, используют этот тест, когда у новорожденного подозревают гемолитическую болезнь, вызванную материнскими анти-Rh-антителами класса IgG, связанными с эритроцитами младенца. Непрямая реакция выявляет свободные антиэритроцитарные антитела в сыворотке крови больного. К отмытым эритроцитам донора 0(I) группы крови добавляют исследуемую сыворотку. Смесь инкубируют при 37°С в течение 30 минут и отмывают эритроциты. Затем к ним добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку против IgG. Если в сыворотке больного были неполные антиэритроцитарные антитела, то наступит агглютинация. Непрямой тест Кумбса чаще используют для обнаружения антител класса IgG к резус-фактору в крови резус- отрицательных женщин. Иммунный механизм: Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc- фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов. Таким образом, прямой тест Кумбса выявляет связанные антитела, а непрямой тест – сывороточные. Реакция преципитации и ее варианты Реакции агглютинации и преципитации очень близки по своей сути. Различия между ними зависят главным образом от величины частиц антигена. Реакция преципитации (от лат. praecipito - осаждать) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. В основе реакций преципитации лежит образование и выпадение в осадок комплексов антиген-антитело. В реакции, в отличие от реакций агглютинации, участвуют растворимые антигены - преципитиногены (продукты микроорганизмов, тканей, химические вещества и лекарства). Антитела (преципитины), соединяясь с растворимыми антигенами, вызывают их агрегацию, что проявляется в помутнении прозрачных жидкостей или выпадении осадка (преципитата). Реакцию преципитации можно проводить в жидкой и плотной среде (в полужидком геле). Картину преципитата можно оценить макроскопически, однако более точен учет реакции с помощью нефелометрии (по степени помутнения раствора), что позволяет автоматизировать процесс. Реакция нейтрализации Реакции нейтрализации основаны на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки или ткани. При отсутствии повреждающего эффекта смеси антител и микробов или их токсинов на культуру клеток говорят о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело. Реакция нейтрализации экзотоксина происходит при его взаимодействии с антитоксической сывороткой (антитела-антитоксины). В результате образовании комплекса антиген-антитело токсин теряет свои ядовитые свойства. Реакцию нейтрализации проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели если количества антител в сыворотке достаточно для нейтрализации токсина. Реакция нейтрализации in vivo. Для определения типа токсина его смешивают с диагностической антитоксической сывороткой и эту смесь вводят белым мышам. При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши не погибают. Реакцию нейтрализации используют для определения антитоксического иммунитета у детей при дифтерии (проба Шика) и скарлатине (проба Дика). Для этого в область предплечья внутрикожно вводят определенное количество соответствующего токсина (1/40 DLM). При наличии в организме антитоксинов произойдет нейтрализация токсина и реакция будет отрицательной. При отсутствии антитоксинов в организме возникает воспалительная реакция на месте введения токсина. Варианты постановки реакции нейтрализации токсина: реакция флоккуляции основана на способности токсина или анатоксина при смешивании в эквивалентных соотношениях с антитоксической сывороткой образовывать помутнение в пробирке. Механизм флоккуляции аналогичен механизму реакции преципитации и обычно используют для количественного определения токсинов или анатоксинов. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции. Список источников: Учебное пособие «Реакции основанные на взаимодействии антигена с антителом» file:///Users/apple/Downloads/%D0%A0%D0%B5%D0%B0%D0%BA%D1%86%D0%B8%D0%B8 %D0%BE%D1%81%D0%BD%D0%BE%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D0%BD%D1%8B%D0%B5 %D0%BD%D0%B0 %D0%B2%D0%B7%D0%B0%D0%B8%D0%BC%D0%BE%D0%B4%D0%B5%D0%B9%D1%81%D1%82%D0%B2%D0%B8%D0%B8 %D0%90%D0%93-%D «Медицинская иммунология» Д.К. Новиков https://core.ac.uk/download/pdf/80151713.pdf |
