Микроб. #1 Систематика. Современная классификация микроорганизмов по Берджи
 Скачать 369.77 Kb.
|
|
98. Классификация питательных сред по назначению. В зависимости от назначения питательных сред различают: -основные среды; - элективные (селективные) среды; - дифференциально-диагностические среды; - накопительные среды (среды обогащения). К основным средам относятся мясо-пептонныйагар и мясо-пептонный бульон. На этих средах растет большинство бактерий. Дифференциально-диагностические среды - это сложные среды, позволяющие изучать биохимические свойства бактерий. Эти среды используются для определения вида бактерий. Элективные (селективные) питательные среды содержат вещества, подавляющие рост одних бактерий, и не влияющие на рост других бактерий. Эти среды служат для выделения определенного вида бактерий из смешанных популяций. Накопительные питательные среды (среды обогащения) - это среды, на которых определенные виды культур растут быстрее и интенсивнее сопутствующих 99. Классификация питательных сред по происхождению. По происхождению питательные среды подразделяются на: - естественные среды; - полусинтетические среды; - синтетические среды. Естественные питательные среды - это природные органические среды непостоянного состава, которые включают продукты животного или растительного происхождения. К ним относятся пептоны, кровь, отвары и экстракты, полученные из природных субстратов (мясо, рыба, крупы). Полусинтетические среды кроме органических и неорганических веществ известного состава содержат продукты природного происхождения (картофельная среда с глюкозой, дрожжевая среда). Синтетические питательные среды состоят из определенных количеств органических и неорганических химических соединений известного состава. 100. Классификация питательных сред по консистенции. По физическому состоянию (консистенции) питательные среды подразделяются на: - жидкие среды; - полужидкие среды; - твердые (плотные) среды; Жидкие среды представляют собой настои, отвары, бульоны, приготовленные на основе мяса, рыбы, овощей (естественные среды), а также композиции определенных концентраций химических соединений (искусственные среды). Полужидкие среды получают путем добавления к жидким средам 0,5-0,9% агар-агара (желеобразующее вещество, получаемое из морских водорослей). К плотным питательным средам относят среды, содержащие 2-3% агара 101. Простые и сложные питательные среды. По сложности питательные среды подразделяются на: - простые, или обычные среды (пептонная вода, мясо-пептонный бульон, мясо-пептонныйагар); - сложные, или специальные среды (кровяной агар, асцитический агар и бульон, мясо-пептонный сахарный бульон, сывороточный агар и бульон, свернутая сыворотка, кровяной бульон). 102. Универсальные и специальные питательные среды. Универсальные питательные среды-это те среды подходящие для роста и развития множество микроорганизмов. К ним относится мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар, на которых растут многие виды патогенных и непатогенных бактерий. Специальные среды применяют для выращивания бактерий, не множающихся на универсальных средах. К специальным относят еды с молоком, сывороткой крови, с добавлением крови животных, глюкозы и др. На них выращивают молочнокислые бактерии, патогенные и другие микроорганизмы. 103. Дифференциально –диагностические и элективные среды. Дифференциально-диагностические среды - это сложные среды, позволяющие изучать биохимические свойства бактерий. Эти среды используются для определения вида бактерий. Элективные (селективные) питательные среды содержат вещества, подавляющие рост одних бактерий, и не влияющие на рост других бактерий. Эти среды служат для выделения определенного вида бактерий из смешанных популяций. 104. Основные требования, предъявляемые к питательным средам. Для культивирования микроорганизмов используют различные по составу питательные среды. Но все они должны соответствовать ряду общих требований: --содержать полный набор веществ необходимых для питания, выращиваемого микроорганизма, в легко усвояемой форме; --обладать оптимальной влажностью, вязкостью, кислотностью среды (pH); --быть изотоничными ( с осмотическим давлением равным осмотическому давлению внутри клетки); --по возможности – быть прозрачными 105. Культуральные свойства бактерий. Культуральные свойства характерны для каждого вида бактерий, поэтому являются важным дифференцирующим признаком. Культуральные свойства характеризуется питательными потребностями, условиями и типом роста на плотных, жидких и полужидких питательных средах различного назначения. На поверхности плотных питательных сред в зависимости от посева микроорганизмы могут расти в виде колоний, штриха или сплошного газона. В жидких питательных средах при росте микроорганизмов наблюдается помутнение среды, образование пленки или осадка. При росте на полужидких (0,5-0,9% агара) питательных средах подвижные микробы вызывают выраженное помутнение, неподвижные формы растут только по ходу посева уколом в среду. 106. Особенности микробного роста на жидких питательных средах. Жидкие среды представляют собой настои, отвары, бульоны, приготовленные на основе мяса, рыбы, овощей (естественные среды), а также композиции определенных концентраций химических соединений (искусственные среды). В жидких питательных средах при росте микроорганизмов наблюдается помутнение среды, образование пленки или осадка. 107. Понятие о колонии, штамме, виде. Колонии микроорганизмов-видимые невооруженным глазом скопления клеток (бактерии, дрожжевые грибы) или разрастания мицелия (плесневые грибы) одного вида микроорганизмов; образуются при их размножении или росте на твердом субстрате; имеют вид плоских или выпуклых образований на поверхности плотной питательной среды Штамм (от нем. Stamm — буквально «ствол; род») — чистая культура вирусов, бактерий, других микроорганизмов или культура клеток, изолированная в определённое время и в определённом месте. Вид – совокупность микроорганизмов, имеющих единое происхождение и генотип, сходных по морфологическим и биологическим свойствам. 108. Понятие о питательных средах. Питательная среда — однокомпонентный или многокомпонентный субстрат, применяемый для культивирования или культур клеток высших организмов. В состав питательных сред должны входить все необходимые для жизнедеятельности микроорганизмов вещества. 109. Теоретические основы культивирования. 110. Общие принципы культивирования. Основные принципы культивирования микроорганизмов на питательных средах. 1.Использование всех необходимых для соответствующих микробов питательных компонентов. 2.Оптимальные температура, рН, rH2, концентрация ионов, степень насыщения кислородом, газовый состав и давление. Микроорганизмы культивируют на питательных средах при оптимальной температуре в термостатах, обеспечивающих условия инкубации. 111. Оборудования в процессах культивирования. Методы культивирования 112. Принципы и методы выделения чистых культур бактерий. Чистую культуру бактерий получают для проведения диагностических исследований — идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизма. Методы получения чистых культур: 1.Из колонии (изолированное скопление микроорганизмов одного вида, выросших на питательной среде в результате размножения одной или нескольких клеток) – механическое разобщение бактериальных клеток • посев петлёй, штрихом по Коху; посев шпателем, газоном по Дригалю; посев осаждением по Коху; посев разбрызгиванием; посев перемешиванием в расплавленном и остуженном студн 2.Путём подавления роста «лишних» микробов • на избирательных средах; после прогревания; после обработки кислотой; после антибиотиков; использование фагов; после проведения через живой организм 113. Бактериологический метод исследования. Сущность метода 114. Методы выделения чистых культур, основанные на механическом принципе. Методы получения чистых культур: 1.Из колонии (изолированное скопление микроорганизмов одного вида, выросших на питательной среде в результате размножения одной или нескольких клеток) – механическое разобщение бактериальных клеток • посев петлёй, штрихом по Коху; посев шпателем, газоном по Дригалю; посев осаждением по Коху; посев разбрызгиванием; посев перемешиванием в расплавленном и остуженном студне 2.Путём подавления роста «лишних» микробов • на избирательных средах; после прогревания; после обработки кислотой; после антибиотиков; использование фагов; после проведения через живой организм 115. Этапы выделения чистых аэробных культур микроорганизмов. Выделение чистых культур аэробов занимает, как правило, три дня и производится по следующей схеме: 1-й день - микроскопия мазка из исследуемого материала, окрашенного (обычно по Граму) - для предварительного ознакомления с микрофлорой, что может быть полезным в выборе питательной среды для посева. 2-й день - изучение колоний, выросших на чашках, описание их. 3-й день - проверка чистоты культуры, выросшей на скошенном агаре путем микроскопии мазка. При однородности исследуемых бактерий выделение чистой культуры можно считать законченным 116. Идентификация микроорганизмов с помощью бактериофагов. Фаготипирование – используется при внутривидовой идентификации бактерий, т.е. определении фаговара (фаготипа). Метод основан на строгой специфичности действия фагов. Фаговар бактерии определяется тем типом фага, который вызвал ее лизис (образование стерильного пятна, «бляшки», или «негативной колонии», фага). Методику фаготипирования используют для выявления источника и путей распространения инфекции (эпидемиологическое маркирование). Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения 117. Техника посева микроорганизмов. Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей или иглой, если микроорганизмы выращены на плотной среде. В том случае, когда микроорганизмы выращены в жидкой питательной среде, лучше пользоваться не петлей, а стерильной пипеткой Техника посева микроорганизмов на питательные среды. -Посев уколом -Посев петлей (посев штрихами) -Посев шпателем по методу Дригальского -Посев по методу Шукевича. 118. Культивирование микроорганизмов по методу Дригальского. Посев шпателем по методу Дригальского. Используют 3 чашки Петри с питательной средой. На 1-ю чашку петлёй или пипеткой наносят каплю исследуемого материала и растирают стерильным шпателем по всей поверхности питательного агара. Затем шпатель, не обеззараживая, переносят во 2-ю чашку и втирают оставшиеся на нём микроорганизмы в поверхность питательной среды. Далее шпатель переносят в 3-ю чашку и аналогичным образом производят посев. На 1-й чашке вырастает максимальное количество колоний, на 3-й – минимальное. В зависимости от содержания микробных клеток в исследуемом материале на третьей или на второй и третьей чашках вырастают отдельные колонии, пригодные для выделения чистой культуры. 119. Практические применения фагов и их классификация. Практическое применение фагов. Бактериофаги широко используют в микробиологических лабораториях (в лабораторной диагностике инфекций), а также в клинике для лечения и профилактики инфекционных заболеваний. -Фагоиндикация -Фаготипирование -Фаготерапия -Фагопрофилактика 120. Что такое фагоиндикация, фаготипирование, Фагоиндикация – метод определения видовой принадлежности микроорганизмов, выделенных в чистой культуре, по типу лизирующего фага. По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в воде) можно судить о присутствии в них соответствующих патогенных бактерий. Подобные исследования проводят при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных болезней. Фаготипирование – используется при внутривидовой идентификации бактерий, т.е. определении фаговара (фаготипа). Метод основан на строгой специфичности действия фагов. Фаговар бактерии определяется тем типом фага, который вызвал ее лизис (образование стерильного пятна, «бляшки», или «негативной колонии», фага). Методику фаготипирования используют для выявления источника и путей распространения инфекции (эпидемиологическое маркирование). Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения. |