гр крови. определение группы крови и резус фМГ749.pptx. Определение группы крови и резусфактора
 Скачать 6.83 Mb.
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ И РЕЗУС-ФАКТОРАВыполнила: Мәткәрім Гүлжан ГРУППЫ КРОВИСовременный период в учении о переливании крови начинается с 1901 г. - времени открытия К. Ландштайнером групп крови. Выявив различные изоагглютинационные свойства крови людей, он установил 3 разновидности (группы) крови. Я. Янским в 1907 г. была выделена IV группа крови. В 1940 г. К. Ландштайнер и А.С. Винер открыли резус-фактор (Rh-фактор). КАРЛ ЛАНДШТАЙНЕРАЛЕКСАНДР СОЛОМОНОВИЧ ВИНЕРЯН ЯНСКОЙВ крови человека обнаружено более 500 различных антигенов. Более половины антигенов находятся на поверхности эритроцитов. Имеют клиническое значение 29 Наиболее значимы 14 систем: АВО, Rh-Hr, Kell - Gellano, Daffi, Kidd, Lewis (Льюис), MNSs, Lutheran, Рp, Auberqer, Dieqo, Dombrok, Colton, Scianna, и др Лейкоциты и тромбоциты содержат свои антигены, обладающие тканевой и индивидуальной специфичностью. Наиболее значимые антигены лейкоцитов системы HLA –антигены гистосовместимости. Они имеет большое значение при трансплантации тканей, переливании лейкоцитарной и тромбоцитарной массы. Различие матери и плода по антигенам HLA –системы при повторных беременностях могут привести к выкидышу и гибели плода. Тканевое типированние–иммунологическое исследование определяющее антигены гистосовместимости. Плазменные антигены располагаются на поверхности молекул белков. Их разделяют на 10 групп. Комбинации различных антигенов образуют 1,5 млрд. групп крови. ГРУППЫ КРОВИКроме естественных агглютининов существуют иммунные антитела (IgG)-анти-А и анти-В, которые появляются в результате иммунизации чужеродными агглютиногенами. Взаимодействие иммунных антител с соответствующими антигенами приводит к развитию реакции гемолитического типа. Число естественно иммунизированных людей велико. Иммунные антитела выявлены у 42% доноров В(III), у 44% доноров группы А(II), и 68% у доноров группы (I). Это является особенно актуальным в случае применения крови так называемого «универсального донора». Изосерология – наука изучающая антигенные свойства групп крови. Наиболее сильными и клинически значимыми являются антигены эритроцитов системы АВО и резус-фактора RHoD. Поэтому в клинической практике кровь человека подразделяют по системе АВО на 4 группы: 0(I), А(II), В(III), АВ(IV). И по системе Rh(резус-фактор) на 2 вида: Rh(+)-положительная кровь и Rh(-)-отрицательная кровь. ГРУППЫ КРОВИГруппа крови и резус-принадлежность человека генетически обусловлены, формируются к 3-4 мес. внутриутробного развития и не меняются в течении жизни. В практической медицине термин «группа крови» отражает сочетание эритроцитарных антигенов системы АВ0, резус-фактора и соответствующих антител в сыворотке крови. СИСТЕМА КРОВИ АВ0Систему АВО составляют 3 антигена(агглютиногена)-АВО расположенные на поверхности эритроцитов и 2 антитела (агглютинина)- α и β, расположенные в плазме крови. Наиболее сильными и клинически значимыми являются антигены эритроцитов системы АВО Эритроцитарные антигены это полисахариды, термостабильные, длительное время сохраняются в высушенном состоянии Выделяют 3 агглютиногена(антигена)- А,В.0 Агглютиноген 0 (Н-фактор) является очень слабым антигеном, что даже при многократном введении в организм антител к нему не образуется. Агглютиноген А имеет разновидности: А1, А2, А3 и др. 87% людей II группы крови имеют агглютиноген А1, в 12% -А2 Агглютиноген В также неоднороден. Но антигенная структура его разновидностей очень близка и не имеет большого клинического значения. АНТИТЕЛА (АГГЛЮТИНИНЫ) СИСТЕМЫ АВ0Антитела (агглютинины α и β) –врожденные, постоянные, находятся в плазме крови. Это комплекс аминокислот и углеводов расположенный на поверхности молекул белков плазмы крови. Антитела могут быть приобретёнными, образовываться в организме в ответ на поступление разных антигенов (например, Rh-фактора) - это изоиммунные антитела. Агглютинины разрушаются при Т выше 60С. Естественные антитела являются строго специфичными: Агглютинин α соединяется только с антигеном А. Агглютинин β – только с антигеном В. АНТИГЕНЫ, АНТИТЕЛА СИСТЕМЫ АВОАГГЛЮТИНАЦИЯ ЭРИТРОЦИТОВ И ГЕМОЛИЗ КРОВИВ результате взаимодействия агглютининов с соответствующими агглютининами наступает реакция агглютинации. Взаимодействие антиген-антитело проходит две стадии (фазы). В 1 фазу антитела фиксируются на клетке крови и вызывают склеивание форменных элементов (агглютинация). Во 2 фазу происходит присоединение к антиген-антителу комплимента плазмы и приводит к образованию комплекса антиген-антитело-комплимент, который лизирует мембрану эритроцитов и происходит гемолиз крови. Агглютинация Разрушение эритроцитов Гемолиз крови АГГЛЮТИНАЦИЯ ЭРИТРОЦИТОВАгглютинация-склеивание эритроцитов в виде зерен в результате взаимодействия агглютининов с соответствующими агглютининами наступает реакция. Г ГЕМОЛИЗ-РАЗРУШЕНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ С ВЫХОДОМ ГЕМОГЛОБИНА В ПЛАЗМУ КРОВИ И ОБРАЗОВАНИЕ «ЛАКОВОЙ КРОВИ»ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВОГруппы крови разделяются с учетом наличия в эритроцитах агглютиногенов А и В и в сыворотке крови агглютининов α и β. Одноименные агглютиногены и агглютинины существовать не могут, так как возникает реакция антиген-антитело (агглютинаця) и разрушение эритроцитов. На основании вышесказанного выделяют 4 группы крови: ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВО0(I) ГРУППА КРОВИ0(I) –в эритроцитах нет агглютиногенов, а в сыворотке имеются агглютинины α и β. А(II) ГРУППА КРОВИA(II) – в эритроцитах имеется агглютиноген А, в сыворотке – агглютинин β. B(III) ГРУППА КРОВИB(III) – в эритроцитах имеется агглютиноген В, в сыворотке – агглютинин α. AB(IV) ГРУППА КРОВИAB(IV) – в эритроцитах имеется агглютиногены А и В, в сыворотке агглютининов нет. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВОГрупповая принадлежность крови определяется реакцией агглютинации при помощи: Стандартных изогемагглютинирующих сывороток Стандартных отмытых эритроцитов Моноклональных антител (цоликлонов) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СТАНДАРТНЫМИ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМИ СЫВОРОТКАМИ ПО СИСТЕМЕ АВООСНАЩЕНИЕ1. Два комплекта стандартных изогемагглютинирующих сывороток I(0), II(А), III (В) групп двух различных серий и 1 флакон сыворотки IV(АВ). 2. Эритроциты исследуемого, не более двухдневного срока хранения при температуре +2-8°С. 3. Флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой. 4. Чистая, сухая, со смачиваемой поверхностью тарелка или планшетка с разметкой. 5. Предметные стекла, стеклянные или пластмассовые палочки для смешивания. 6. Стерильные марлевые шарики, спирт. 7. Часы(песочные часы). 8. Маркер. 9. Перчатки. СТАНДАРТНЫЕ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИЕ СЫВОРОТКИСтандартные сыворотки выпускаются с определенной цветной маркировкой: 0(I) - бесцветная, A(II) - голубая, B(III) - красная, AB(IV) - желтая. Сыворотки хранят при температуре +4- +10 ° С. Для определения группы крови с применением стандартных изоггемаглютинирующих сывороток используют эритроциты крови исследуемого, не более двухдневного срока хранения при температуре +2- +8°С. Для этого требуется взять 3 – 5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизатора и отстоять сыворотку 1,5 – 2 часа или центрифугировать. ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ1. Определение проводят в помещении с хорошим освещением, при температуре от 15 до 25 ° С. 2. В соответствующий квадрат тарелки наносят крупную каплю сыворотки(0,1 мл) двух серий I(0), II (А), III (В) групп. ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ3. Рядом, с каплей сыворотки наносят каплю крови величиной в 10 раз меньшую (0,01 мл), чем капля сыворотки. ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ4. Перемешивание капель крови с сывороткой производят отдельными для каждой капли стеклянными палочками или уголками предметных стекол. ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ5. Пластинку периодически покачивают, наблюдая за ходом реакции в течение 5 мин. ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ6. Через 3 мин добавляют 1 каплю изотонического раствора хлорида натрия в каждую ячейку, где наступила агглютинация. 7. Окончательная оценка результатов проводится через 5мин. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВПри положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зёрнышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зёрен. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ1.Если агглютинация отсутствует во всех лунках – исследуемая кровь относится к 0(1) группе. Она не содержит ни А- ни В-антигенов. 2. При агглютинации с сыворотками I и III групп – исследуемая кровь А(II) группы. 3. При агглютинации с сыворотками I и II групп – исследуемая кровь В(III) группы. 4. При агглютинации со всеми 3-я стандартными сыворотками нужно провести еще реакцию со стандартной сывороткой АВ(IV) группы (Для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов). И только при отсутствии агглютинации в этой пробе группу крови считается АВ(IV). ВОЗМОЖНЫ СЛЕДУЮЩИЕ ЧЕТЫРЕ КОМБИНАЦИИ РЕАКЦИЙ АГГЛЮТИНАЦИИ СО СТАНДАРТНЫМИ СЫВОРОТКАМИ 0(I), A(II), B(III), AB(IV) ГРУПП.Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) – отсутствие агглютинации
У доноров забирается кровь трех групп — 0(I), А(II), В(III). Забранную кровь отмывают, центрифугируют для разделения на фракции: плазму и эритроциты. Плазму удаляют, а к эритроцитам добавляют физиологический раствор и смешивают. Затем кровь вновь центрифугируют и удаляют жидкую часть. К оставшимся эритроцитам повторно добавляют физиологический раствор. Отмывание эритроцитов производят трижды. После окончания приготовления стандартных эритроцитов к ним добавляют консервант и хранят в холодильнике при температуре от +6° до +8 °С в течение 2 месяцев, титр их не должен быть ниже 1:32. ОСНАЩЕНИЕ1. Стандартные эритроциты: 0(I), А (II), B(III) групп. 2. Сыворотка исследуемого не более двухдневного срока хранения при температуре +2-8°С 3. Флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой 4. Чистая, сухая, со смачиваемой поверхностью тарелка или планшетка с разметкой 5. Предметные стекла, стеклянные или пластмассовые палочки для смешивания 6. Стерильные марлевые шарики, спирт 7. Часы(песочные часы) 8. Маркер 9. Перчатки ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ3 – 5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизатора отстоять сыворотку 1,5 – 2 часа или центрифугировать. Промаркировать лунки планшета: 0(I), A(II), B(III). Разместить по 1 большой капле (0,1 мл) сыворотки в лунки. Добавить в лунки по 1 маленькой капле стандартных эритроцитов групп 0, A, B. Чистыми палочками перемешать сыворотку и эритроциты. Покачивать планшет на протяжении 3 минут. Добавляют по 1 капле изотонического раствора натрия хлорида. Результат оценивается через 5 мин. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ1. Агглютинация отсутствует с эритроцитами 0(I) группы и определяется с эритроцитами A(II) и B(III) групп - исследуемая кровь 0 (I) группы. 2. Агглютинация отсутствует с эритроцитами 0(I) и A(II) групп и определяется с эритроцитами B(III) группы - исследуемая кровь A(II) группы. 3. Агглютинация отсутствует с эритроцитами 0(I) и B(III) групп и определяется с эритроцитами A(II) группы - исследуемая кровь B(III) группы. 4. Агглютинация отсутствует с эритроцитами 0(I), A(II), B(III) групп - исследуемая кровь AB(IV) группы. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ АВ0 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВПримечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) – отсутствие агглютинации
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ЦОЛИКЛОНАМИ АНТИ-А, АНТИ-В И АНТИ-АВ ПО СИСТЕМЕ AB0Определение группы крови цоликлонами анти-А, анти-В является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела: цоликлон анти-А цоликлон анти-В цоликлон анти-АВ Цоликлоны представляют собой разведённую асцитическую жидкость мышей-носителей гибридомы, содержащую IgM против антигенов А и В. Цоликлоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВ0-сыворотки ЦОЛИКЛОНЫ (МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА)Продуцируются мышиными гибридомами, которые образуются путем слияния клетки опухоли костного мозга мыши с её же иммунным лимфоцитом синтезируюшим специфические антитела анти-А, анти-В и др. Внутрибрюшная опухоль быстро растет и продуцирует жидкость с анти-А или анти-В антителами Хранят в холодильнике при температуре 2-8 °С. Срок хранения 2 года Анти-А Анти-В Анти-АВ ОСНАЩЕНИЕ1. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ. 2. Эритроциты исследуемой крови, не более двухдневного срока хранения при температуре +2-8°С. 3. Флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой. 4. Чистая, сухая, со смачиваемой поверхностью тарелка или планшетка с разметкой. 5. Предметные стекла, стеклянные или пластмассовые палочки для смешивания. 6. Стерильные марлевые шарики, спирт. 7. Часы(песочные часы). 8. Маркер. 9. Перчатки. ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ ЦОЛИКЛОНАМИ ПО СИСТЕМЕ АВООпределяют группу крови при температуре от +15 до +25 °С. Определяют пригодность цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ к работе и сроки годности. Карандашом делят планшетку на три сектора с обозначением их «анти-А», «анти-В» и «анти-АВ». По краю тарелки подписывают. фамилию и инициалы лица, которому определяется группа крови. На маркированную пластину или тарелку наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ (0,1мл). Рядом наносят каплю исследуемой крови(эритроцитов) в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками. Пластинку слегка покачивают и наблюдают за реакцией. Результат оценивают через 3 мин. Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) – отсутствие агглютинации
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АВ (IV) ГРУППЫ КРОВИ АВ0 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВПри наличии агглютинации со всеми тремя реагентами необходимо исключить неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого к капле эритроцитов вместо цоликлонов добавляют каплю физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ЦОЛИКЛОНАМИ ПО СИСТЕМЕ АВОРЕЗУС-ФАКТОР КРОВИ. РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ.Наиболее сильными и клинически значимыми являются не только антигены эритроцитов системы АВО но и резус-фактор RHoD. Поэтому в клинической практике кровь человека подразделяют так же на Rh-положительных и Rh-отрицательных. Резус-фактор – это антиген(белок)D который находится на поверхности эритроцитов Люди, у которых есть D-антиген –резус-положительные( Rh+)– 85% людей. Люди у которых нет этого антигена – резус-отрицательные (Rh) -15% людей ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ПРИ ПОМОЩИ ЦОЛИКЛОНА АНТИ-D СУПЕРНа плоскость наносим 1 большую каплю (0,1мл) цоликлона Анти-D Супер. Рядом наносим 1 маленькую каплю исследуемых эритроцитов. Соотношение 1:10. Тщательно смешиваем цоликлон с эритроцитами стеклянной палочкой. Результат оцениваем через 3 мин. При наличии агглютинации исследуемая кровь – резус-положительная (Rh+) При отсутствии агглютинации исследуемая кровь – резус-отрицательная (Rh-). резус-положительная (Rh+) кровь резус-отрицательная (Rh-) кровь ОСНОВНЫЕ ПРИЧИНЫ ОШИБОКПлохая подготовка рабочего места: слабая освещенность, температура помещения < 15С или >25С Применение нестандартных пластин с низко смачиваемой поверхностью Недостаточное количество палочек, реагентов Небрежность в выполнении работы: отсутствие маркировки и нарушение порядка нанесения стандартных сывороток, эритроцитов, цоликлонов смешивание реагентов одной палочкой нарушение пропорции реагент\кровь недобавление физ.р-ра 5. Нарушение условий хранения реагентов 6. Использование реагентов с истекшим сроком хранения Гелевая технология определения групп крови Определяет и агглютиногены и агглютинины крови, основана на агглютинации и гель–фильтрации Пластиковые диагностические карточки Микропробирки с нейтральным полиакриламидным гелем или гелем со специфической или антиглобулиновой сывороткой в структурной матрице геля Гелевая технология определения групп крови Исследуемые эритроциты или стандартные эритроциты и исследуемая сыворотка (плазма) микропробирки происходит реакция агглютинации Карточки центрифугируются Гелевая технология определения групп крови При центрифугировании осуществляется разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов Гелевая технология определения групп крови При отсутствии агглютинации неагглютинированные эритроциты свободно проходят между частицами геля, образуя осадок на дне микропробирок ID – карты. Гелевая технология определения групп крови Агглютинированные эритроциты задерживаются на поверхности геля или в его толще. Расположение агглютинатов в геле определяется силой агглютинации, и положительный результат может быть оценен от +1 до +4. Гелевая технология определения групп крови Гелевая технология определения групп крови Учет результата Внешний вид диагностических карт Гелевая технология позволяет осуществить ABO/Rh типирование эритроцитов; типирование антигенов эрироцитов других систем; скрининг и идентификацию антител (прямая и непрямая реакция Кумбса); спектр реакций на совместимость крови донора и реципиента, диагностика посттрансфузионных осложнений и др. |