Главная страница

Лекция 5 МБД. 1. Enterobacteriacea Грам() палочки разнообразной морфологии Факультативные анаэробы Кат(), оксидаза ()


Скачать 1.86 Mb.
Название1. Enterobacteriacea Грам() палочки разнообразной морфологии Факультативные анаэробы Кат(), оксидаза ()
Дата05.04.2018
Размер1.86 Mb.
Формат файлаpptx
Имя файлаЛекция 5 МБД.pptx
ТипДокументы
#40352


Диагностическая микробиология и вирусология

Смеянов Владимир Владиславович, кмн

vvsmeianov@gmail.com

1. Enterobacteriacea


Грам(-) палочки разнообразной морфологии


Факультативные анаэробы


Кат(+), оксидаза (-)


Многие присутствуют в нормальной микробиоте


Среды: Эндо, МакКонки: lac(+) или lac (-), Плоскирева


Ферментация глюкозы, продукция H2S и индол


Многие подвижны


Биохимическая идентификация: API20E


Серологическая идентификация:



О-, Н- и К-антигены

Молекулярные методы





Энтеробактерии - возбудители гнойно-воспалительных заболеваний (колиформные)



МБД энтеробактерий


Этап 1: Мазок по Граму


Посев на среды: Эндо или МакКонки (лактоза - дифференциация на лактозопозитивные – E.coli, комменсал ЖКТ; и лактозонегативные – возбудители кишечных инфекций)


Агар Плоскирева или сальмонелла-шигелла (SS-) агар, висмут-сульфит агар (H2S) – для сальмонелл – эти среды содержат соли желчных кислот, подавляющих рост E.coli





МБД энтеробактерий



Оксидазный тест



Индольный тест – наличие триптофаназы

Определение индола:

p-диметил-циннам-альдегид - синяя окраска


Реагент Ковача : пара-диметил-амино-бензальдегид (+изоамиловый спирт+HCl) – красная окраска





МБД энтеробактерий


Этап 2: Макро- и микроскопическое изучение колоний на Эндо и др.


Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с поливалентной сывороткой (ОКА-коли, сальмонеллезной, дизентерийной - шигеллы).


Материал из колонии, давшей положительную реакцию отсевают на свежий агар или дифференциально-диагностические среды, например, Клиглера





МБД энтеробактерий - этапы

3 этап : Идентификация выделенной чистой культуры по совокупности свойств: морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных, токсигенных, чувствительности к антибиотикам и фагам

а) биохимическая идентификация на системах API 20e

б) серотипирование в реакциях агглютинации на стекле с групповыми и типовыми сыворотками

в) фаготипирование – определение спектра чувствительности к типовым бактериофагам (с эпидемиологической целью)

г) определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом

2. Escherichia coli

Основная ниша – толстый кишечник; могут иметь пищевое/зоонозное происхождение (птица)


Инфекции мочевыводящих путей (цистит, гломерулонефрит)-UPEC, хирургические инфекции (нагноения), сепсис (особенно при иммунодефицитах), менингит (новорожденные)-NMEC, пневмонии

Типичные (нормальные) E.coli - lac(+); некоторые штаммы («метаболически неактивные»)-lac(-) – дифференциация с Shigella


Не продуцируют H2S (-) (Salmonella – продуцируют!) среды Клиглера


Продуцируют индол (+)


Метиловый красный (+) (детекция смешанного типа брожения)


API20E


Специфические факторы патогенности: адгезины, гемолизины,цитотоксины, капсула


Серологически UPEC: O1, O2, O4, O6…


Серологически NMEC: O18:K1:H7; O1:K1:H7…





Escherichia coli





3. Salmonella


S. typhimurium: внутрибольничные инфекции (гастроэнтерит) и сепсис


Длительный инкубационный период


Распространение: контакт с больным, воздушно-капельный, пища


Посев (кровь, моча, фекалии) – обогащение на желчном бульоне, затем:


Эндо : Lac (-)


Агар Плоскирева: рост


Висмут-сульфит агар, Клиглера: H2S (+)


Индол: (-)


API20E


Детекция и типирование: агглютинации на стекле с поливалентной сывороткой; реакция латекс-агглютинации; иммунохроматографии; РИФ


Серология: РНГА, иммуноферментный анализ


ДНК-диагностика: ПЦР





4. Klebsiella


K. pneumoniae: ниша – жкт


Хирургические инфекции (абцесс печени), сепсис, цистит, пиелонефрит, менингит, пневмонии (некротизирующая, быстрое начало,правая верхняя доля, каверны, быстрое распространение на другое легкое), риносклерома, риниты, гайморит

Эндо: lac (+) (большинство)


Индол (-)


VP (+) (ацетоин, бутандиоловый тип брожения)


Метиловый красный (-) (детекция смешанного типа брожения - кислоты)


API20E


Детекция: РСК с О-антигеном; типирование – РА с К-антисыворотками; ПЦР на 16S rRNA гены





5.Proteus


Proteus mirabilis: ниша – жкт, мпс женщин


Инфекции мпс, хирургические инфекции (перитонит), сепсис


Посев (кровь, моча, фекалии) – обогащение на желчном бульоне, затем:


Эндо : lac (-)


Агар Плоскирева: рост , желт.-розовые колонии


«Роящаяся подвижность» на агаре


Метиленовый красный (+)


Уреаза (+)


Желатиназа (+)


API20E





6. Serratia


Serratia marcescens: ниша – жкт, окруж. среда – поверхности трудно поддаются дезинфекции (биофильм)


Хирургические, внутрибольничные инфекции (горизонтальная передача), сепсис, цистит, пиелонефрит, респираторные инфекции (пневмония), остеомиелиты, артриты


образуют розово-красный водорастворимый пигмент, карамельный запах


Эндо: lac (-)


Плоскирева: рост, бесцветные


Индол (-)


Метиленовый красный (-)


Детекция: ПЦР с luxS геном





7. Enterobacter


E. cloacea: жкт, окружающая среда, пища


Внутрибольничные инфекции, сепсис, мпс (4%), респираторные инф (5%), перитонит, некротизирующий энтероколит, менингит


Эндо: lac (-/+)


Фогес-Проскауэр (+)


Метиленовый красный (-)


Индол (-)


API20E





8. Citrobacter


C. freundei: жкт, окруж. среда


Хирургические инфекции (раны;перитонит – редко), мпс (цистит, пиелонефрит), сепсис и менингит новорожденных


«Цитробактериоз — острое инфекционное заболевание, вызываемое микробами рода Citrobacter, характеризующееся преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта, а также возможностью вовлечения в патологический процесс мочевыводящих, желчевыводящих путей и центральной нервной системы»

Эндо: lac (+)


Плоскирева, SS-агар: рост


Метиленовый красный (+)


Ф-П (-)


Индол (-) (некоторые виды +)


Утилицируют цитрат (Цитратный агар по Симмонсу)


API20E





9. Дифференциальные признаки




написать администратору сайта