Химиотерапевтические препараты. Их классификация. Понятие о химиотерапевтическом индексе
 Скачать 284.01 Kb.
|
При размножении лизогенной культуры какая-то часть клеток популяции лизируется и освобождает зрелые частицы специфичного для этой популяции умеренного фага. Сохранение способности к инфицированию у умеренного фага зависит от низкомолекулярного белкового репрессора, кодируемого вирусной ДНК и «выключающего» все вирулентные функции бактериофага. Переход умеренного фага на литический цикл развития происходит при нарушениях синтеза белкового репрессора. При этом встроенный в геном бактерии вирус проявляет все свои вирулентные свойства, репродуцируется и лизирует клетки, а также может инфицировать другие бактерии. Образование лизогенными культурами зрелых частиц фага получило название спонтанной индукции. Количество лизируемых клеток и количество образовавшихся зрелых частиц фага зависят от особенностей данной культуры и условий выращивания. В то же время количество клеток, освобождающих фаги, может быть резко увеличено при воздействии на лизогенную культуру некоторыми физическими и химическими факторами, или при создании в среде избытка некоторых питательных веществ и витаминов. При индукции некоторых лизогенных культур удавалось вызывать образование зрелых частиц фага почти у всех клеток. К индуцирующим агентам относятся ультрафиолетовые (УФ), рентгеновские и гамма-излучения, перекиси, азотистый иприт и его гомологи, этиленимин, урацил, многие антибиотики. Наиболее эффективные и широко применяемые индуцирующие факторы - УФ-облучение и антибиотик митомицин С.В отдельных случаях умеренный фаг лизогенной культуры может спонтанно (без внешних воздействий) или под влиянием различных факторов измениться и стать вирулентным. Тогда фаг приобретает способность лизировать все клетки данной культуры. Другой источник: Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой Жизненный цикл фага начинается с прикрепления (адсорбции) фага на поверхностных фагоспецифических рецепторах клеточной стенки бактерий. Фаги с сокращающимися отростками адсорбируются с помощью хвоста. Внедрение фага внутрь клетки. Этот процесс происходит в результате сокращения хвостового чехла и проталкивания стержня сквозь оболочку бактериальной клетки, чему способствует фермент лизоцим, который располагается на конце хвостового отростка. После проникновения стержня в цитоплазму клетки открывается путь для перехода нуклеиновой кислоты из головки фага внутрь микробной клетки. Оболочка головки и отростки остаются снаружи клетки. После проникновения нуклеиновой кислоты в цитоплазму клетки наступает эклипс — фаза, в течение которой не удается обнаружить фаговые частицы. В этот период в клетке разрушается бактериальная ДНК, прекращается производство бактериальных белков. Репродукция фага. Начинается с синтеза ферментов, необходимых для создания фаговой нуклеиновой кислоты. Нуклеиновые кислоты фага в клетке появляются через 5 мин после ее заражения фагом. Через некоторое время происходит синтез структурных белков и других компонентов фага. Формирование фага. Самая первая частичка, которую можно обнаружить в клетке при морфогенезе фага, — базальная пластинка. После базальной пластинки образуются стержень и чехол. Вначале на базальной пластинке монтируется стержень, а затем закрепляется чехол. К этому времени завершается формировние головки. Полностью сформированный хвостовой отросток присоединяется к головке и только после этого хвостовые нити могут прикрепляться к базальной пластинке. Практическое применение бактериофагов (фагодифференцировка и фаготипирование) Фаготипирование помогает устанавливать источник инфекции, изучать эпидемиологические связи, отличать спорадические случаи заболеванийаотаэпидемических. В основе фагодиагностики и фаготипирования лежит принцип совместного культивирования выделенного микроорганизма с соответствующими видовыми или типовыми фагами. Положительным результатом считается наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с видовым, а затем с одним из типовых фагов. Фаготипирование. Для типирования бактерий суточную агаровую культуру испытуемого штамма засевают в 2,5 мл бульона Хоттингера или мясо-пептонного бульона (рН 7,2-7,4) и культивируют 3-4 часа при 37°С (до появления помутнения, видимого невооруженным глазом). Одновременно в чашки Петри заливают по 25-30 мл 1,2% агара на бульоне Хоттингера, дополненным внесением свежей мясной воды (рН 7,5±0,1), 0,4% глюкозы и CaCl2. Хлористый кальций добавляют в расплавленный агар непосредственно перед разливом (из расчета 0,2 мл стерильного 10%-ного раствора CaCl2 на 100 мл агара). Чашки Петри, накрывают стерильными фильтрами и после застывания подсушивают 30-40 минут при 36-37 С. Затем чашки засевают исследуемой бульонной культурой с помощью пастеровской пипетки «газоном». Избыток культуры удаляют пипеткой. Открытую чашку с агаром накрывают стерильным фильтром и подсушивают 30-40 минут 36-37 °С. Дно засеянной чашки расчерчивают маркером на 23 квадрата (по числу типовых бактериофагов) и в каждый квадрат засеянной чашки петлей диаметром, 2мм или тонко оттянутой пастеровской пипеткой наносят каплю соответствующего бактериофага всегда в одном и том же порядке При нанесении бактериофагов следует избегать касания пипеткой поверхности агара во избежание возможности переноса культуры. После подсыхания капель бактериофагов чашку переворачивают крышкой вниз и инкубируют 18-20 часов при 30 °С, либо 5-6 часов при 36-37 °С с последующим культивированием течение 20-22 часов при комнатной температуре. Практическое применение бактериофагов (фагодиагностика) Фагодиагностика - метод идентификации выделенных культур микроорганизмов, основанный на способности диагностических фагов лизировать чувствительные бактерии. В основе фагодиагностики и фаготипирования лежит принцип совместного культивирования выделенного микроорганизма с соответствующими видовыми или типовыми фагами. Положительным результатом считается наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с видовым, а затем с одним из типовых фагов. Например, если лизис колоний вызван дизентерийным бактериофагом, то выделенные бактерии являются культурой шигелл. Строгая специфичность типовых фагов дает возможность идентифицировать отдельные варианты (фаговары) внутри вида. Таким образом обычно типируют золотистый стафилококк и возбудитель брюшного тифа. Фаготипирование имеет большое значение в эпидемиологии, так как позволяет расшифровывать эпидемиологические цепочки, т.е. установить источник инфекции. |