Характеристика популяции моноцитов, выделенных различными способами, как потенциального материала для проведения клеточной терапии в офтальмологии

• Название: Характеристика популяции моноцитов, выделенных различными способами, как потенциального материала для проведения клеточной терапии в офтальмологии
• Дата: 29.05.2019
• Размер: 1.63 Mb.
• Имя файла: -1021418738.pptx
• Тип: Дипломная работа; #79515

«РОССИЙСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. Н.И. ПИРОГОВА» МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА БИОХИМИИ Дипломная работа «Характеристика популяции моноцитов, выделенных различными способами, как потенциального материала для проведения клеточной терапии в офтальмологии» Выполнила: Калинина Дарья Борисовна Научный руководитель: Суббот Анастасия Михайловна Куратор: Добрынина Ольга Васильевна
Клеточная терапия.


Моноциты как материал для КТ.

Отсутствие тератогенных и


онкогенных свойств;
Синтез биологически активных


веществ;
Способность к дифференцировке;

Мультипотентные свойства;

Простота забора крови;

Большое количество клеточного материала;

Отсутствие биоэтических проблем.




Принципиальные характеристики для КТ.

Абсолютный выход выделенных клеток;

Чистота выделенной популяции;

Количество манипуляций / длительность процессинга;

Контакт с токсичными веществами;

Активация клеток в процессе выделения;

Стоимость процедуры выделения клеток.




Методы выделения моноцитов.

Сепарация по поверхностным антигенам

Проточная сепарация отрицательная селекция положительная селекция
Иммуномагнитная сепарация отрицательная селекция положительная селекция

На основании адгезивной способности моноцитов

По физическим свойствам


многоступенчатый градиент плотности одноступенчатый гиперосмотический градиент плотности – метод Рекальде.

Цель работы.
Оценить метод выделения моноцитов «по Рекальде» в сравнении с традиционно используемым методом адгезии с позиции приемлемости их для последующего терапевтического использования.

Задачи.
Оценить при выделении методами адгезии и «по Рекальде»

Жизнеспособность выделенных клеток;
Их абсолютное кол-во;
Чистоту популяции выделенных клеток:

морфологическим методом;
по уровню экспрессии поверхностных маркеров;


Уровень активации клеток по уровню продукции биологически активных веществ.

Методика.

Выделение моноцитов

на основании адгезии к культуральному пластику в градиенте плотности гипертонического раствора фиколла по Рекальде

Подсчет абсолютного количества выделенных клеток


в камере Горяева

Оценка жизнеспособности


Проточная цитометрия окраска пропидий йодидом;
Морфологически окраска трипановым синим

Определение популяционного состава


Проточная цитометрия по параметрам светорассеяния окраска на CD-45
окраска на CD-14
Морфологически приготовление и окраска тонких мазков по Романовскому-Гимзе световая микроскопия тонких мазков

Оценка активации клеток в процессе выделения


Определение внутриклеточного уровня ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-α методом ИФА

Выделение моноцитов.

Метод адгезии:

выделяли МНК по Боюму, рассеивали МНК на культуральные чашки, снимали адгезировавшие моноциты.

Метод Рекальде:


инкубация крови с NaCl, выделение моноцитов в градиенте плотности гипертонического раствора фиколла.

Количество и жизнеспособность выделенных клеток.