БИОХИМИЯ ПРАКТИКА 204 ОМФ СУПЕР. 1АмилазакрахмалН2О фиолетовой 2Амилазакрахмал NaCl желтой
 Скачать 0.72 Mb.
|
 1-практикалық жұмыс Қортынды: Фермент белгілі субстратты тану, байланыстыру және катализін қамтамасыз етуге қабілетті... 1-Амилаза+крахмал+Н2О---- фиолетовой 2-Амилаза+крахмал+ NaCl---желтой 3-Амилаза+Крахмал+CuSO4---темно-синий NaCl-сілекей амилазасының активаторы.Тамақ қортуға белсене қатысады CuSO4---Сілекей амилазасының ингибиторы. Мыс ионының аминқышқылдарының радикалы цистейнмен ковалентті байланыс құрып қайтымсыз фермент денатурациясына ұшыратады. Клиника: ---Тамак ішу режимінің бұзылуы ---Сілекей безінің қабыну арулары ---Ұйқы безінің қабыну аурулары «Панкреатит» ауруларында фермент белсенділігі өзгереді. 2-практикалық жұмыс Зәрде амилазабелсенділігінанықтау КептірілгенПетри тостағанға, алдын ала әртүрліжерге 0,1 % йодтіңерітіндісіңтамшылапкүяды (8-10 тамшы ). Пробиркаға 2 мл 0,1 % крахмалдіңерітіндісін( крахмал - 2 мг) , 1 мл 0,85% натрий хлоридтіңерітіндісінкүюып су моншаға (37 С) екіминутқақояды. Екіминуттанкейін, пробирканы су моншаданалмай 0,5 мл зәрқосыпаралыстырады. Реакция басталуыныңуақытындәлелдейді. Соданкейін 2-3 минут сайын пипетка немесешынытаяқшаменпробиркаданбіртамшыны Петри тостағандағы йод ерітіндісініңтамшысынақосады ( сарытүспайдаболғаншақайталандырады), яғнисарытүспайдаболғанша (уақытындәлелдейді, мин.). Амилаза белсенділігітөмендекөрсетілген формула бойыншаесептелінеді. 15 Х ед = ---------------- Т 0,5 х – 1 мл зәрдегіамилазаныңбелсенділігі, 15 – 2 мг крахмалдітолықыдыратуүшінқажеттіуақыт , 0,5 - реакциондіқоспағаалынғанзәрдіңмөлшері , Т мл - реакцияныңуақыты мин. Амилазаныңқалыптыбелсенділігі 1-2 субб. 15 Нәтиже: Х ед------=15 суббірлік Т=2 мин. Норма 1-2 суббірлік. 15 суббірлік>1-2суббірлік 2*0,5 2.Қорытынды: Сары түстің пайда болуы крахмалдың глюкозаға ыдырағандығын көрсетеді.Егер крахмал көк түске боялса реакция толық жүрмейтінін көрсетеді. Зерттелген зәрде амилаза белсенділігі нормадан жоғары. 3. Клинико-диагностикалық маңызы Зәрмен бірге негізінен панкреатикалық амилаза бөлінеді. Зәрдегі амилаза белсенділігі жедел панкреатит, ұйқы безі кистасы, инфекциялық паротит, перитонит кезінде жоғарылап кетеді. Жедел панкреатит кезінде макс.шама 12-24 сағ кейін 10-30 есе жоғарылайды. 2-6 күнде қалпына келеді. 3-практикалық жұмыс Қан сарысуындағы жалпы белокты рефрактометрлік әдіспен анықтау. Жұмыстың барысы: Сілтілі ортада ақуыздар мен пептидтер мыстың ионадары мен комплекс түзеді. Оның түсінін қарқындылығы үлгідегі жалпы ақуыздың мөлшеріне тура пропорциональді. Өлшеу фотометриялық арқылы іске асырылады.
Липимиялық сары суда анықтау
Есептеу: Сары судың жалпы ақуыздары А1 Жалпы ақуыз г/л = ____ х С стандарты А2 Нәтиже: Рефрактометриялық тәсіл - 10%. Белоктың мөлшерінің ересек адамдар үшін нормасы 65 – 85 г/л. 85--100% x= 8,5г/л х--10% 8,5г/л +85= 93,5г/л Қорытынды: Зерттелген қан сарысуында жалпы белок мөлшері 93,5г/л. Нормадан жоғары гиперпротеинемия. Белок алмасуының бұзылысы. Медициналық маңызы: Гиперпротеинемия тамырішілік сұйықтықты жоғалтқанда, дегидротация, ауыр травма, көлемді күйік, холера кезінде жүреді. Сонымен қатар жедел инфекциялар барысында жедел фазалы белоктардың синтезінің, ал созылмалы инфекциялар кезінде имунноглобулиннің көбеюінен болады. Белсенді физикалық жұмыс кезінде белок мөлшері 10% -ға артады. Вальденштрем ауруы, миеломды ауру, лимфогрануломатоз,саркоидоз кезінде гиперпротеинемия байқалады. Гипопротеинемия тамырішілік сұйықтықтың мөлшері артқанда, бүйрек жеткіліксіздігі, тұз ерітінділерінің адекватсыз инфузиясы кезінде, ақуыздың ағзаға желкіліксіз түсуі кезінде, созылмалы қабынулар кезіндегі белок биосинтезінің төмендеуі, кейбір белоктардың қажетті мөлшерде синтезделмеуі, кахексия кезінде байқалады. Гиперурекемия құрамында пуриннің мөлшері көп , жоғары калориялық , құрамы фруктозаға бай тамақпен қоректенгенде және бүйрек ауруларында зәр қышқылының синтезінің күшеюінен пайда болады. 4-практикалық жұмыс Холестеринге түсті реакциялар А. Реакция Шиффа. Ход работы. В пробирку наливают 10 капель 0,3 % хлороформного раствора холестерина и осторожно по стенке пробирки подслаивают 10 капель концентрированной серной кислоты. Через 3-4 минуты на границе двух слоев жидкости появляется кольцо красного цвета. Нәтиже : Күкірт қышқылының әсерінен қызыл түсті сақина түзіледі. Қорытынды: Күкірт қышқылының әсерінен холестериннің дегидротациясы жүреді.Холестерин Н2SО4 –тің екі молекуласымен реакцияға түскенде қызыл түске боялады. Б. Реакция Сальковского Ход работы.В пробирку наливают 10 капель 0,3 % хлороформного раствора холестерина, прибавляют 10 капель концентрированной серной кислоты и осторожно встряхивают. Жидкость разделяется на два слоя: верхний – хлороформный слой, окрашенный в вишнево-красный цвет, и нижний (серная кислота) – окрашенный в желтый цвет. (Реакции Шиффера и Сальковского можно проделать в одной пробирке.После проведения пробы Шиффера жидкость следует осторожно встряхнуть). Қорытынды: Холестерин холестериленге айналады. В. Реакция Либермана-Бурхарда. Ход работы. В пробирку наливают 10 капель 0,3 % хлороформного раствора холестерина, добавляют 3 капли уксусного ангидрида и 1 каплю концентрированной серной кислоты. После встряхивания пробирки цвет жидкости через красно-фиолетовый и синий переходит в красивый зеленый. Химизм реакций. Описанные реакции имеют почти одинаковый химизм. Под действием серной кислоты происходит дегидратация холестерина, в результате которой две молекулы холестерина теряют две молекулы воды и, соединяясь между собой по третьему атому углерода, образуют вещество, соответствующее суммарной формуле С54Н88. При реакции с двумя молекулами серной кислоты из этих веществ возникают окрашенные в красный цвет соединения. В присутствии же уксусного ангидрида образуется вещество зеленого цвета, содержащее один остаток серной кислоты. Қорытынды: Бұл реакция көмегімен оттегі, холестериннің мөлшерін анықтадық.Стероидқа сапалық реакция. Г. Реакция с хлорным железом. Ход работы. В пробирку наливают 3 капли 0,3 % хлороформного раствора холестерина, 10 капель 0,05% раствора хлорного железа в ледяной уксусной кислоте и 15 капель концентрированной серной кислоты. После взбалтывания постепенно появляется красно-фиолетовое окрашивание. Химизм.При реакции холестерина с хлорным железом образуется комплексное соединение, имеющее красно-фиолетовую окраску. Қорытынды: Күкірт қышқылының әсерінен холестериннің дегидротациясы жүреді.Холестерин Н2SО4 –тің екі молекуласымен реакцияға түскенде қызыл түске боялады. Медико-клиникалық маңызы. Холестеринге түсті реакцияларды- колориметриялық әдістердің негізіне жатқызуға болады.Бұл қандағы холестерин мөлшерін анықтауға мүмкіндік береді. Қандағы холестериннің қалыпты мөлшері 3,9-6,5 ммоль/л.Жас ерекшеліктеріне байланысты әр түрлі көрсеткішке ие.Мысалы:
Холестериннің қандағы мөлшері артып кетсе: өт-тас ауруы, жүрек қан айналым жүйесінің аурулары,бауыр мен бүйрек бұзылыстары,гиперпротеинемия II тип, қалқанша безінің ісігі пайда болуы мүмкін. Холестериннің қандағы мөлшері төмендеп кетсе: бауыр циррозы,гипертиреоз,бауырдың қатерлі ісігі дамуы мүмкін. 5-практикалық жұмыс Алынған нәтиже: 1)Лецитинді ацетонмен реакцияға түсіру. Ацетонда лецитин тұнбаға түсіп,лайланады.Ақ эмульсия түзіледі. Себебі: лецитин күрделі фосфолипид тобы. 2)Кадмий хлоридімен реакция. Ақ тұнба түзіледі. Ерімейтін қадмиймен лецитиннің қосылысы түзіледі. 3)Лецитин эмульсиясын алу. Ақ эмульсияның түзілуі спиртті еріткіш тамызғаннан болады.Лецитиннің мықты эмульсиясы алынады Қорытынды және Медициналық интерпретация: Исследование околоплодных вод для определения степени зрелости плодаДля определения степени зрелости плода проводят цитологическое исследование околоплодных вод. Для получения и исследования осадка околоплодные воды центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, мазки фиксируют смесью эфира и спирта, затем окрашивают по методу Гарраса-Шора, или, чаще, 0,1 % раствором сульфатанильского синего, при этом безъядерные липидсодержащие клетки (продукт сальных желез кожи плода) становятся оранжевого цвета (так называемые оранжевые клетки). Процентное содержание в мазке "оранжевых клеток" соответствует зрелости плода: до 38 нед беременности их количество не превышает 10 %, свыше 38 нед - достигает 50%. Для оценки зрелости легких плода определяют концентрацию фосфолипидов в около плодных водах, в первую очередь соотношения лецитин/сфингомиелин (Л/С). Лецитин, насыщенный фосфатидилхолин, является главным действующим началом сурфактанта. Интерпретация величины соотношения Л/С должна быть следующей:
Практическое применение нашел метод качественной оценки соотношения лецитина и сфингомиелина (пенный тест). С этой целью в пробирку с 1 мл околоплодных вод добавляют 3 мл этилового спирта и в течение 3 мин встряхивают пробирку. Образовавшееся кольцо из пены свидетельствует о зрелости плода (положительный тест), отсутствие пены (отрицательный тест) указывает на незре 6-практикалық жұмыс Асқазан сөлінен сүт қышқылын табу (Верболович 268) Жұмыс барысы: Пробиркаға Уффельман реактивінен 10-15 тамшы және бірдей көлемде дистилденген су аламыз, оның үстіне 3-5 тамшы асқазан сөлінің ерітіндісін құямыз. Егер ерітіндіде сүт қышқылы бар болса Уффельман реактиві күлгін түстен жасыл сары түске ауысады. Жұмысты интерпретациялау: Уффельман реактиві күлгін түстен жасыл сары түске ауысты. Жұмыстың қорытындысы: Ерітіндіде сүт қышқылы бар,себебі реактив жасыл сары түске ауысты. Клинико-диагностикалық мәні: Асқазан сөлінен сүт қышқылын табу Уффельман реакциясы арқылы жүргізіледі. Сүт қышқылының (немесе лактаттың) қалыпты мөлшері 0,1-0,6ммоль г/л. Егер асқазан сөлінде лактаттың мөлшері қалыптыдан көп болса, онда ол рактың барлығын білдіреді. Лактат – глюкозаның анаэробты дихотомиялық жолмен ыдырағанда түзілетін соңғы өнімі. Лактаттың көп болып кетуі бауыр зақымданған кезде болады.Себебі лактатты қорытып, ағзадағы қалыпты мөлшерін реттеп отыратын мүше ол- бауыр. 7-практикалық жұмыс #7 тәжірибелік жұмыс. Сиал қышқылдарын анықтау 7.1 Күкіртсіркеқышқылдық реактив Нәтижесі: Реакция нәтижесі оң (+) Қорытынды: Сиал қыщқылы нейрамин қышқылының туындылары, гликопротеид құрамына кіреді. Сиал қышқылының күкірт және сірке қышқылының қоспасымен әрекеттесуі нәтижесінде қоңыр-қызғылт түсті комплексті қосылыс пайда болады. 7.2 Дифениламинмен реакция Нәтижесі: Көк-күлгін түсті қоспа түзілді. Қорытынды: Көкшіл түс пробиркадағы реактивтер құрамында қышқылдың бар екендігін көрсетеді. Медициналық мәні: Дәнекер тіні зақымданған кезде коллаген және глюкопротеидтер бұзылады. Қанның құрамында осы кезде түрлі глюкозамингликандар және олардың құрамына кіретін сиал қышқылы жинақталады. Сондықтан қан сарысуында сиал қышқылы көлемі дәнекер тініндегі қабыну диструктивті процесінің ауырлығының дәрежесін көрсетеді. Негізінен сиал қышқылы құрамына қарап, ревматикалық процестің белсенділік дәрежесі туралы анықтайды. 8-практикалық жұмыс 8. Исследование действия панкреатической липазы и влияние желчи на переваривание жиров. При присутствии желчи идет лучше гидролиз жиров, т.к. происходит эмульгирование, что улучшает гидролиз чем без желчи, и желчные кислоты вызывают активацию липотических ферментов. КАТАЛИЗИРУТ ГИДРОЛИЗ ТРИАЦИЛГЛИЦЕРИДОВ НА ГЛИЦЕРИН. По количеству образовавшихся жирных кислот можно судить об активности липазы. Панкреатическая липаза является маркером воспаления поджелудочной железы. 9-практикалық жұмыс 9. Зәрде ацетонды ашу. Жұмыс барысы: К 2 мл мочи добавляют 3-4 капли раствора нитропруссида натрия и 2-3 капли раствора гидроксида натрия. Появляется красно-бурое окрашивание. При подкислении концентр уксусной кислотой окрашивание становится ярко-красным,переходящее в вишневое. Нәтижесі:Ерітінді ал қызыл түске боялады. Сірке қышқылымен қышқылдандырғаннан кейін қызыл түске, кейін шие қызыл түсті сұйықтық пайда болды. Қорытынды: Қалыпты жағдайда зәрде кетон денелері болмайды.Зерттелген зәрде кетон денелері анықталды. Бұл көмірсу мен май алмасуының бұзылысынан пайда болады. Клиника: Қалыпты жағдайда қандағы кетон денелерінің мөлшері 0,1-0,6 ммоль/л. Егер деңгейі артса гиперкетонемия п.б. Ол қант диабеті кезінде ж/е ұзақ уақыт ашығудан байқалады. Бұл кезде май қышқылдары қарқынды тотығады. Қант диабеті кезінде тәулігіне 50г ацетон бөлінеді. Кетон денелерінің зәрде пайда болуын кетонурия деп атайды. Қалыпты жағдайда зәрде кетон денелері болмайды. Асқынған кенонемия метаболитикалық ацидозға әкеледі. Ацидоз дегеніміз- қанда кетондық денелер, яғни ацетон,ацетосірке қышқылы, бетта гидрокси май қышқылы жинақталады.Бұл күйдің кейінгі кезін кетоз деп атайды. Кетоз кезінде қанның қышқылдығы артады. Тыныстану кезінде бөліп шығарылатын газда ацетон иісі болады. 10-практикалық жұмыс 10. Качественная реакция на индикан. Индикан представляет собой калиевую или натриевую соль индоксил серной кислоты, образующейся в печени при обезвреживании индола. Индол образуется в кишечнике из триптофана при гниении белков. Увеличение выделения индоксил-серной кислоты отмечается при усилении процессов гниения белков в кишечнике, запорах, кишечной непроходимости, при наличии в организме воспалительных реакции. В моче здорового человека 5-25 мкг 11-практикалық жұмыс Асқазан сөлінің қышқылдығын анықтау (Тапбергенов 83-жұмыс) Жұмыс барысы: В колбу отмеривают 5 мл профильтрованного желудочного сока, приьавляют 2 капли 0,5%спиртового раствора парадиметиламинобензола и 3 капли 1%спиртового раствора фенолфталеина, после чего жидкость титруют из бюретки 0,1н раствором едкого натра. Затем Отмечают количество мл раствора щелочи, пошедшего для получения следующих окрасок жидкости: 1. От красного до красновато-оранжевого цвета (Объем А) 2. От первоначального красного до лимонно-желтого цвета (Объем В) 3. От первоначального красного до розового цвета (Объем С) Объем А представляет собой количество мл 0,1н раствора едкого натра, израсходованного на нейтрализациюсвободной НСl в 5 мл желудочного сока6 а объем Ах20 – соответствует свободной НCl в 100 мл желудочного сока. Объем С представляет собой количество мл 0,1н раствора едкого натра, израсходованного на нейтрализацию всех кислореагирующих веществ в 5 мл желудочного сока, а объем Сх20 – общую кислотность желудочного сока. (В+С) /2 показывает общее количество НСl в 5 мл желудочного сока, ((В+С) /2) х20 - количество связанной НСl в 100 мл желудочного сока. Жұмыстың интерпретациясы: Объем А-да қызылдан қызғылт-сары түске, Объем В-да қызылдан лимон-сары түске, Объем С-да қызылдан ашық қызыл түске ауысты. Жұмыстың қортындысы: ЕСКЕРТУ: бұл жұмыстың қорытындысы сол жерде жасалған жұмыстағы А,В,С көлемдерінің шыққан мәндеріне байланысты болады. 5 мл асқазан сөлін титрлеген кезде: А көлем = 1,75 мл В көлем = 2 мл С көлем =2,5 мл Бұдан жалпы қышқылдық Сх20=2,5х20=50; 50-норма Бос қышқылдық Ах20=1,75х20=35; 35-норма Байланысқан қышқылдық ((В+С) /2) -А)х20=((2мл+2,5мл) /2)-1,75мл)х20=((4,5мл) /2)-1,75мл)х20=(2,25мл -1,75мл)х20=0,5мл х 20=10мл; 10-норма Асқазан сөлінің қышқылдығы қалыпты. Клинико-диагностикалық маңызы: Асқазанда тағам химиялық өңдеуден өтеді, ал ол үшін асқазан құрамы күрделі сөл шығарады. Қалыпты жағдайда асқазан тәулігіне 2 литр сөл шығарады. Асқазанның көп сөл бөлуін гиперсекреция, аз сөл бөлуін гипосекреция деп атайды. Асқазан сөлінің қышқылдығы жоғарыласа ол- гиперацидтік жағдай немесе гиперхлоргидрия, ал қышқылдығының азайса гипоацидтік жағдай немесе гипохлоргидрия болады. Бос тұз қышқылдың толық болмауын анацидтік жағдай немесе ахлоргидрия деп атайды. Асқазанның қышқылдығы- асқазан сөлінің функционалдық белсенділігінің көрсеткіштерінің бірі.Қышқылдық бірлік ретінде 100мл асқазан сөлін бейтараптау үшін жұмсалатын NaOH 0,1мл ерітіндісінің мөлшері алынады. Асқазан сөлін NaOH 0,1м ерітіндісімен титрлеу арқылы анықталады. Секреция жағдайында қышқылдық бірліктің 3 константасы көрсетіледі: Жалпы қышқылдық 40-60 қыш.бірлік Бос қышқылдық 20-40 қыш.бірлік Байланысқан қышқылдық 10-12 қыш.бірлік Осы константалардың қышқылдығының өзгеруі белгілі бір патологияға алып келеді. 12-практикалық жұмыс Фенилпирожүзім қышқылына Фелинг сынамасы. Сипаттама. Жұмыс барысы: Фильтрленген зәрге 8-10 тамшы FeCl3 10% ерітіндісін қосады. Егерде зәрде фенилпирожүзім қышқылы болса 30-60 минуттан кейін жасыл көк түс п.б. Нәтижесі: Зәрдің түсі жасыл көк түс п.б. 30-60 минуттан кейін ақшылданды. Қорытынды: Фенилпирожүзім қышқылының мөлшеріне байланысты ерітінді ақшылданды. Клиника: Балалардың бауырында 4-фенилаланингидроксилазаның туа біткен жетіспеушілігінен фенилаланин гидроксілденбейді ж/е тирозинге айналмайды. Фенилаланиннің және оның аномальді ыдырау өнімдерінің жиналуы майдың қалыпты дамуының бұзылысына әкеледі. Сонымен қатар баланың психикасында күрделі бұзылыстар п.б. Бұл аурудың белгісі қанда фенилаланин мөлшерінің жоғарылауы және зәрде фенилпирожүзім қышқылының анықталуы. 13-практикалық жұмыс Практический навык №13. Обнаружение гомогентизиновой кислоты. Вывод: При положительной реакции возникает сине-фиолетовое окрашивание ( при отриц. Не возникает). Кетокислоты в большом количестве выделяются с мочой при нарушении различных обменных процессов, в частности цикла Кребса. Клинико-диагностическое значение: При на рушении обмена тирозина, в результате дефекта фермента оксидазы гомогентизиновой кислоты, наблюдается накопление гомогентизиновой кислоты, при ее соединении с кислородом образуется-алкаптон, он откладывается в коже, окрашивая ее в темно-желтый цвет, в хрящах и сухожилиях, вызывая деформацию суставов. Заболевание носит название-алкаптонурия. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||