|
|
сложные методы окраски. Метод Грама Метод БурриГинса
|
Метод Грама
|
Метод Бурри-Гинса
|
Цель применения
|
Для отличия одних видов бактерий от других (грамположительных от грамотрицательных), что является важным таксономическим признаком
|
Для выявления капсул у чистых культур капсульных бактерий
|
Реактивы:
Красящие растворы
|
Карболовый генцианвиолет или пропитанная им фильтровальная бумажка
Водный раствор фуксина или пропитанная им фильтровальная бумажка
|
Тушь
Разведённый (1:3) карболовый фуксин Циля
|
Протрава
|
Раствор Люголя – на 300 мл дист воды 1,0 г йода и 2,0 г KI
|
|
Дифференцирующее вещество
|
Этиловый спирт
|
|
Способ фиксации, состав фиксатора
|
В пламени горелки
|
В пламени горелки
|
Этапы окраски
|
На фиксированный мазок поместить фильтр.бумажку, пропитанную генцианвиолетом, смочить её водой, выдержать 3 минуты
Снять бумажку, слить с препарата оставшуюся краску и налить р-р Люголя на 1 минуту.
Слить р-р Люголя, провести дифференциацию, погрузив препарат несколько раз в стаканчик со спиртом (пока не перестанут отходить фиолетовые струйки)
Тщательно промыть препарат водой
Дополнительно подкрасить препарат с помощью красящей бумажки, пропитанной р-ром карболового фуксина, в течение 3 минут.
Промыть водой, высушить.
|
На предметное стекло нанести рядом каплю туши и каплю воды, в которой суспензировать внесённую петлёй капсульную культуру
Обе капли соединить в одну и размазать её тонким слоем с помощью второго предметного стекла
Высохший на воздухе мазок осторожно фиксировать в пламени горелки
Докрасить препарат разведённым карболовым фуксином Циля в течение 2-3 мин, после чего промыть водой и высушить.
|
Сущность метода
|
При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствором Люголя образуется комплексное соединение краски с йодом, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных (они остаются фиолетовыми) и удаляются из грамотрицательных (при дополнительной окраске фуксином приобретают красный цвет). Способность бактерий удерживать комплекс генцианвиолета с йодом зависит, главным образом, от строения клеточной стенки, имеющей существенные различия у грамположительных и грамотрицательных бактерий.
|
Фуксин окрашивает тела бактерий в красный цвет, капсулы остаются неокрашенными.
|
Результат: описание микроскопической картины
|
В поле зрения видны стафилококки сине-фиолетового цвета – грамположительные – и расположенные между ними кишечные палочки, имеющие красный цвет, т.е. грамотрицательные.
|
В поле зрения видны бациллы красного цвета, окруженные белыми ореолами капсул, которые хорошо видны на серовато-коричневом тушевом фоне.
|
Рисунок
|
|
|
|
Метод Циля-Нельсона
|
Метод Пешкова
|
Цель применения
|
Для дифференцирования кислотоустойчивых бактерий от некислотоустойчивых, к которым относятся подавляющее число микроорганизмов.
|
Для выявления клеточной стенки
|
Реактивы:
Красящие растворы
|
1. Карболовый фуксон
2. Метиленовый синий
|
1. водный фуксин
|
Протрава
|
Подогревание препарата с краской
|
10% водный раствор танина
|
Дифференцирующее вещество
|
5% H2SO4
|
|
Способ фиксации, состав фиксатора
|
В пламени горелки
|
Жидкость Карнуа (смесь этилового спирта, хлороформа и ледяной уксусной кислоты в соотношении 6:3:1)
|
Этапы окраски
|
Окрасить мазок карболовым фуксином при подогревании (три раза до появления паров – примерно 3 минуты)
Промыть водой
Обесцветить препарат 5% H2SO4
Промыть водой
Докрасить мазок контрастной краской – метиленовым синим (5 минут)
Промыть водой. Высушить.
|
Приготовленный и высушенный препарат из бактериальнйо культуры зафиксировать в жидкости Карнуа в течение 15 минут
Промыть водой
Держать в 10% водном растворе танина 6-8 мин
Промыть и окрасить водным фуксином 30-60 сек
Промыть водой, высушить с помощью фильтровальной бумаги.
|
Сущность метода
|
Кислотоустойчивость зависит от наличия в клеточной стенке липидов, воска и особенно миколовой кислоты. Кислотоустойчивые бактерии требуют интенсивной окраски (конц. фуксином Циля при нагревании), они прочно удерживают краситель, не обесцвечиваются серной кислотой и остаются рубиново-красными. Некислотоустойчивые при дифференцировке серной кислотой обесцвечиваются и докрашиваются метиленовым синим.
|
|
Результат: описание микроскопической картины
|
В поле зрения видны небольшие палочки рубиново-красного цвета (Mycobacterium tuberculosis) и окрасившиеся в дополнительный синий цвет некислотоустойчивые стафилококки.
|
В поле зрения видны крупные стрептобактерии светло-розового цвета, они окаймлены клеточной стенкой красного цвета.
|
Рисунок
|
|
|
|
Метод Романовского-Гимзы
|
Метод Нейссера
|
Метод Ожешке
|
Цель применения
|
Для выявления нуклеоида бактерий.
|
Для выявления цитоплазматических включений валютина
|
Для окраски спор бактерий
|
Реактивы:
Красящие растворы
|
1. краска Романовского-Гимзы (азур, эозин, метиленовый синий)
|
1. уксуснокислая синька
2. везувин
|
1. Карболовый фуксон
2. Метиленовый синий
|
Протрава
|
Кислотный гидролиз в р-ре соляной к-ты при нагревании
|
Р-р Люголя
|
0,5% р-р HCl при нагревании
|
Дифференцирующее вещество
|
|
|
|
Способ фиксации, состав фиксатора
|
Жидкость Карнуа
|
В пламени горелки
|
Не фиксируют
|
Этапы окраски
|
Готовят мазок из чистой культуры бактерий
Фиксируют в жидкости Карнуа
Проводят кислотный гидролиз в р-ре соляной к-ты при нагревании
Мазок окрашивают краской Романовского-Гимзы в течение 40-60 мин
После каждого этапа мазок промывают дист. водой
|
Мазок окрашивают уксусной синькой (1мин)
Промывают водой
Докрашивают везувином 20-30 сек
Промывают водой
|
На нефиксированный мазок 0,5% раствор HCl и подогревают 2 мин.
Промывают, высушивают и фиксируют
Докрашивают по методу Циля – Нильсена
|
Сущность метода
|
Краситель окрашивает ацидофильные компоненты клетки в различные оттенки красного, а базофильные - в цвета от пурпурного до фиолетового.
|
|
Основан на кислотоустойсивости бактерий.
|
Результат: описание микроскопической картины
|
В поле зрения видны бактерии с розовой цитоплазмой, в которой видны один или несколько компактных нуклеоидов красновато-фиолетового цвета, имеющих разную форму (округлую, овальную, палочковидную)
|
В поле зрения видны бактерии, тела которогых светло-коричневого цвета, зёрна валютина, расположенные на обоих концах бактерий, окрашены в сине-чёрный цвет.
|
В поле зрения видны рубиново-красные споры, вегетативные клетки голубого цвета
|
Рисунок
|
|
|
| |
|
|
Скачать 74 Kb.