Техно хим контроль. Целью микробиологического контроля
 Скачать 29.61 Kb.
|
|
Целью микробиологического контроля является предотвращение развития посторонней микрофлоры путем соблюдения санитарного режима и проведения профилактических мероприятий. Задачей санитарно-микробиологического контроля является максимально быстрое обнаружение микроорганизмов вредителей, выявление путей их проникновения, возможности накопления на отдельных этапах технологического процесса и попадания в готовые изделия. Микробиологический контроль на предприятиях по переработке продуктов животного происхождения производится для определения санитарного качества сырья, полуфабрикатов и готовой продукции, выявления причин и источников загрязнения продуктов микроорганизмами в ходе технологического процесса. Он включает контроль сырья и готовой продукции, контроль условий производства и санитарного состояния оборудования. Различают внутренний и инспекционный контроль. Внутренний контроль выполняется микробиологом предприятия регулярно по графику предприятия. Инспекционный контроль осуществляется органами Роспотребнадзора периодически, согласно плану проверок. Санитарно-гигиенический контроль производится для выявления обсемененности микроорганизмами воздуха, воды, аппаратуры, тары, инвентаря, рук и спецодежды работников. Регулярно проводимое санитарно-бактериологическое обследование условий производства позволяет выявить источники микробного загрязнения продукции, оценить качество мойки и дезинфекции оборудования. Контроль санитарного состояния производства - контроль качества мойки и дезинфекции оборудования, тары, инвентаря, спецодежды и рук работающих - производится не реже 1-го раза в 15 дней путем исследования смывов. В смывах определяют наличие различных микроорганизмов (согласно требованиям нормативно-технической документации), в том числе общее количество бактерий, бактерий группы кишечных палочек и пр. Смывы берут стерильными ватными или марлевыми тампонами. Анализ чистоты рук на наличие БГКП проводят у работников, которые непосредственно соприкасаются с чистым оборудованием или продукцией. Бактерии группы кишечной палочки (БГКП, также называются колиморфными и колиформными бактериями - условно выделяемая по морфологическим и культуральным признакам группа бактерий семейства энтеробактерий, используемая санитарной микробиологией в качестве маркера фекальной контаминации, относятся к группе так называемых санитарно-показательных микроорганизмов. Для обнаружения кишечных палочек применяют среды Кесслер или Кода. Среды являются накопительными для кишечных палочек. Наличие кишечных палочек свидетельствует о фекальном загрязнении объекта, обусловленного некачественной санитарной обработкой, несоблюдением правил личной гигиены. Для взятия смывов с рук работников влажным тампоном, смоченным в среде или стерильной воде, или в физиологическом растворе, протирают ладони, пальцы и околоногтевые участки обеих рук. Контроль за чистотой рук (смывы) проводится перед началом работы или во время работы (после туалета, при переходе с одного участка на другой). Для взятия смывов с текстильных изделий (спецодежда, фильтрующие материалы, серпянка, мешки и т.д.) отбор проб проводят с площади 100 см2 с передних пол и рукавов халата. Пробы помещают в 5 см3 среды Кесслер. Контроль санитарной одежды проводят у работников на производственных участках, связанных с сырьем, полуфабрикатами, готовой продукцией на разных этапах выработки молочных продуктов. Спецодежду признают удовлетворительного санитарного состояния при отсутствии БГКП. После протирания объекта тампон помещают в ту же пробирку. Составляется список смывов, согласно которому нумеруют пробирки. Затем штатив со смывами отправляют в лабораторию. В лаборатории смывы помещают в термостат с температурой 37 ºС на 24-48 ч. Кишечные палочки размножаются в среде Кесслера или Кода, вызывают сбраживание лактозы с образованием кислоты. В среде Кода в результате реакции изменяется цвет. Она вместо темно-зеленого цвета становится ярко-желтой. В среде Кода содержится индикатор, который меняет цвет при накоплении кислоты. Затем производят идентификацию кишечных палочек на среде Эндо, на которой они образуют колонии характерного красного цвета с металлическим блеском. В среде Кесслера в засеянных пробирках визуально обнаруживается рост микроорганизмов (БГКП) в виде диффузного помутнения среды и газообразования за счет способности колиформных бактерий ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа. Показатели санитарного состояния оборудования и инвентаря оцениваются в соответствии с таблицей 1. В случае несоответствия (превышения) показателей следует считать санитарную обработку неэффективной, что предполагает применение усиленных мер. Таблица 1 - Микробиологические показатели санитарного состояния
Анализ чистоты рук на наличие БГКП проводится микробиологом предприятия без предварительного предупреждения не реже 1 раза в декаду у работников, непосредственно соприкасающихся с чистым оборудованием или продукцией. Контроль за хлорированием рук проводят путем проведения йодкрахмальной пробы. Отдельные участки рук протирают ватным тампоном, смоченным йодкрахмальным раствором (смесь 1:1 6% раствора йодистого калия и 4% раствора растворимого крахмала). Признаком того, что руки были обработаны дезинфицирующим раствором, содержащим ионы хлора, является появление сине-бурого окрашивания. Рекомендуемая периодичность - 1 раз в неделю. Подготовка посуды и материалов для исследований. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, перед использованием кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты объемной долей 1-2%) в течение 15 мин, тщательно ополаскивают проточной водой. Посуда с питательными средами после снятия результатов обеззараживается перед мойкой путем стерилизации в автоклаве при 121 °С в течение 30 мин. Посевы в пробирках можно обеззараживать кипячением в течение 1 ч. Остатки агаровых питательных сред с посуды счищают в специальную емкость, снабженную крышкой. Освобожденную посуду ополаскивают и замачивают в растворе с моющим средством. После замачивания посуду тщательно моют и ополаскивают проточной водой. Использованные пипетки вертикально погружаются в емкость (стакан) с дезинфицирующим раствором до уровня возможного микробного загрязнения. Порядок мойки пипеток: - освобождают от ватных тампонов; - ополаскивают теплой водой для удаления остатков посевного материала; - замачивают в моющем растворе на 20-30 мин (если внутри пипеток остались загрязненные места, их можно зачистить с помощью длинной проволоки с накрученной на конце ватой); - сильно загрязненные пипетки погружают в хромовую смесь на 20-30 мин; - тщательно ополаскивают проточной теплой водой. Вымытую и высушенную посуду стерилизуют: - сухим жаром - проводится в сушильном шкафу. Подготовленный к стерилизации материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают нагрев. Продолжительность стерилизации при температуре 150 °С - 2 ч; при 165 °С - 1 ч, при 180 °С - 40 мин, при 200 °С - 10-15 мин, считая с момента достижения указанной температуры. Стерильную посуду вынимают из стерилизационного шкафа после его охлаждения ниже 60 °С; - паром под давлением - лабораторную посуду и материалы, разрушающиеся при температуре выше 160 °С - стерилизуют в автоклаве при (121±1) °С в течение (30±1) мин с последующим подсушиванием. Чашки Петри, пипетки и др. посуду стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических и стеклянных пеналах. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве завернутыми в бумагу. Стерильную посуду хранят или в плотно закрывающихся шкафах, или в бюксах не более 30 сут. Подготовка и стерилизация посуды и материалов для смывов. Ватные или марлевые тампоны заворачивают каждый в отдельности в бумагу и стерилизуют. Отдельно стерилизуют пробирки с 5 см3 раствора хлористого натрия при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Подготовка воды. Питьевую воду рекомендуется предварительно выдержать на свету в течение суток, прокипятить в открытом сосуде 30 мин и охладить до комнатной температуры. Необходимо контролировать активную кислотность воды, которая должна составлять 7,2-7,6 ед. рН. Подготовленную воду используют для приготовления питательных сред и растворов для разведений. Использование дистиллированной воды для приготовления растворов, реактивов и питательных сред должно быть оговорено в каждом конкретном случае и сопровождаться обязательным контролем рН. При использовании воды для приготовления разведений ее разливают в пробирки по 10 см3 или в колбы по 93 см3 и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение (20±1) мин. Для взятия смывов готовят пробирки по 5 см3. Приготовление раствора хлористого натрия (физиологический раствор). 8,5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм3 воды, разливают раствор в пробирки по 10 см3 или в колбы по 93 см3 и стерилизуют при (121±2) °С в течение (20±1) мин. После стерилизации в пробирках должно остаться 9 см3, а в колбах 90 см3 раствора хлористого натрия. Подготовка питательных сред. Основное требование, предъявляемое к питательным средам, - обеспечение ростовых характеристик и специфичности на уровне арбитражных сред, т.е. сред, использование которых регламентировано нормативными документами (национальными стандартами). Рабочие питательные среды для посевов готовят из сухих питательных сред путем их растворения в воде с последующей стерилизацией в соответствии с инструкцией по приготовлению, приведенной на этикетке или в сопроводительных документах. Для приготовления рабочих питательных сред используют водопроводную или дистиллированную воду. Приготовление среды Кесслер. 16 г сухой среды Кесслер растворяют в 1 дм3 питьевой воды. Смесь размешивают и кипятят при помешивании 2-5 мин. Разливают в пробирки с поплавками по 5 см3 или колбы с поплавками по 40-50 см3 и стерилизуют при (121±1) °С в течение (11±1) мин. Готовая для применения среда должна иметь темно-фиолетовый цвет. Допускается наличие небольшого осадка. Приготовление среды Кода. Сухую среду в количестве 30 г размешать в 1 дм3 воды. В полученной среде проверяют активную кислотность и при необходимости корректируют ее 20-30% раствором гидроокиси натрия или 20% раствором молочной кислоты до 7,4-7,6 ед. рН. Среду кипятят 5 мин при постоянном перемешивании. Готовую среду разливают в стерильные пробирки по 5 см3. Цвет среды должен быть зеленым. Экспериментальная частьСмывы отбирают: - стерильными ватными тампонами, закрепленными на стеклянных, металлических или деревянных палочках, которые вставлены в пробирки с ватными или другими пробками; - ватными или марлевыми тампонами, стерилизованными в бумажных пакетах, с использованием стерильных (профламбированных) пинцетов. Непосредственно перед взятием смыва тампон увлажняют путем наклонения пробирки или опусканием тампона в жидкость. Проведение анализа. При определении БГКП смывы готовят в растворе хлористого натрия или воды, или среды (Кесслер или Кода), которые разливают в химические пробирки по 5 см3. Стерильный тампон смачивают в растворе хлористого натрия или воды, делают смыв с обеих рук и пальцев (см. выше теоретическую часть). После проведения смывов тампоны либо возвращают в пробирку со средой, либо помещают в раствор хлористого натрия или воды. Пробирку тщательно встряхивают. Затем всю смывную жидкость с тампоном переносят в пробирку со средой (Кесслер или Кода) для дальнейшего проведения анализа. Культивирование. Посевы термостатируют при температуре 37 °С в течение 24-48 ч. Допускается контроль на наличие БГКП производить с помощью индикаторных бумажек для определения бактерий группы кишечной палочки. Для этого индикаторную бумажку смачивают в стерильной воде и накладывают на руку. Затем бумажку помещают в пакет, запаивают и термостатируют в течение 12 часов при 43°С. Появление розовых пятен свидетельствует о присутствии БГКП. |