Микро. К апсула, ее биологическая роль. Методы выявления
 Скачать 143.51 Kb.
|
|
Билет №1 Капсула, ее биологическая роль. Методы выявления. Капсула – слизистая структура, толщиной более 0,2 мкм, прочно связанная с клеточной стенкой, имеющая четко очерченные внешние границы. Выделяют микрокапсулы, выявляемые только при электронной микроскопии в виде слоя мукополисахаридных микрофибрилл и макрокапсулы (стрептококки, клепсиеллы), выявляемые при световой микроскопии. Обычно капсула состоит из малоупорядоченных или неупорядоченных нитей фибрилл состоящих из полисахаридов, иногда из полипептидов (сибиреязвенная бацилла). Функции капсулы: Защита от воздействия бактерицидных факторов. Обеспечение адгезии на различных субстратах. Может содержать запас питательных веществ. Макрокапсулы можно обнаружить по методу Бурри – Гинса. Окраска по Гинесу-Бурри. 1.Смешать каплю взвеси микробных бактерий с каплей туши и сделать мазок, высушить и фиксировать. 2. Нанести водный раствор фуксина на 1-2мин. 3. Промыть водой, высушить, микроскопировать. Бактерии окрашиваются в красный цвет, капсулы не окрашиваются анилиновыми красителями, остаются прозрачными и контрастно выделяются на черно-розовом фоне. Морфология кокков и заболевания, вызываемые ими. Кокки- неподвижные бактерии шаровидной формы, не имеют жгутиков. Микрококки – отдельно расположенные клетки(располагаются поодиночке). Входят в состав нормальной микрофлоры человека. Не вызывают заболеваний. Диплококки - попарно расположенные клетки(клетки делятся в одной плоскости, но после деления не расходятся, образуя пары) Среди них выделяют грамотрицательные(менингококк и гонококк) и грам+(пневмококк). Пневмококки имеют ланцетовидную форму, гонококки – бобовидную форму, менингококки располагаются в виде пары кофейных зерен. Пневмококки вызывают пневмококковую инфекцию (пневмония, фарингит, отит, синусит и т.д.), Менингококки – менингококковую инфекцию(назофарингит, менингококковый сепсис, менингит и др.). Гонококки вызывают гонококковую инфекцию (например, гонорея). Стрептококки –деление происходит в одной плоскости после чего клетки не расходятся что придает им в мазках форму бус или четок, располагающихся цепочками. Вызывают стрептококковую инфекцию ( гнойно-воспалительные заболевания, ангина, скарлатина). Тетракокки - располагаются по 4 в форме квадратов, делятся в двух взаимноперпендикулярных плоскостях. Не вызывают заболеваний человека. Сарцины - после деления (в трёх плоскостях) не расходятся, а образуют скопления, располагающиеся в виде пакетов (8, 16 и более клеток). В патологии человека значения не имеют; формы , могут обитать в водоёмах, на коже. Стафилококки –делятся в нескольких плоскостях, образуя бесформенные скопления, напоминающие «виноградные грозди» Золотистый стафилококк – возбудитель более 100 заболеваний, вызывает гнойный поражения практически любых органов и тканей. Грам + .Вызывает ГВЗ от кожи, заканчивая мозговыми оболочками Задача. При микрокопировании препаратов приготовленных из срезов головного мозга собаки, покусавшей несколько человек, в цитоплазме клеток ЦНС обнаружены включения. Какими микроорганизмами инфицирована собака? Как называются выявленные включения? Какова природа этих включений? Данная собака инфицирована вирусом бешенства. Выявленные включения в цитоплазме нейронов – тельца Бабеша-Негри (эозинофильные включения вируса овальной формы(красного цвета, окраска по Романовскому - Гимзе). Билет №2 Спорообразование у бактерий. Стадии, функциональное значение. Споры— особая форма покоящихся клеток со сведённой к нулю метаболической активностью. Они резистентны к нагреванию, радиации, высыханию и воздействию химических веществ. Благодаря этим свойствам, споры могут длительно сохраняться и обеспечивать сохранение вида в неблагоприятных условиях. Подготовительная стадия споруляции сопровождается прекращением деления и увеличением количества липидных включений. Стадия предспоры споруляции обычно начинается бурно. В клетке появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок цитоплазмы с изменёнными плотностью и тинкториальными свойствами. Подобное образование обозначают терминами «предспора», или «примордиальная спора». Третья стадия споруляции включает появление оболочки (обычно в течение 10 мин после образования предспоры) и ещё большее увеличение коэффициента светопреломления. Стадия созревания споры сопровождается её уплотнением и снижением метаболической активности клетки. Каждая бактерильная клетка может образовывать только одну спору. У бацилл диаметр споры не превышает диаметра клетки (возбудитель сибирской язвы), у клостридий диаметр споры превышает диаметр клетки, что придает им форму теннисной ракетки или барабанной палочки (возбудитель столбняка, газовой гангрены, ботулизма). Оболочка споры 2-ухслойная, пространство между слоями заполнено гликопептидными полимерами, сходными с пептидогликаном, образующими сетчатую структуру. Проявляет чувствительность к лизоциму. Внутренний слой образован пептидогликанами, а внешний слой образуют кератиноподобные белковые структуры с низкой проницаемостью. Окрашивается по методу Циля-Нильсена в красный цвет. Высокая резистентность спор связана с содержанием Са-соли дипиколиновой кислоты в их оболочке. Окраска по Цилю-Нильсену и ее этапы. 1)На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина, нагреть 3-5 мин до появления паров 2)Промыть водой 3)Нанести 5%р-р серной кислоты на 1-2 мин для обесцвечивания 4)Промыть водой 5)Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин. 6)Промыть водой , высушить, микроскопировать В основе метода лежит разрыхление клеточной стенки бактерий для усиления поглащения красителя и избирательное обесцвечивание под действием кислоты. Кислотоустойчивость бактерий обусловлена особым строением их клеточной стенки с повышенным содержанием липидов : разветвленные жирные кислоты (миколовые кислоты), глико- и фосфолипиды, воски. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, а некислотоустойчивые обесцвечиваются и в дальнейшем окрашиваются метиленовым синим в синий. Вирусы, вироиды, прионы, особенности структуры, отличительные свойства. Вызываемые заболевания. Вирусы –относится к царству Virae. Мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, содержащие только один тип нуклеиновый кислоты (ДНК или РНК). Облигатные внутриклеточные паразиты, репродуцирующиеся только в живых клетках организма хозяина. Способ размножения разобщенный (дизъюнктивная репродукция): отдельные структуры вируса синтезируются в разных частях клетки. Капсид – белковая оболочка, в которую упакована геномная нуклеиновая кислота. Капсид состоит из субъединиц – капсомеров, которые могут быть уложены по кубическому или спиральному типу. Капсид и нуклеиновая кислота образуют нуклеокапсид. Некоторые вирусы имеют дополнительную оболочку – суперкапсид (фрагмент клеточной мембраны - двойной слой липидов + специфичные вирусные белки). Вирусы, не имеющий суперкапсида, называются «голыми», имеющие суперкапсид – «одетыми». Вызывают различные заболевания: ДНК-содержащие(герпес, гепатит В, натуральную оспу, ветряную оспу, опоясывающий лишай и др.), РНК-содержащие(грипп, бешенство, ВИЧ, клещевой энцефалит, гепатит А, гепатит Е). Вироиды – инфекционные молекулы кольцевой РНК, близкие внехромосомным генетическим элементам бактерий(плазмидам) , не содержащие белка, вызывающие заболевания растений. Прионы – белковые инфекционные агенты, вызывающие летальные неврологические заболевания (губчатые энцефалопатии) куру, болезнь Крейтцфельдта-Якоба, фатальная семейная бессонница. Прионы устойчивы к инактивации факторами, влияющими на нуклеиновые кислоты. Белок приона кодируется генами организма хозяина, которые содержатся в репрессированном состоянии в каждой клетке. Накапливаются прионы в клетках могут только после депрессии генов изоформами приона, попавшего в организм извне. Задача. При микроскопии мазков из зев, больного с тяжелой некротической ангиной, обнаружены палочки, располагающиеся под углом друг к другу, с утолщениями на концах. Какие это могут быть микроорганизмы? Какие дополнительные методы окраски нужно провести для уточнения морфологии данных бактерий? Corynebacterium diphtheriae, возбудитель дифтерии(острая инфекция, характеризующаяся фиброзным воспалением в зеве, гортани, реже – в других органах) . Необходима окраска по Нейссеру, позволяющая выявить зёрна волютина, характерные для данной бактерии. Билет №3 Фазово-контрастный микроскоп. Устройство, применение. Метод фазово-контрастной микроскопии основан на том, что живые клетки и микроорганизмы, слабо поглощающие свет, тем не менее способны изменять фазу проходящих через них лучей (фазовые объекты). В разных участках клеток, отличающихся показателем преломления и толщиной, изменение фаз будет неодинаковым. Эти разности фаз, возникающие при прохождении видимого света через живые объекты, можно сделать видимыми с помощью фазово-контрастной микроскопии. Фазово-контрастная микроскопия осуществляется с помощью обычного светового микроскопа и специального приспособления, куда входят фазово-контрастный конденсор с кольцевыми диафрагмами и фазовая пластинка, имеющая форму кольца. Луч света, пройдя через прозрачный объект, расщепляется на два луча: прямой и дифрагированный (преломленный). Прямой луч, проникнув через частицу, фокусируется на кольце фазовой пластинки, а дифрагированный луч как бы огибает частицу, не проходя через нее. Поэтому оптические пути их различны и между ними создается разность фаз. Она сильно увеличивается с помощью фазовой пластинки и благодаря этому контрастность изображения повышается, что позволяет наблюдать не только фазовые объекты целиком, но и детали строения, например, живых клеток и микроорганизмов. Простые методы окраски – фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, промывают водой, высушивают,микроскопируют). Например водный фуксин Пфейффера и метиленовый синий Леффлера. При окраске метиленовым синим по Леффлеру гранулы волютина дифтерийных коринебактерий приобретают темно-синий цвет. Характеристика палочковидных бактерий и заболевания, вызываемые ими. Палочковидные бактерии различаются по размерам ( могут быть мене 1 мкм(Brucella) или превышать 3мкм (Clostridium)), форме концов клетки(заострены, закруглены, обрублены, кокковидной или овоидной формы) и взаимному .расположению клеток. Чаще всего палочковидные бактерии располагаются хаотично (шигелла, сальмонелла, кишечная палочка). Могут располагаться попарно – диплобактерии (клепсиелла), в виде цепочек различной длины(стрептобактерии, например, возбудитель сибирской язвы). Только палочковидные бактерии, вызывающие заболевания человека, могут образовыватьспоры как форму сохранения в окр. среде : клостридии и бациллы (см. выше). Задача. Из крови больного с подозрением на токсоплазмоз приготовлен тонкий мазок. Какой метод окраски необходимо использовать? Какие морфологические признаки имеет возбудитель? Ответ: Окраску по Романовскому-Гимзе: ядро окрасится в рубиново-красный цвет, цитоплазма в голубой. Характерная форма – апельсиновая долька или полумесяц размером 4-7 * 1,5 – 2 мкм. Относятся к типу Apicomplexa , класс Кокцидии. Билет №4 Морфология, ультраструктура и химический состав бактерий. Протопласты и сферопласты. Основные отличия эукариот и прокариот. Обязательные компоненты бактерий: - клеточная стенка. Функции – образуют форму бактерий, защита, транспорт, антигены, окраска по Граму. В соответствии с окраской по Граму выделяют грам+ и грам- микроорганизмы. Стенка грам+ бактерий сохраняет комплекс генциана фиолетового и йода и окрашивается в сине-фиолетовый цвет. Грам- бактерии не сохраняют этот комплекс и после окраски фуксином приобретают розовый цвет. Грам+ бактрии содержат много муреина и тейхоевые кислоты. Грамм- бактерии – содержат липополисахарид, мало муреина. - цитоплазматическая мембрана. При повреждении клетка гибнет. ЦПМ состоит из белков и фосфалипидов - цитоплазма. В ней находятся рибосомы, нуклеоид (ядерное вещество), включения (гликогена, крахмала, зерна Волютина). Необязательные компоненты: - капсула состоит из полисахаридов или белков - жгутика состоят из белка флагеллина - реснички – -споры – неактивная форма бактерий. Протоплаты – полностью лишенные клеточной стенки Сферопласты – частично лишены клеточной стенки. Основные отличия эукариотов и прокариотов. Клетки прокариот от отличии от эукариот имеют более простое строение. У прокариот нет организованного ядра (нуклеод). У эукариот – есть. У прокариот рибосомы мельче, нет митохондрий (есть мезосомы) и комплекса Гольджи. Окраска по Романовскому-Гимзе. Краска состоит из смеси: азура, эозина, метиленового синего (перед окраской ее растворяют в дистиллированной воде 1:10. Готовят мазок. препарат фиксируют метиловым или этиловым спиртом. Окрашивают препарат 30-40 минут. Промыть водой, высушить и микроскопировать. Ядра простейших в ярко-розовый. С помощью данного вида окраски изучают морфологию спирохет . Борелии (возбудители возвратного тифа) окрашиваются в фиолетовый, трепонемы – в бледно розовый, лептоспиры – в розово-сиреневатый. Обнаруживают вирусы ( тельца Бабеша –Негри) и идентифицируют простейших. Простейшие. Классификация. Морфологические особенности. Вызываемые заболевания. Снаружи покрыты ригидной мембраной пелликулой, снаружи которой располагается эктоплазма. В эндоплазме содержатся все клеточны структуры, чаще содержат одно ядро (герардии содержат 2 ядра). Некоторые виды могут содержать опорные фибриллы и даже минеральный скелет. Некоторые простейшие в неблагоприятных условиях способны образовывать цисты ( жизненные процессы резко замедляются, теряют органеллы, покрываются толстой и прочной оболочкой). Классификация основана на способах движения. Царство Animalia, подцарство Protozoa. Виды, патогенные для человека относятся к 3-м типам Sarcomastigophora, Apicomplexa, Ciliophora. Тип Sarcomastigophora включает 2 подтипа Sarcodina( амебы, передвигающиеся за счет выростов цитоплазмы – ложноножек-псевдоподий, размножаются делением, способны образовывать цисты, патогенна Entamoeba histolytica(дизентерийная амеба), поражающая кишечник) и Mastigophora( характерно наличие одного или нескольких жгутиков, принципиальное отличие жгутиков простейших от жгутиков бактерий – наличие кинетопласта(особая органелла, расположенная у основания жгутика и вырабатывающая энергию для движения), у некоторых видов движение обеспечивается ундулирующей мембраной( тонкая перепонка, продольно соединяющая жгутик с телом); патогенны 4 рода: трихомонады, гиардии, лейшмании, трипаносомы. Тип Ciliophora включает ресничные инфузории, имеющий реснички, с помощью которых они передвигаются, размножаются путем деления, но могут и с помощью конъюгации, способны образовывать цисты, патогенное значение имеет Balantidium coli. Тип Apicomplexa составляет лишь паразитические виды. Своим названием обязаны способности образовывать скопления клеток, защищенных общей плотной оболочкой. Включает классы: споровики, Coccidia, Piroplasma. 3Споровики – малярийный плазмодий ( малярия), токсоплазма (токсоплазмоз) 1Саркодовые – дизентерийная амеба(амебиаз) 1Жгутиковые – трихомонада(трихомоноз), гиардии ( гиардиоз(лямблиоз)), лейшмания(лейшманиоз), трипаносома (трипаносомоз). 2Инфузории – балантидиоз. Амебиаз - инфекционная болезнь, вызываемая Entamoeba histolytica, сопровождающаяся язвенным поражением толстой кишки; возможно образование абсцессов в различных органах; протекает хронически. Возбудитель существует в двух стадиях развития: вегетативной и цистной. Вегетативная стадия имеет несколько форм (тканевая, большая вегетативная, просветная и предцистная). Циста (покоящаяся стадия) имеет овальную форму; образуется из вегетативных форм в кишечнике. Просветная форма малоподвижна, обитает в просвете толстой кишки как безвредный комменсал, но в определенных условиях становится патогенной и превращается в тканевую форму. Тканевая форма обладает подвижностью за счет формирования псевдоподий. Она может обнаруживаться в свежевыделенных фекалиях человека, проникает в стенку толстой кишки, вызывает язвенные процессы, способна фагоцитировать эритроциты. Токсоплазмоз - зоонозная инфекция с фекально-оральным механизмом передачи возбудителя. Характеризуется полиморфной клинической картиной (поражением нервной системы, увеличением печени и селезенки, поражением скелетных мышц и миокарда) и хроническим течением. Возбудитель токсоплазмоза - Toxoplasma gondii - простейшее из класса Sporozoea, облигатный внутриклеточный паразит, морфологически напоминающий вытянутую дольку апельсина, длиной 4-7 мкм. Деление внутри пораженных клеток приводит к образованию псевдоцист (скопление токсоплазм), а после полового размножения (в организме кошачьих) возникают истинные цисты - ооцисты, окруженные плотной оболочкой. Малярия - острая или хроническая эндемическая трансмиссивная болезнь, характеризующаяся приступами лихорадки, увеличением печени и селезенки, гемолитической анемией, рецидивирующим течением. Заболевание у людей вызывают 4 вида малярийных плазмодиев: 1. Plasmodium vivax - возбудитель трехдневной формы малярии; 2. Plasmodium ovale - вызывает трехдневный овале-малярии; 3. Plasmodium malariae - возбудитель четырехдневной формы малярии; 4. Plasmodium falciparum - вызывает тропическую малярию. В процессе своей жизнедеятельности плазмодии проходят сложный цикл развития со сменой хозяина. Он состоит из двух фаз: половой (спорогонии), которая проходит в теле самки комара, и бесполой (шизогонии), что происходит в организме человека. Сначала плазмодии проникают в клетки печени (тканевая шизогония), позже - в эритроциты (эритроцитарная шизогония). Тело малярийного паразита состоит из цитоплазмы и ядра. Некоторые стадии паразитов содержат пигмент, который окраски не воспринимает, а имеет свой естественный цвет: темно-бурый, золотисто-желтый, коричневый, почти черный (разный у разных видов паразитов). Задача. В материале больного с подозрением на сифилис были обнаружены мелкие, извитые, подвижные формы бактерий, напоминающие спираль. Какие это могут быть бактерии? Как был приготовлен препарат для определения подвижности бактерий и с какой целью проводится изучение подвижности? При использовании какой системы светового микроскопа изучается подвижность микроорганизмов? Ответ : Спирохеты. Подвижность определяют методом раздавленной капли или методом висячей капли. Подвижность – важный диагностический признак, позволяет дифференцировать возбудителей. С помощью темнопольной микроскопии и фазовоконтрас Билет №5 Люминесцентный микроскоп, устройство, применение. Большинство микроорганизмов приобретает способность люминесцировать, или флюоресцировать, при освещении их ультрафиолетовыми лучами после предварительной окраски специальными красителями — флюорохромами. Поглощая короткие ультрафиолетовые волны, объект излучает более длинные волны видимой части спектра. Вследствие этого разрешающая способность микроскопа повышается. Это дает возможность исследовать более мелкие частицы. Для успешной микроскопии необходим яркий источник света, в качестве которого используют ртутно-кварцевую лампу высокого давления. Между источником света и зеркалом помещают сине-фиолетовый светофильтр, который пропускает только короткие и средние волны ультрафиолетового света. Попав на объектив, эти волны возбуждают в нем люминесценцию. Чтобы увидеть ее, на окуляр микроскопа надевают желтый фильтр, который пропускает длинноволновый свет флюоресценции, возникающий при прохождении лучей через объект. Короткие волны, не поглощенные исследуемым объектом, убираются, отсекаются этим фильтром. Систематика и номенклатура бактерий. Принципы классификации. Принципы классификации бактерий : 1) морфологические св-ва: форма микроба, особенности взаиморасположения (зависят от деления в плоскости и расхождения или нерасхождения после деления), ведичина, структура. 2) подвижность и типы движения( скользящие – за счет волнообразных сокращений тела, плавающие – движения обеспечивают жгутики) 3)способность к спорообразованию(спорообразующие и неспорообразующие) 4)физиологические свойства( по типу питания : аутотрофы, гетеротрофы и др., отношение к кислороду: аэробы и анаэробы) 5)биохимические свойства – способность ферментировать субстраты, образовывать различные биохимические продукты или гидролизовать белки. 6)тинкториальные – способность окрашиваться красителями, отношение к различным красителям 7)генотипические (способность обмениваться генетич. информацией?) 8)культуральные – способность расти на питательных средах(характер роста) По классификации Берджи, бактерии составляют царство прокариот и делятся на 4 отдела: грацикулоциты – с тонкой клеточной стенкой, Грам -; фирмикуты – с толстой клеточной стенкой, Грам +; тенерикуты – с без ригидной клеточной стенки, «мягкие», «нежные», включает микоплазмы; архебактерии – с дефектной кл.стенкой, особенностями строения рибосом, мемран и рибосомных РНК. Таксономические категории: класс, отдел, порядок, семейство, род, вид (видовое название состоит из двух слов, т.е. соответствует бинарной номеклатуре, первое слово в названии указывает на принадлежность к определённому роду (с прописной буквы), второе на вид). Вид – совокупность особей, имеющих единый генотип, который в стандартных условиях проявляется схожим фенотипом. Для бактерий характерна внутривидовая изменчивость. Строение дермомицетов и заболевания, вызываемые ими. Дерматомицеты — облигатно патогенные паразиты кожи человека, вызывающие дерматомикозы (эпидермомикозы): эпидермофитию, микроспорию, трихофитию. Дерматомицеты являются основными возбудителями микозов кожи человека, паразитируют в роговом слое кожи и вызывают поражение кератинсодержащих структур (волос и ногтей). Дерматомицеты вырабатывают энзимы — кератиназы, которые расщепляют кератин, что способствует инвазии дерматомицетов в поверхностные слои кожи, где в дальнейшем они и продолжают существовать. Клеточная стенка дерматомицетов содержит мананы — вещества, которые ингибируют местный клеточный иммунитет и приводят к замедлению слущивания роговых чешуек с поверхности кожи и развитию хронического течения инфекции. Задача. Из отделяемого влагалища женщины был приготовлен мазок и окрашен по Граму. При микроскопии мазков видны кокки, располагающиеся попарно, а также клетки имеющие грушевидную форму. Какие микроорганизмы обнаружены в исследуемом материале? Возбудителями каких инфекций они являются? Какие дополнительные методы исследования можно использовать для более точной дифференциации обнаруженных микробов? Судя по описанию, у женщины выявлены гонококки и трихомонады. Т.е. у неё гонорея и трихомоноз. Трихомонады можно выявить окрашиванием по Романовскому – Гимзе (ядро окрасится в красный цвет, цитоплазма в синий), наличие жгутиков у трихомонады можно выявить окрашиванием по Морозову. Билет №6 И.И. Мечников и его учение о невосприимчивости к инфекционным заболеваниям – важный этап в развитии медицины. Роль отечественных ученых в развитии микробиологической науки (Г.Н. Габричевский, С.Н. Виноградский, Н.Р. Гамалея, Л.А. Зильбер, П.Ф. Здородовский, З.В. Ермольева, В.Д. Тимаков). Открытие Д.И. Ивановского – важный этап в развитии вирусологии. И. И. Мечников (1845-1916) – основоположник медицинской микробиологии. В 1883 г. создал фагоцитарную теорию иммунитета. В 1909 г. за исследования по фагоцитозу И. И. Мечникову (вместе с П.Эрлихом) была присуждена Нобелевская премия. Габричевский Г.Н.. Организовал бак лабраторию и бактериальный институт. Ввел сывороточное лечение дифтерии. Высказал комариную теорию передачи малярии, доказал роль стрептококков при скарлатине. Виноградский С.Н. – основатель почвенной микробиологии. Гамалея Н.Ф. – основоположник бактериологической станции, вакцинацию против бешенства. (открыл холероподобный птичий вибрион). В посление годы изучал вирусологию (грипп), иммунологию, лечение туберкулеза. Зильбер Л.А. –возбудителя клещевого энцефалита. Здородовский Г.Ф.- изучал реккетсиозы. Ермольева З.Б. - изучала холеру, иммунные реакции и антибиотики. Внедрила в практику лизоцим, получила препарат пенициллина. Тимаков -ряд важных теоретических и прикладных исследований по микробиологии, иммунологии и эпидемиологии. Результатом активной работы стала Сталинская премия, вручённая в1952 году за совершенствование производства лечебно-профилактических препаратов большой группе научных сотрудников во главе с Владимиром Тимаковым. Обобщил опыт противоэпидемической практики и выдвинул ряд принципов ликвидации инфекций. Основные научные труды Тимакова посвящены изучению проблемы изменчивости и генетики микробов, бактериофагии — формам бактерий, микоплазматологии,эпидемиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней, иммунологии. Тимаков внёс весомый вклад в изучение L-форм бактерий. Так, им было установлено, что под воздействием ряда лекарств некоторые бактерии не погибают, а лишь теряют часть своей оболочки, приобретают форму шара и становятся неузнаваемыми. Электронный микроскоп. Принцип устройства. Разрешающая способность применения. Электронная микроскопия основана на использовании потока электронов высокой энергии вместо световых лучей. Применяется для изучения морфологии и структуры бактерий, риккетсий, спирохет, грибов, вирусов. Видно то, что не видно в световом микроскопе. Современный электронный микроскоп дает увеличение до 100 000раз. Источником электронов в микроскопе является электронная пушка (электроннолучевая трубка с катодом ― раскаленной нитью, и анодом ― цилиндром). Риккетсии. Морфология и заболевания, вызываемые ими. Риккетсии – грамм -, мелкие палочковидные бактерии , облигатно паразитирующие в различных клетках. Морфология может изменяться в зависимости от условий культивирования. Являются внутриклеточными энергетическими паразитами. У них отсутствуют самостоятельные ферменты для синтеза АТФ. У человека риккетсии вызывают эпидемический сыпной тиф, пятнистую лихорадку Скалистых гор, ку-лихорадку и другие риккетсиозы. Задача. При изучении морфологии бактерий, студент для микроскопии окрашенных препаратов использовал иммерсионную систему светового микроскопа. По каким признакам можно отличит иммерсионный объектив микроскопа? Почему при изучении морфологии бактерий необходимо использовать иммерсионную систему микроскопа? Какие правила необходимо соблюдать при изучении мазков с помощью иммерсионной системы? При микроскопировании препаратов с иммерсионным объективом необходимо строго придерживаться определенного порядка : 1)на приготовленный на предметном стекле и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла 2)поместит препарат на предметный столик, закрепить зажимами. 3) повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива (90X, 100X) 4)осторожно опустить тубус до погружения объектива в каплю масла 5)установить ориентировочный фокус при помощи макровинта 6)провести окончательную фокусировку препарата при помощи микровинта, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, т.к. это может повлечь поломку покровного стекла. 7)По окончании работы необходимо удалить масло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малое увеличение. Билет №7 Открытие микробов (А. Левенгук). Морфологический период в истории микробиологии, исследования Д. Самойловича и Э. Дженнера. Роль русских ученых в развитии микробиологии (Л.С. Ценковскиий, Ф.А. Ценковский, Ф.А. Леш, П.Ф. Боровский). Левенгук – основоположник научной микробиологии с его именем связан морфологический период микробиологии. Он создал микроскоп с увеличением в 160 разВпервые открыл и описал бактерии, дрожи, простейшие. Обрисовал основные формы бактерий. Самойлович Л.С. – изучал чуму, предложил прививки от чумы. Джейнер Э. – разработал вакцину против оспы. Л.С.Цинковский –вакцины против сибирской язвы, открыл 4 вида новых грибов. А.Ф. Леш – выявил возбудителя амебиазы человека. П.Ф. Боровский – изучал лейшманиоз. Темнопольный микроскоп, устройство, применение. применение для слабоокрашивающихся микробов (бледные спирохеты) и микробов, имеющих малые величины. При темнополевом методе применяется яркое боковое освещение, которое дает изображение светящегося объекта на темном фоне. Эффект темного поля создается применением специального конденсора. Для исследования в темном поле используют обычный световой микроскоп. При этом заменяют конденсор на специальный, прибавляют свет до максимума. При помощи этого метода могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. С помощью темнопольной микроскопии изучают нативные препараты типа "раздавленной" или "висячей капли". Характеристика извитых бактерий и заболевания, вызываемые ими. Извитые формы бактерий имеют завитки. ¼, ½ завитка – вибрионы(холерный вибрион), несколько завитков имеют спириллы (вызывают содоку – болезнь от укуса крыс). Спиралевидные бактерии – спирохеты: бареллии (возвратный тиф, болезнь Лайма), лептоспиры(лептоспироз), трипонемы(сифилис). Отличительная особенностью спирохет является наличие аксостиля(особого пучка фибрилл, за счет которого осуществляется движение). Спирохеты – грамм -. Задача. В лаборатории микробиолог исследовал мазок из мокроты. В мазках, окрашенных по методу Циля-Нильсена, были обнаружены тонкие палочки, расположенные ветвисто, окрашенные в красный цвет. Как называются микроорганизмы, имеющие такую морфологию. Почему исследуемые бактерии окрасились в красный цвет? Какие виды бактерий окрашиваются по Цилю-Нильсену в красный цвет? Ответ: Это микобактерии из порядка актиномицетов, возбудители туберкулёза. В красный цвет окрасились, потому что кислотоустойчивы Билет №8 Работы Р.Коха и их значение в практической микробиологии и инфекционной патологии. В 1877 г. опубликовал работу, посвященную возбудителю сибирской язвы. В 1882 г. открыл возбудителя туберкулеза. (В 1905 г. за исследование туберкулеза Р. Коху была присуждена Нобелевская премия.) Ему принадлежит также открытие возбудителя холеры. Разработал основные принципы проведения дезинфекции. Разработка селективных питательных сред, в качестве основных ингредиентов были использованы мясные бульоны и агары. Именно разработка новых методов культивирования и выделения бактерий привела к открытию возбудителей холеры, туберкулеза и др. патогенных микроорганизмов. Разработал постулаты Коха, которые, однако утратили в настоящий момент значение, т.к. мало применимы по отношению к вирусным инфекциям и риккетсиозам. Жгутики и реснички бактерий, и функциональное значение. Химический состав. Способы обнаружения. Жгутики – представляют собой тонкие нити , берущие начало от ЦПМ. Состоят из белка флагеллина, являющегося H-антигеном. Субъединицы флагеллина закручены в виде спирали . Реснички (фимбрии, пили). Основная функция фимбрий – прикрепление бактерий к субстратам(важный фактор патогенности и колонизации). F-пили участвуют в конъюгации у бактерий. Микоплазмы, морфология и заболевания, вызываемые ими. Микоплазмы мелкие бактерии, окруженные только ЦПМ, содержит стеролы. Нет клеточной стенки. Осмотически чувствительны. Имеют разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную. Эти формы видны при фазово-контрастной микроскопии чистых культур микоплазм. На питательной среде образуют колонии, напоминающие яичницу-глазунью. Патогенные микоплазмы вызывают хронические инфекции - микоплазмозы. Поражают органы дыхания (пневмония), мочевой пузырь, почки, ЦНС. Задача. Из мокроты больного пневмонией был приготовлен мазок и окрашен по Граму. При микроскопии мазка обнаружены парные ланцетовидные кокки. Как они окрашиваются по Граму? Какие бактерии имеют такую морфологию? Какие дополнительные методы исследования можно провести для выявления морфологических особенностей обнаруженных бактерий? Ответ: В синий цвет (Грам(+)). Пневмококки. Может понадобиться окраска капсул по Бурри-Гинесу, выделение чистой культуры. Билет №9 Л. Пастер – основоположник микробиологии как науки. Влияния работ Пастера на развитие медицинской микробиологии. Формирование прикладной иммунологии. Научная деятельность Л. Пастера многогранна и охватывала все основные проблемы того времени, связанные с жизнедеятельностью микроорганизмов. Труды Л. Пастера: 1857 – Брожения. 1860 – Самопроизвольное зарождение. 1865 – Болезни вина и пива. 1868 – Болезни шелковичных червей. 1881 – Зараза и вакцина. 1885 – Предохранение от бешенства. Л. Пастер обнаружил анаэробный способ существования, ввел термины «аэробный» и «анаэробный». Л. Пастер доказал невозможность самозарождения. Пастер разработал рекомендации по предупреждению попадания посторонних микробов из внешней среды (пастеризация). Работы Л. Пастера в области изучения инфекционных болезней животных и человека позволили ему не только выяснить природу этих заболеваний, но и найти способ борьбы с ними, положив начало развитию медицинской микробиологии. Пастер разработал теорию аттенуации – ослабление вирулентных свойств микроорганизмов и их токсинов. Первая искусственная вакцина (в отличие от Дженнеровской прививки).Пастер предложил идею вакцинации. Применение вакцин дало блестящие результаты, и уже при жизни Пастера во многих странах были организованы Пастеровские станции, где готовили вакцины для прививок. В нашей стране – в 1886 в г. Одессе. Разработав принцип изготовления вакцин и методы проведения профилактических прививок, Пастер заложил основы науки иммунологии. Понятие о виде, как о низшей номенклатурной единице. Варианты (биовар, хемовар, серовар и другие). Вид – совокупность особей, имеющих единый генотип, который в стандартных условиях проявляется схожим фенотипом. Вариант – штаммы микробов одного вида, которые отличаются друг от друга по каким-то признакам: Морфовары – по морфологическим, серовары – по антигенным, фаговары – по чувствительности к бактериофагам, биовары – по биологическим или культуральным признакам, хемовары – по биохимическим. Строение плесневых грибов и заболевания, вызываемые ими. Плесневые грибы растут в виде переплетающихся трубок – гиф. Структурной единицей плесневого гриба является гифа – разветвленная микроскопическая трубка, диаметром 2-10 мкм, содержащая цитоплазму и органеллы. Совокупность гиф – мицелий. Образование мицелия - отличительный признак истинных грибов. Гифы высших грибов содержат перегородки – септы, гифы низших грибов перегородок не имеют(такие гифы – ценоцитными). В целом плесневой гриб представляет собой ценоцит – обширную территорию цитоплазмы с множеством ядер, располагающуюся в скоплении гиф. Врастающая в субстрат часть мицелия(абсорбирует пит.в-ва) – вегетативный мицелий. Растущая на пов-сти субстрата часть – воздушный мицелий. Нередко воздушный мицелий образует специализированные гифы, несущие репродуктивные структуры – спорофоры, которые подразделяют на конидио- и спорангиофоры. Конидии – неполовые репродуктивные структуры. На концах спорангиофор располагаются специализируемые мешки – спорангии, в которых образуются вегетативным путем спорангиоспоры. Заболевания, вызываемые плесневыми грибами : аспергиллез, фавус, хромомикоз(болезнь Педрозо), стригущий лишай, эпидермофитию Гифальные (плесневые) грибы образуют ветвящиеся тонкие нити (гифы), сплетающиеся в грибницу, или мицелий (плесень). Толщина гиф колеблется от 2 до 100 мкм. Гифы, врастающие в питательный субстрат, называются вегетативными гифами (отвечают за питание гриба), а растущие над поверхностью субстрата – воздушными или репродуктивными гифами (отвечают за бесполое размножение). Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представлены многоядерными клетками. Гифы высших грибов разделены перегородками, или септами. Задача. Из испражнений больного с острой кишечной инфекцией приготовлен мазок. В мазке обнаружена грам «-» палочки. В какой цвет окрашиваются грам «-» бактерии и чем объяснить их окрашивание? Какие микробы могут иметь такую морфологию? Можно ли определить по данной морфологии возбудителя заболевания? Грам (-) окрашиваются в красный цвет, так как образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, а затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет. Такую морфологию могут иметь эшерихии, сальмонеллы, шигеллы. Поэтому, наверное, по данной морфологии определить точно возбудителя нельзя. Билет №10 Понятие о популяции, штамме, клоне. Популяция — группа особей, способная к более-менее устойчивому самовоспроизводству (как половому, так и бесполому), относительно обособленная (обычно географически) от других групп, с представителями которых (при половой репродукции) потенциально возможен генетический обмен. С точки зрения популяционной генетики, популяция — это группа особей, в пределах которой вероятность скрещивания во много раз превосходит вероятность скрещивания с представителями других подобных групп. Обычно говорят о популяциях как о группах в составе вида или подвида. В современных эволюционных теориях (например, в Синтетической теории эволюции) популяция считается элементарной единицей эволюционного процесса. Штамм - это чистая культура микроорганизмов, выделенных из определенного источника. Штаммы различаются по некоторым признакам, не выходящим за пределы характеристики вида. Клон - это совокупность бактерий, являющихся потомством одной клетки Включения бактериальной клетки. Волютиновые зерна и методы окраски. В цитоплазме имеются различные включения в виде гранул гликогена, полисахаридов, бета-оксимасляной к-ты, полифосфатов(волютин). Они являются запасными веществами для питания и энергетиических потребностей бактерий. Волютин обладает сродством к основным красителям и легко выявляется с помощью специальных методов окраски. Например , по нейссеру, в виде метахроматических гранул. Характерное расположение гранул волютина выявляется у дифтерийной палочки в виде интенсивно прокрашивающихся полюсов клетки. Окраска по нейссеру: 1. На фиксированный препарат наносят уксусно-кислый синий 2-3 мин. 2. Сливают краску и наносят раствор Люголя 1 мин. 3. Промывают препарат водой. 4. Докрашивают раствором хризоидина или везувина 2 мин. промывают водой, высушивают Характеристика ветвистых бактерий и заболевания, вызываемые ими. Актиномицеты напоминают плесневые грибы. Ветвистые бактерии (актиномицеты и др):образуют как и грибы ,мицелий-нитевидные переплетающиеся клетки. Могут образовывать споры, служащие для размножения. Грам+. Вызывают актиномикоз, возникает после травматического удаления зуба. Задача. У больного с подозрением на кожную форму сибирской язвы из содержимого карбункула приготовлен мазок, в котором обнаружены крупные палочки с обрубленными концами, располагающиеся в виде цепочки. Какие методы окрашивания можно использовать для определения морфологии этих бактерий? Как определить имеется ли у них капсула? Наличие капсулы определяется с помощью окрашивания по методу Бурри – Гинса. Для выявления спор можно воспользоваться окрашиванием по Ожешко: для спор сибиреязвенной палочки характерно центральное расположение спор. Билет №11 Биологические свойства вирусов. Их отличие от прокариот и эукароиот. Неклеточная форма жизни, проявляет себя как живой организм только внутри живой клетки (облигатный внутриклеточный паразит) Не имеет клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержит только один тип нуклеиновый кислоты (ДНК или РНК). 1)Ультрамикроскопические размеры (измеряются в нанометрах). Крупные вирусы (вирус оспы) могут достигать размеров 300 нм, мелкие- от 20 до 40 нм. 1мм=1000мкм, 1мкм=1000нм. 2)Вирусы содержат нуклеиновую кислоту только одного типа- или ДНК (ДНК- вирусы) или РНК (РНК- вирусы). У всех остальных организмов геном представлен ДНК, в них содержится как ДНК, так и РНК. 3)Вирусы не способны к росту и бинарному делению. 4)Вирусы размножаются путем воспроизводства себя в инфицированной клетке хозяина за счет собственной геномной нуклеиновой кислоты. 5)У вирусов нет собственных систем мобилизации энергии и белок- синтензирующих систем, в связи с чем вирусы являются абсолютными внутриклеточными паразитами. 6)Средой обитания вирусов являются живые клетки- бактерии (это вирусы бактерий или бактериофаги), клетки растений, животных и человека. Все вирусы существуют в двух качественно разных формах: внеклеточной- вирион и внутриклеточной- вирус. Таксономия этих представителей микромира основана на характеристике вирионов- конечной фазы развития вирусов. 2.Сложные методы окраски. Окраска по Граму, её этапы. Сложные методы-на препарат один за другим наносят красители, которые отличаются по составу и цвету. Используются для выявления структурных компонентов бактериальных клеток. По граму: На фиксированный мазок наносят раствор генцианового фиолетового на 1-2 мин через фильтровальную бумагу снимают, краситель сливают. Наносят раствор люголя на 1-2 мин Промывают водой Наносят раствору фуксина на 1-2 мин, промывают водой, сушат , микроскопируют. Морфология дрожжеподобных грибов, заболевания, вызываемые ими. Дрожжи и дрожжеподобные грибы представлены отдельными овальными клетками, морфологически сходными между собой. Дрожжи размножаются только почкованием, а дрожжеподобные грибы способны образовывать псевдомицелий. Род Candida. Входят в состав нормальной микрофлоры рта, влагалища и толстой кишки. Представлены отдельными овальными клетками, морфологически сходными между собой. Размножаются почкованием, но иногда образуют псевдомицелий. Заболевания: орофарингельный кандидоз, эзофагит,вульвовангинит,баланит, мастит, вагинит. Дрожжевые грибы (дрожжи), в основном имеют вид отдельных овальных клеток. По типу полового размножения они распределены среди высших грибов – аскомицетов и базидиомицет. При бесполом размножении дрожжи образуют почки или делятся, что приводит к одноклеточному росту. Могут образовывать псевдогифы и ложный мицелий (псевдомицелий) в виде цепочек удлиненных клеток. Грибы, аналогичные дрожжам, но не имеющие полового способа размножения, называют дрожжеподобными. Они размножаются только бесполым способом — почкованием или делением. Заболевания, вызываемые дрожжеподобными и дрожжевыми грибами: кандидоз, бластомикозы; Заболевания, вызываемые плесневыми грибами: аспергиллез, пенициллез, мукормикоз.  Задача. В лабораторию доставлен материал от больного с открытой формой туберкулёза. Какой метод окрашивания применяется для выявления туберкулёзных бактерий в исследуемом материале? В какой цвет окрасится данный микроорганизм и почему? Какую форму и расположение имеет возбудитель туберкулёза в мазках? К какой группе относятся данные микробы? Билет №12 Морфология хламидий. Заболевания, вызываемые ими. Грам-; кокковидные, облигатные внутриклеточные паразиты, не синтезируют энергетические субстраты АТФ, ГТФ(«энергетические паразиты»). Вызывают поражения глаз, урогенетального тракта, легких и др.(трахомы, конъюнктивитов, венерической формы синдрома Рейтера, пахового лимфгранулемотоза) Методы окраски спор. Метод Циля-Нельсена; по Ожешко: 1. На нефиксированный мазок наливают 0,5% HCl – прогревают 1-2 минуты. 2. Промывают водой. 3. Высушить, зафиксировать в пламени. 4. На мазок помещают фильтровальную бумагу, и наливают фуксин Циля, нагревают до отхождения паров – 3 раза. 5.Промывают 5% H2SO4 – до обесцвечивания. 6. Промывают водой. Докрашивают метиленовой синью Леффлера – 3-5 минут Окраска спор по Ожешко – споры окрашиваются в красный цвет, тело бактерий – в синий. Спорообразующие бактерии. Заболевания, вызываемые ими. Палочковидные формы бактерий, бациллы, клостридии. Спора-своеобразная форма покоящихся фирмикутных бактерий ,т.е. бактерий с грамположительным типом строения клеточной стенки. Споры образуют при неблагоприятных условиях. Заболевания: столбняк, ботулизм, газовая гангрена, сибиреязвенная бацилла. Задача. В лабораторию доставлена спинномозговая жидкость, полученная от больного с подозрением на менингит. Какие методы окрашивания можно применить для выявления менингококков? В какой цвет они окрасятся по Граму? Каковы их морфологические особенности? Грамотрицательны, окрасятся в красный цвет. Можно так же применить окраску по Бурри-Гинесу для выявления капсулы. Морфологические особенности: мелкие диплококки, характерно расположение в виде пары кофейных зёрен, расположенных вогнутой стороной друг к другу. Неподвижны, спор не образуют, капсула непостоянна, имеют пили Риккетсии и хламидии — облигатные внутриклеточные бактерии, которые не растут на искусственных питательных средах. Вирусы также являются облигатными внутриклеточными микроорганизмами, но они принципиально отличаются от всех внеклеточных и внутриклеточных бактерий; отсутствием клеточной организации, ферментов строительного и энергетического метаболизма, наличием одного типа нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), неспособностью к бинарному делению. Для культивирования риккетсии, хламидий и вирусов используют клеточные культуры, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. |