Характеристика популяции моноцитов, выделенных различными способами, как потенциального материала для проведения клеточной терапии в офтальмологии
![]()
|
![]() «РОССИЙСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. Н.И. ПИРОГОВА» МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА БИОХИМИИ Дипломная работа «Характеристика популяции моноцитов, выделенных различными способами, как потенциального материала для проведения клеточной терапии в офтальмологии» Выполнила: Калинина Дарья Борисовна Научный руководитель: Суббот Анастасия Михайловна Куратор: Добрынина Ольга Васильевна Клеточная терапия. ![]() Моноциты как материал для КТ. Отсутствие тератогенных и онкогенных свойств; Синтез биологически активных веществ; Способность к дифференцировке; Мультипотентные свойства; Простота забора крови; Большое количество клеточного материала; Отсутствие биоэтических проблем. ![]() Принципиальные характеристики для КТ. Абсолютный выход выделенных клеток; Чистота выделенной популяции; Количество манипуляций / длительность процессинга; Контакт с токсичными веществами; Активация клеток в процессе выделения; Стоимость процедуры выделения клеток. ![]() Методы выделения моноцитов. Сепарация по поверхностным антигенам
Иммуномагнитная сепарация отрицательная селекция положительная селекция На основании адгезивной способности моноцитов По физическим свойствам многоступенчатый градиент плотности одноступенчатый гиперосмотический градиент плотности – метод Рекальде. ![]() Цель работы. Оценить метод выделения моноцитов «по Рекальде» в сравнении с традиционно используемым методом адгезии с позиции приемлемости их для последующего терапевтического использования. ![]() Задачи. Оценить при выделении методами адгезии и «по Рекальде»
Их абсолютное кол-во; Чистоту популяции выделенных клеток:
по уровню экспрессии поверхностных маркеров; ![]() Методика. Выделение моноцитов
Подсчет абсолютного количества выделенных клеток в камере Горяева Оценка жизнеспособности Проточная цитометрия окраска пропидий йодидом; Морфологически окраска трипановым синим Определение популяционного состава Проточная цитометрия по параметрам светорассеяния окраска на CD-45 окраска на CD-14 Морфологически приготовление и окраска тонких мазков по Романовскому-Гимзе световая микроскопия тонких мазков Оценка активации клеток в процессе выделения Определение внутриклеточного уровня ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-α методом ИФА ![]() Выделение моноцитов. Метод адгезии:
Метод Рекальде: инкубация крови с NaCl, выделение моноцитов в градиенте плотности гипертонического раствора фиколла. ![]() Количество и жизнеспособность выделенных клеток. ![]() ![]() ![]() ![]() |