кислотоуст.,споры, включения, подвижность (теория)-1. Кислотоустойчивые микроорганизмы, окраска по методу ЦиляНильсена
 Скачать 217.93 Kb.
|
|
1 Кислотоустойчивые микроорганизмы, окраска по методу Циля-Нильсена. Спорообразование у бактерий и окраска спор по методу Ожешко. Включение у бактерий и окраска по Нейссеру. Изучение подвижности бактерий в препарате висячей и раздавленной капли. Кислотоустойчивые микроорганизмы - возбудитель туберкулеза - возбудитель лепры - актиномицеты Все остальные микроорганизмы кислотоподатливые. Окраска кислотоустойчивых микроорганизмов по методу Циля-Нильсена. 1. на фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина (в фуксин добавляют карболовую кислоту для разрыхления кислотоустойчивой стенки и улучшения тинкториальных свойств) через полоску фильтровальной бумаги и подогреть 3-5 минут до появления паров. 2. снять бумагу, промыть мазок водой 3. для обесцвечивания 2-3 раза окунуть в емкость с 5% серной кислотой 4. промыть водой 5. докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 минут 6. промыть водой, высушить и микроскопировать. Кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново-красный цвет, кислотоподатливые – в синий цвет. Кислотоустойчивость обусловлена строением клеточной стенки с повышенным содержанием липидов, воска, оксикислот (миколовой кислоты). Кислотоустойчивые бактерии – микроорганизмы, обладающие выраженной резистентностью к 5-10% растворам кислот, щелочей, спирту. Споры Образуются при неблагоприятных условиях существования бактерий (высушивание, дефицит питания). Внутри 1 бактерии образуется 1 спора. Спорообразование не является способом размножения, а является способом сохранения вида. Форма спор: - овальная - шаровидная Спорообразующие микроорганизмы подразделяются на: бациллы – спорообразующие аэробные бактерии, у которых диаметр спор не превышает ширину клетки. клостридии – (clostridium - веретено) спорообразующие анаэробные бактерии, у которых диаметр спор превышает ширину вегетативной клетки. 2 1 – бациллы сибирской язвы 2 – клостридии столбняка 3 – клостридии ботулизма Расположение спор: - терминальное (возбудитель столбняка) - субтерминальное (ботулизм, газовая гангрена) - центральное (сибиреязвенная бацилла) Стадии спорообразования: 1. подготовительная 2. стадия предспоры 3. стадия образования дополнительных оболочек (кортекс, экзоспорица) 4. стадия созревания Процесс спорообразования занимает 18-20 часов. В благоприятных условиях споры прорастают в вегетативную форму за 4-5 часов. Споры плохо окрашиваются, т.к. имеют очень толстую оболочку – кортекс. Окраска спор по методу Ожешко 1. на нефиксированный мазок нанести 0,5 % соляную кислоту (для разрыхления оболочки споры) и подогреть 2-3 минуты 2. кислоту слить, промыть водой, просушить, зафиксировать мазок в пламени. 3. окрасить мазок по методу Циля –Нильсена. Споры окрашиваются в рубиново-красный цвет, вегетативные формы в синий цвет. Включения – это продукты метаболизма микроорганизмов, которые располагаются в их цитоплазме и используются в качестве запасных питательных веществ (это могут быть капли жира, полисахариды, сера, полифосфаты). 3 Включения могут иметь дифференциально-диагностическое значение, т.к. обладают способностью к метохромазии, т.е. окрашиваются в иной от цитоплазмы цвет (например, у дифтерийной палочки). Окраска включений (зёрен волютина) по методу Нейссера 1. на фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2-3 минуты 2. добавить раствор Люголя на 10-30 секунд 3. промыть водой 4. докрасить водным раствором везувина или хризоидина в течение 0,5-1 минуты 5. промыть водой, высушить и микроскопировать Зерна волютина представляют собой включения полифосфатов и имеют щелочную реакцию и окрашиваются ацетатом синьки в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет. Подвижность бактерий По характеру движения подвижные бактерии разделяют на плавающие и скользящие (ползающие.) Орган движения плавающих бактерий – жгутики (эшерихии, сальмонеллы). В состав жгутиков входит белок флагеллин, обладающий антигенностью и специфичностью (Н-антиген). В зависимости от количества жгутиков и их расположеия бактерии подразделяются на: - монотрихи – один жгутик на одном из полюсов клеток (возбудитель холеры) - лофотрихи – пучок из жгутиков, сосредоточенный на одном из концов клетки (синегнойная палочка) - амфитрихи – по одному или пучку жгутиков, расположенных биполярно на концах клетки (спириллы) - перетрихи – жгутики расположены по всей поверхности клеток (кишечная палочка) ЖГУТИКИ расположение 1. монотрихи 2. перитрихи 3. лофотрихи 4. амфитрихи 4 Подвижность скользящих бактерий обеспечивают волнообразные сокращения тела (спирохеты). Спирохеты имеют наружную мембрану клеточной стенки, окружающую протоплазматический цилиндр с цитоплазматической мембраной. Под наружной мембраной клеточной стенки (в периплазме) расположены периплазматические фибриллы, которые, как бы закручиваясь вокруг протоплазматического цилиндра спирохеты, придают ей винтообразную форму (первичные завитки спирохет). Фибриллы прикреплены к концам клетки и направлены навстречу друг другу. Другой конец фибрилл свободен. Число и расположение фибрилл варьирует у разных видов. Фибриллы участвуют в передвижении спирохет, придавая клеткам вращательное, сгибательное и поступательное движение. Подвижность бактерий изучается с помощью: 1. электронной микроскопии; 2. световой микроскопии а) в препаратах "висячей" или "раздавленной" капли в темном поле зрения, б) специальные методы окрашивания, основанные на протравливании солями тяжелых металлов, что приводит к увеличению толщины жгутиков; 3. посева на специальную полужидкую среду Пешкова (подвижные бактерии образуют диффузное помутнение в среде, неподвижные – дают «рост по уколу»). 5 Метод «висячей» капли покровное стекло исследуемый материал предметное стекло Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят каплю исследуемого материала. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. При этом капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Метод «раздавленной» капли На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла. |