Цитохимический анализ крови. Исследование крови применяются для определения наличия или отсутствия определенных веществ в клетках
 Скачать 420.64 Kb.
|
 Цитохимический анализ крови.Цитохимическое исследование крови применяются для определения наличия или отсутствия определенных веществ в клетках.Наиболее часто для анализа используют лейкоциты с целью определения вида лейкоза. Каждый вид рака крови имеет определенный, характерный только для него продукт обмена, который и находят при цитохимическом анализе крови.   |
Реактивы:
4% формалиново-спиртовой раствор.
Пероксидазный реактив: бензидин (на кончике ножа) растворяют в 6 мл 96% спирта, прибавляют 4 мл воды и 0,02 мл 3% перекиси водорода.
Краситель Романовского-Гимзы.
Реакция на гликоген. Метод Шабадаша.
Под влиянием перйодата калия гликоген окисляется, образуя альдегидные соединения, реагирующие с реактивом Шиффа (фуксин-сернистая кислота).
Реактивы:
0,03 М раствор перйодата калия: 230 мг перйодата растворяют в 100 мл дистиллированной воды;
Реактив Шиффа: 1 г фуксина растворяют в 200 мл кипящей воде. По мере охлаждения в раствор добавляют 1 г метабисульфита калия и 20 мл соляной кислоты. Оставляют на сутки. Затем добавляют 2гр активированного угля, оставляют на сутки, затем фильтруют;
Сернистая вода: к 10 мл 10 % р-ра метабисульфита калия добавляют 200 мл дистиллированной воды и 10 мл соляной кислоты;
Реактив Шабадаша: 100 мл этилового спирта+1,8 г нитрата меди+0,9 г нитрата кальция+10 мл формалина;
1 раствор соляной кислоты;
0,1 % спиртовой раствор светло-зеленой краски (лихтгрюн).
Ход окраски:
Ход окраски:
Препараты фиксируют в жидкости Шабадаша 30 мин.
Промывают в двух сменах дистиллированной воды.
Погружают в раствор перйодата на 20 мин (в темноте).
Промывают в трех сменах воды.
Ополаскивают в сернистой воде(1-2мин).
Окрашивают реактивом Шиффа 40 мин (в темноте).
Промывают в трех сменах сернистой воды по 3 мин.
Промывают в трех сменах дистиллированной воды по 3 мин.
Окрашивают светло-зеленой краской10-20с.
Промывают в дистиллированной воде.
Гликоген окрашивается в вишнево-фиолетовый цвет. В нейтрофилах в виде зернистости выступает гликоген.
Реакция на липиды.Метод Гольдмана.
Принцип: Растворение жиров и окраска суданом III в оранжевый цвет. Реактивы:
Формалиновый спирт.(1ч.формалина и 4ч.96% спирта);
70% этиловый спирт (к 100мл 96 % спирта прибавить 39мл дистиллированной воды);
Альфа-нафтол;
Раствор судана (к 100 мл 70 % спирта добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1,2 г альфа-нафтола и в избытке судан III. Раствор кипятят в течение 10 мин и фильтруют);
Краситель Романовского-Гимзы.
Реакция на щелочную фосфатазу. Метод Леонарда.
Техника реакции на щелочную фосфатазу
Закрепление мазков в смеси спирт-формалин — 30 сек.
Промывание проточной водой.
Инкубация в растворе питательной среды, состоящей из b-глицерофосфата при 37° — 3 часа.
Обработка предметного стекла раствором нитрата кобальта — 5 мин.
Тщательное промывание дистилированной водой.
Погружение предметного стекла в раствор сульфида аммония — на 10 сек.
Тщательное промывание проточной водой.
Контрастная окраска раствором Гимза — 25 мин.
Промывание проточной водой.
Реакция на неспецифическую эстеразу. Метод Малонея.
Реагенты:
Закрепитель-спирт(9ч)+формалин(1ч).
Нафтол AS-D-хлорацетат.
Ацетон.
Буфер веронал, показатель водорода 7,4 : 41,9мл соляной кислоты и 58мл натриевого веронала.
Fast garnet GBC.
Гемалаун Майера: растворить 50г калиевых квасцов в 1000 мл теплой дистилированной воды, добавить 1 г гематоксилина.
После растворения добавить 0,2 г йодноватокислого натрия, вызывающего окисление гематоксилина. Перед потреблением отфильтровать.
Результаты реакций.
Реактивы:
0,03 М раствор перйодата калия: 230 мг перйодата растворяют в 100 мл дистиллированной воды;
Реактив Шиффа: 1 г фуксина растворяют в 200 мл кипящей воде. По мере охлаждения в раствор добавляют 1 г метабисульфита калия и 20 мл соляной кислоты. Оставляют на сутки. Затем добавляют 2гр активированного угля, оставляют на сутки, затем фильтруют;
Сернистая вода: к 10 мл 10 % р-ра метабисульфита калия добавляют 200 мл дистиллированной воды и 10 мл соляной кислоты;
Реактив Шабадаша: 100 мл этилового спирта+1,8 г нитрата меди+0,9 г нитрата кальция+10 мл формалина;
1 раствор соляной кислоты;
0,1 % спиртовой раствор светло-зеленой краски (лихтгрюн).
Ход окраски:
Ход окраски:
Препараты фиксируют в жидкости Шабадаша 30 мин.
Промывают в двух сменах дистиллированной воды.
Погружают в раствор перйодата на 20 мин (в темноте).
Промывают в трех сменах воды.
Ополаскивают в сернистой воде(1-2мин).
Окрашивают реактивом Шиффа 40 мин (в темноте).
Промывают в трех сменах сернистой воды по 3 мин.
Промывают в трех сменах дистиллированной воды по 3 мин.
Окрашивают светло-зеленой краской10-20с.
Промывают в дистиллированной воде.
Гликоген окрашивается в вишнево-фиолетовый цвет. В нейтрофилах в виде зернистости выступает гликоген.
Реакция на липиды.Метод Гольдмана.
Принцип: Растворение жиров и окраска суданом III в оранжевый цвет. Реактивы:
Формалиновый спирт.(1ч.формалина и 4ч.96% спирта);
70% этиловый спирт (к 100мл 96 % спирта прибавить 39мл дистиллированной воды);
Альфа-нафтол;
Раствор судана (к 100 мл 70 % спирта добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1,2 г альфа-нафтола и в избытке судан III. Раствор кипятят в течение 10 мин и фильтруют);
Краситель Романовского-Гимзы.
Реакция на щелочную фосфатазу. Метод Леонарда.
Техника реакции на щелочную фосфатазу
Закрепление мазков в смеси спирт-формалин — 30 сек.
Промывание проточной водой.
Инкубация в растворе питательной среды, состоящей из b-глицерофосфата при 37° — 3 часа.
Обработка предметного стекла раствором нитрата кобальта — 5 мин.
Тщательное промывание дистилированной водой.
Погружение предметного стекла в раствор сульфида аммония — на 10 сек.
Тщательное промывание проточной водой.
Контрастная окраска раствором Гимза — 25 мин.
Промывание проточной водой.
Реакция на неспецифическую эстеразу. Метод Малонея.
Реагенты:
Закрепитель-спирт(9ч)+формалин(1ч).
Нафтол AS-D-хлорацетат.
Ацетон.
Буфер веронал, показатель водорода 7,4 : 41,9мл соляной кислоты и 58мл натриевого веронала.
Fast garnet GBC.
Гемалаун Майера: растворить 50г калиевых квасцов в 1000 мл теплой дистилированной воды, добавить 1 г гематоксилина.
После растворения добавить 0,2 г йодноватокислого натрия, вызывающего окисление гематоксилина. Перед потреблением отфильтровать.
Результаты реакций.
Реактивы:
Формалиновый спирт.(1ч.формалина и 4ч.96% спирта);
70% этиловый спирт (к 100мл 96 % спирта прибавить 39мл дистиллированной воды);
Альфа-нафтол;
Раствор судана (к 100 мл 70 % спирта добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1,2 г альфа-нафтола и в избытке судан III. Раствор кипятят в течение 10 мин и фильтруют);
Краситель Романовского-Гимзы.
Реакция на щелочную фосфатазу. Метод Леонарда.
Техника реакции на щелочную фосфатазу
Закрепление мазков в смеси спирт-формалин — 30 сек.
Промывание проточной водой.
Инкубация в растворе питательной среды, состоящей из b-глицерофосфата при 37° — 3 часа.
Обработка предметного стекла раствором нитрата кобальта — 5 мин.
Тщательное промывание дистилированной водой.
Погружение предметного стекла в раствор сульфида аммония — на 10 сек.
Тщательное промывание проточной водой.
Контрастная окраска раствором Гимза — 25 мин.
Промывание проточной водой.
Реакция на неспецифическую эстеразу. Метод Малонея.
Реагенты:
Закрепитель-спирт(9ч)+формалин(1ч).
Нафтол AS-D-хлорацетат.
Ацетон.
Буфер веронал, показатель водорода 7,4 : 41,9мл соляной кислоты и 58мл натриевого веронала.
Fast garnet GBC.
Гемалаун Майера: растворить 50г калиевых квасцов в 1000 мл теплой дистилированной воды, добавить 1 г гематоксилина.
После растворения добавить 0,2 г йодноватокислого натрия, вызывающего окисление гематоксилина. Перед потреблением отфильтровать.
Результаты реакций.
Реакция на щелочную фосфатазу. Метод Леонарда.
Техника реакции на щелочную фосфатазу
Закрепление мазков в смеси спирт-формалин — 30 сек.
Промывание проточной водой.
Инкубация в растворе питательной среды, состоящей из b-глицерофосфата при 37° — 3 часа.
Обработка предметного стекла раствором нитрата кобальта — 5 мин.
Тщательное промывание дистилированной водой.
Погружение предметного стекла в раствор сульфида аммония — на 10 сек.
Тщательное промывание проточной водой.
Контрастная окраска раствором Гимза — 25 мин.
Промывание проточной водой.
Реакция на неспецифическую эстеразу. Метод Малонея.
Реагенты:
Закрепитель-спирт(9ч)+формалин(1ч).
Нафтол AS-D-хлорацетат.
Ацетон.
Буфер веронал, показатель водорода 7,4 : 41,9мл соляной кислоты и 58мл натриевого веронала.
Fast garnet GBC.
Гемалаун Майера: растворить 50г калиевых квасцов в 1000 мл теплой дистилированной воды, добавить 1 г гематоксилина.
После растворения добавить 0,2 г йодноватокислого натрия, вызывающего окисление гематоксилина. Перед потреблением отфильтровать.
Результаты реакций.
Закрепитель-спирт(9ч)+формалин(1ч).
Нафтол AS-D-хлорацетат.
Ацетон.
Буфер веронал, показатель водорода 7,4 : 41,9мл соляной кислоты и 58мл натриевого веронала.
Fast garnet GBC.
Гемалаун Майера: растворить 50г калиевых квасцов в 1000 мл теплой дистилированной воды, добавить 1 г гематоксилина.
После растворения добавить 0,2 г йодноватокислого натрия, вызывающего окисление гематоксилина. Перед потреблением отфильтровать.
Результаты реакций.