Пустой 53. Жизнедеятельность микроорганизмов в почве, они качественного и количественного состава определяются почвенными условиями наличием питательных веществ, влагой, аэрацией, реакцией, температурой и т д. н
 Скачать 26.14 Kb.
|
|
2.3. Микрофлора почвы как фактор загрязнения лекарственного сырья Почва является основным резервуаром и естественной средой обитания микроорганизмов, которые участвуют в процессах формирования и очистки почвы, а также в цикле веществ в природе. Жизнедеятельность микроорганизмов в почве, они качественного и количественного состава определяются почвенными условиями: наличием питательных веществ, влагой, аэрацией, реакцией, температурой и т.д.н. Тип почвы оказывает большое влияние как на общее количество, так и на соотношение отдельных систематических групп микроорганизмов. Отличаясь физическими и химическими свойствами, почва представляет собой различную среду для жизнедеятельности микроорганизмов. Их больше во влажной и обработанной почве (4,2-5,2 млрд/г), меньше в лесной почве, в Песках (0,9-1,2 млрд/г). Самая обильная микрофлора в верхнем горизонте почвы глубиной 2,5-15 см. В этом слое происходят основные биохимические процессы трансформации органических веществ, обусловленные жизнедеятельностью микроорганизмов. На глубине 4-5 м количество микроорганизмов значительно уменьшается, так как уменьшается количество питательных веществ и ухудшаются условия аэрации. В состав почвенной микрофлоры входят следующие группы микроорганизмов: Бактерии аммонификаторы, вызывающие гниение трупов животных, остатков растений, разложение мочевины с образованием аммиака и других продуктов: аэробные бактерии-В. subtilis, B. mesentericus, Serratia marcescens ; бактерии рода Proteus ; грибы рода Aspergillus, Mucor, Penicillium ; анаэробы - C. sporogenes, C. putrificum; уробактерии - Urobacillus pasteuri, Sarcina urea, расщепляющие мочевину; нитрифицирующие бактерии: Nitrobacter и Nitrosomonas ( Nitrosomonas окисляют аммиак до азотистой кислоты, образуются нитриты, Nitrobacter превращают азотистую кислоты, оксида и нитратов); азотфиксирующие бактерии: усваивают из воздуха без кислорода и в процессе своей жизненной деятельности из молекулярного азота синтезируют белки и другие органические соединения азота, используются растения, бактерии, участвующие в круговороте серы, железа, фосфора и других элементов - серобактерии, железобактерии и т.н. (серобактерии окисляют сероводород до серной кислоты, железобактерии окисляют соединения железа в гидрат окиси железа, фосфора бактерии способствуют образованию легко растворимых соединений и фосфора); бактерии, расщепляющие клетчатку, вызывающие брожение (лактобактерий, алкоголь, маслянокислые, уксусные, протионовые и многое другое.). C выделениями человека и животных, c фекально-бытовыми сточными водами в почву могут попасть патогенные и условно-патогенных микроорганизмов (возбудителей грибных заболеваний, ботулизма, столбняка, газовой гангрены, сибирской язвы, бруцеллеза, лептоспироз, кишечные инфекции и так далее.). Санитарно-бактериологическое исследование почвы При осмотре почвы может быть проведен полный или короткий анализ. Полный санитарно-бактериологический анализ почвы проводится: для более глубокой характеристики санитарного состояния почвы; для определения пригодности почвы, при использовании жилищ, мест отдыха, детских учреждений и сантехнических сооружений; для проведения эпидемиологических исследований. Краткий анализ рекомендуется при осуществлении текущего санитарного контроля и включает в себя определение общего числа сапрофитных бактерий, БГКП (коли-титр и коли-индекс), клостридий (перфрингенс-титр), термофильных бактерий, нитрифицирующих. Полный санитарно-бактериологический анализ включает дополнительно: определение актиномицетов, грибов, сальмонеллы, шигеллы, возбудителей столбняка, ботулизма, бруцеллеза, сибирской язвы. Cхемa caнитapнoгo cocтoяния пoчвы пo микpoбиoлoгичеcким пoкaзaтелям:
2.4. Подготовка моющих средств в асептических условиях. Для исследования используют 3 флакона. 10 мл стерильного физраствора заливают одним из флаконов, внутреннюю поверхность емкости промывают, заливают во второй и третий флаконы, последовательно промывая. Пробки (корковые, полиэтиленовые, резиновые) в количестве 5 штук стерильными пинцетами помещают в стерильную колбу с широким горлом, закрывают ватной марлей, заливают 10 мл стерильного физраствора и тщательно промывают. Воронки, пробирки, пипетки промывают 10 мл стерильного физраствора. Промывка со стола выполняется с поверхностью 100 см2, для чего используются специальные трафареты из проволоки или олова, стерилизованные кальцинированием, прежде чем принимать моющие средства. Промывание проводят стерильным ватным тампоном, помещают в пробирку с 2 мл стерильного физраствора (тампон не должен касаться поверхности раствора). Непосредственно перед взятием туалетного тампона, смоченного физраствором, тщательно втираемым в поверхность стола, ограниченную трафаретом, помещают в пробирку, в которую добавляют 8 мл стерильного физраствора и тщательно промывают. Промывание рук берется влажным тампоном (тампон находится в пробирке с 2 мл стерильного физраствора), протирая ладони, подглазничные, межпальцевые пространства обеих рук. Тампон помещают в пробирку, добавляют 8 мл стерильного физиологического раствора и тщательно промывают. Промывка исследуется на предмет общего бактериального загрязнения (ОМЧ), на наличие Е.coli и Staphylococcus aureus; обнаружение которых свидетельствует о грубых нарушениях санитарного режима в аптеках. Определение микробного числа. 1 мл промывки добавляют в стерильный стакан Петри, заливают 12-15 мл расплавленного и охлажденного до 450С МПа, содержимое стакана тщательно перемешивают и после закалки агары помещают в термостат на 24-48 часов. Количество выращиваемых колоний рассчитывается, умножается на 10 и определяется общее микробное загрязнение участка. 3. Санитарно-микробиологическое исследование аптек Приказ министра здравоохранения Республики Казахстан от 7 июля 2021 г.№рг DSM-58. Зарегистрирован в Министерстве юстиции Республики Казахстан 9 июля 2021 года. № 23416 Об утверждении Санитарных правил "Санитарно-эпидемиологические требования к объектам распространения лекарственных средств и медицинских изделий". В аптеках по инструкции, утвержденной приказом Минздрава, не менее двух раз в квартал проводится бактериологический контроль, объектами которого являются: дистиллированная вода; растворы для инъекций до и после стерилизации; глазные мази после стерилизации; глазные капли, приготовленные асептически на стерильной основе; нестерильные лекарственные формы; аптечная посуда, пробки, прокладки, другие материалы; инвентарь, оборудование, руки, санитарная одежда персонала; воздух в аптечных помещениях. 3.1. Микрофлора готовых лекарственных форм Готовые лекарственные формы подвергаются микробному портлению: сухие (порошки, сборы), жидкие (отвары, настои, отвары, капли), мягкие (мази, пасты, шарики, свечи) и стерильные инъекционные препараты. Препараты с высоким загрязнением микробами, особенно патогенные, могут вызывать инфекционные заболевания у человека. Фитозоонозите-инфекции от болезнетворных микроорганизмов, общие для топлокръвните (в том числе и люди), и растения, наиболее часто включают в кишечнике йерсиниоза, листериоз, псевдотуберкулоза, микотоксикоза. Размножение микроорганизмов в готовых препаратах приводит к изменению их физических и органолептических свойств, появлению токсичности. Микробная обсемененность лекарственных препаратов зависит от соблюдения аптеки санитарно - эпидемического режима, регламентируемого в настоящее время в приказ Министра здравоохранения Республики Казахстан от 7 июля 2021 года. №рр ДСМ-58 для утверждения санитарных правил "Санитарно-эпидемиологические требования к объектам в сфере обращения лекарственных средств и медицинских изделий". Причиной микробного загрязнения готовых препаратов может быть микробное загрязнение растительного лекарственного сырья, воздуха промышленных помещений, оборудования, посуды, дистиллированной воды и рук персонала. Инъекционные препараты, глазные капли и мази, препараты для новорожденных должны быть стерильными. В некоторых случаях инъекционные средства, оставаясь стерильными, обладают пирогенными свойствами. Пирогенная реакция организма человека, возникающая вследствие применения лекарственных препаратов, характеризуется повышением температуры, вазомоторными нарушениями, в тяжелых случаях – шоковым состоянием. Пирогенные вещества (пирогены), являющиеся эндотоксинами (преимущественно грамотрицательными бактериями), не инактивируются при кипячении, для их уничтожения требуется автоклавирование в течение 3 часов. Причиной пирогенности препаратов (появление эндотоксинов и пирогенности) являются микробное загрязнение дистиллированной воды, нарушения асептики производственного процесса, увеличение времени между подготовке раствора и стерилизации. Сухие порошкообразные вещества, особенно тальк и крахмал, мягкие лекарственные формы также восприимчивы к микробному загрязнению. Их микробное поражение имеет очаговый характер и проявляется изменением цвета и консистенции вещества. Микробный состав готовых препаратов может быть представлен следующими группами: плесень и дрожжевые грибы-Penicillium,Aspergillus, Mucor; кокки-сарцины, стафилококки; спороносные палочковидные бактерии-B. subtillis, B. mesentericus. Предупреждение микробного порчи готовых лекарственных веществ возможно при определенных условиях, которые уменьшают их микробное загрязнение: соблюдение правил личной гигиены, качественная дезинфекция воздуха, аптечные сифоны, манипулирование приборами, оборудование при необходимости (стерильные препараты) - асептическое производство. Все лекарственные формы из-за несоблюдения метода их приготовления могут подвергаться микробному загрязнению, в том числе и патогенным микроорганизмам. Применение таких препаратов может привести к развитию инфекционных заболеваний у человека. 3.1.1. Источники загрязнения лекарственных средств Основными источниками загрязнения лекарственными препаратами (лекарствами) микроорганизмами являются: технологическое оборудование, суд; сырье и вспомогательные вещества на всех этапах производства, хранения и транспортировки продукции; вода, используемая в производстве; воздух промышленных помещений; персонал. Вспомогательные вещества, в частности картофельный крахмал, часто содержат грибы рода Aspergillus и Penicillium, среди которых были обнаружены производители микотоксинов. Помимо вспомогательных материалов, основное сырье, чаще природного происхождения, и упаковочные материалы обнаруживаются в качестве источников загрязнения лекарственными средствами. Вода является частью лекарств или используется в их производстве. Системы подачи воды в производственных помещениях достаточно обширны. Многие виды бактерий могут выжить в воде в течение определенного времени. Время их выживания в воде в основном зависит от типа бактерий и концентрации микробной суспензии, температуры и состава воды. Микроорганизмы могут быть введены в препараты с воздухом. Жизнеспособность микроорганизмов в воздухе обеспечивают взвешенные частицы воды, слизи, пыли, почвы. Загрязнение воздуха в жилых и некоторых промышленных помещениях всегда выше атмосферного. Причинами попадания микроорганизмов в лекарственные средства через воздух могут быть высокая первичная загрязненность атмосферного воздуха или неэффективная работа систем подготовки воздуха. Среди источников загрязнения лекарствами наиболее значимым является персонал. Микроорганизмы могут попасть в продукт: воздушно-капельный путь с выделениями полости рта и носа; воздушно-пылевые и контактные пути с участками кожи, незащищенной одеждой и даже индивидуальной технологической одеждой. Значительное количество микроорганизмов выделяется из верхних дыхательных путей человека в окружающее пространство. При чихании на расстоянии 10 м и более распространяется от 100 до 1000 жизнеспособных клеток бактерий и вирусов, со слюной-102-106 шт. / мл слюны, с секретом из полости носа - 101-106 шт./мл. Наиболее обсемененными элементами кожи являются запястья, лицо, шея. В других частях человеческого тела количество сапрофитных аэробных бактерий находится в диапазоне 105-106 кое / см2. Количество механических и микробных частиц зависит от характера выполняемых движений. В течение 1 минуты человек, не двигаясь, выделяет в окружающую среду 10-1000 механических и микробных частиц, а во время интенсивной работы – до 106. Количество частиц, отделяемых технологической одеждой, зависит от типа ткани, способа обработки швов и края, а также от степени износа. Соблюдение гигиены, применение мер дезинфекции, а также повышение квалификации работников могут привести к снижению загрязнения лекарственными средствами микроорганизмами. 3.1.2. Исследование воздуха в аптечных помещениях Пробы воздуха берут в следующих помещениях аптеки: 1. асептический блок, стерилизация; 2. вспомогательная, упаковочная, материальная комната; 3. Прачечная; 4. сервисный зал. Отбор проб воздуха осуществляется в следующих условиях: А) чистая, подготовленная к работе комната не ранее чем через 30 минут после влажной уборки; Б) закрытые окна, окна и двери; В) уровень отбора проб воздуха соответствует высоте рабочего стола. Пробы воздуха берутся аспирационным методом с помощью приборов бактериологического анализа воздуха: устройства Кротова, точки зрения, паба. Скорость вытягивания воздуха должна составлять 25 литров в минуту. Количество воздуха, проходящего через аппарат, составляет 100 литров для определения общего количества бактерий, 250 литров.для определения дрожжей и плесени, 250 литров. для определения золотистого стафилококка. Исследование воздуха аптечных помещений проводится с целью определения: 1. всего бактерий; 2. наличие дрожжей и плесени; 3. Staphylococcus aureus. Чтобы определить общее количество бактерий, воздух высевается на МПа, грибы на твердую среду Сабуро. Staphylococcus aureus обнаруживается на желто-солевой агаре. Бляшки с культурами МРа и желто-соляной агар доставляются в лабораторию и инкубируются при 37°С в течение 18-24 часов. Посевы в среде Сабуро инкубируют при температуре 22-24 ° С в течение 4 дней. Для определения общего бактериального загрязнения через 24 часа изучаются культуры, рассчитывается количество выращиваемых колоний и пересчитывается до 1 м3. Для определения золотистого стафилококка через 48 часов посевы изучаются, а колонии, подозрительные на золотистый стафилококк, подсчитываются и идентифицируются по морфологическим, настоекторным, плазмокоагулирующим свойствам. Количество золотистого стафилококка определяется в воздухе м3. Чтобы определить количество дрожжевых и плесневых грибов, выращенные колонии дрожжевых и плесневых грибов подсчитываются и пересчитываются на 1 м3 воздуха. 3.1.3. Микрофлора лекарственных средств и ее влияние на свойства препаратов Присутствие микробов может существенно повлиять на терапевтическое значение ЛС, начиная с его устойчивости, заканчивая потенциальной опасностью для здоровья человека из-за токсигенных, аллергенных, а иногда и канцерогенных свойств некоторых видов бактерий и грибов, а также их метаболитов. Чаще всего в фармацевтических препаратах обнаруживаются: спорообразующие бактерии (Bacillus sp., Clostridium sp.); бактерии рода Salmonella, Enterobacter, Erwinia, P. Эенигиноза и другие виды этого рода; кокки-сарцины, стафилококки; грибы рода Penicillium, Aspergillus, Candida. Микроорганизмы способны разрушать и трансформировать различные компоненты препаратов за счет широкого набора ферментов. При этом биологически активные вещества препаратов могут быть изменены количественно или полностью уничтожены. Например, в таблетках преднизолон обусловлен наличием Aspergillus sp. Установлено преобразование стероида; в глазные капли с атропином, содержащие Corunebacterium sp., было обнаружено снижение содержания атропина сульфата. Микроорганизмы могут расщеплять консерванты: метилпарабен разлагается P. aeruginosa, а сорбиновая кислота-из грибов рода Penicillium и др. Микроорганизмы могут вызывать изменение органолептических свойств различных лекарственных форм, часто сопровождающихся многими нежелательными изменениями внешнего вида (обесцвечивание, газообразование), вкуса и запаха. В жидких лекарственных формах метаболиты микроорганизмов могут изменять свой химический состав, а также приводить к образованию токсических продуктов. Из жидких лекарственных форм настои и отвары легче всего высевают микробами; здесь чаще всего обнаруживаются дрожжи и плесень. При хранении лекарств появляются признаки порчи: помутнение, изменение цвета, пленка, осадок, необычный запах. Срок годности этих препаратов ограничен. Спиртовые настойки менее подвержены порче из-за противомикробного действия алкоголя. Легкие лекарственные формы также подвержены микробному загрязнению. Их микробное поражение является очаговым и проявляется изменением запаха, цвета и консистенции вещества. Например; Aspergillus flavus, Aspergillus niger приводят к изменению цвета, делению фаз, появлению неприятного запаха в эмульсиях. Кроме того, на поверхности кремов и мазей возможно развитие С. albicans, Penicillium sp., Cladosporium sp., Alternaria sp., Fusarium sp., Mucor sp., Rhisopus sp., Trichoderma sp., Verticillium sp. В твердых лекарственных формах риск микробного порчи меньше, так как нет условий для размножения микробов. Наличие аспирина и таблеток кодеина Penicillium sp. это приводит к поверхностному обесцвечиванию образцов и запаху уксусной кислоты. Такие же изменения вызывают Aspergillus sp., Penicillium sp. в таблетках нитрозепама. Нередко загрязнение регистрируется в группе коллоидных порошков неорганической природы (общее количество бактерий и грибов более 1000 на 1 г). Вероятно, коллоидные свойства этих порошков способствуют агрегации спор плесени. Кроме того, магний, составляющий структуру этого порошка, является основным макроэлементом в питании бактерий и грибов. 3.1.4. Влияние загрязняющих микроорганизмов на здоровье человека Помимо ухудшения качества препаратов под воздействием микроорганизмов, загрязненные препараты могут быть опасны для здоровья пациентов. Основными негативными последствиями использования больным зараженных ЛС могут быть снижение или отсутствие терапевтического действия препарата, возникновение побочных реакций, заболеваний, а также перенос и распространение лекарственных препаратов на устойчивые бактерии и грибы. Серьезные заболевания пациентов могут быть вызваны продуктами биоразрушения или микробными токсинами. Последние могут вызывать токсикоинфекции-острые кишечные заболевания, развивающиеся после приема внутрь лекарственных препаратов, загрязненных патогенными и условно-патогенными бактериями, выделяющими токсины. Среди них различные микроорганизмы: энтеротоксигенные варианты Escherichia coli, Proteus, Enterococcus, V. cereus, S. aureus, Cl. perfringens, реже – Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas. Возникновение, развитие и исход заболевания зависят от уровня микробного загрязнения, вирулентности микробов, иммунного статуса пациента и способа введения препарата. Наибольшую опасность представляет их введение в кровоток, глаза, в полость тела, обычно стерильное. При местном применении препаратов вероятность развития инфекционного процесса увеличивается при обширном повреждении тканей в результате травмирования, жжения, хирургического вмешательства. Такие инфекции представляют наибольшую опасность для людей со сниженным иммунным статусом: новорожденных, пожилых пациентов, ослабленных больных. Лекарственная инфекция наиболее распространена в офтальмологической практике. В настоящее время большое внимание уделяется изучению микрофлоры глазных контактных линз и растворов для их промывания, так как из-за микробного загрязнения последних резко возрастает риск заболеваний глаз. Возможно развитие кожных заболеваний, вызванных использованием лечебных кремов, загрязненных П. aeruginosa и C. albicans. В некоторых случаях препараты, оставаясь стерильными, приобретают пирогенные свойства. При парентеральном и особенно внутрисосудистом введении таких препаратов наблюдается стремительное повышение температуры тела до 40 ° С. Кроме того, происходит учащенный пульс, появляется озноб, повышенное потоотделение, тошнота и головная боль. В особо тяжелых случаях эти явления приводят к смерти. Пирогенните веществ (пирогени) являются ендотоксини (в большей степени, грамотрицательных микробов). С химической точки зрения пирогены представляют собой сложные вещества с высокой молекулярной массой и размером частиц от 50 до 1 мкм, состоящие в основном из липополисахаридов, адсорбированных на белковом носителе. Пирогены растворимы в воде, нерастворимы в спирте и ацетоне, устойчивы к повышенным температурам. Нагрев в автоклаве при 120°C в течение 20 минут приводит к гибели бактерий, но не уничтожает пирогены. Чувствительность пирогенов к высокой температуре различна. Изменение рН водного раствора практически не влияет на термолабильность пирогенов. В сухом состоянии их полное разложение осуществляется только при температуре 200 ° С в течение 30 мин; стерилизация сухим воздухом при 160 ° С в течение 2 часов не гарантирует полной апирогенности. Повышение температуры сокращает время, необходимое для уничтожения пирогенов. При температуре 600 ° C достаточно минутного нагрева, при 450°C – двухминутного, поэтому из них практически невозможно выпустить воду и растворы для инъекций путем термической стерилизации. Пирогенные вещества чувствительны к действию окислителей, например, перекиси водорода или перманганата калия. Пирогены имеют очень небольшие размеры и проходят через самые плотные фильтры с размерами пор от 0,005 до 0,001 микрон. Появление пирогенности препаратов возможно из-за микробного загрязнения дистиллированной воды, нарушения асептики технологического процесса, увеличения времени между приготовлением раствора и стерилизацией (более 1,5 часов). 3.1.5. Некоторые методы деконтаминации Добыча. Во многих случаях сам производственный процесс может в некоторой степени обеспечить уменьшение количества микроорганизмов. Например, извлечение лекарственного растительного сырья спиртовым раствором можно рассматривать как метод уменьшения количества патогенных микроорганизмов. Более высокие концентрации этанола (от 60 до 95%) дают бактерицидный и фунгицидный эффект в отношении вегетативных форм, но некоторое консервирующее действие отмечается и при более низкой концентрации (20%). Помимо концентрации этанола, противомикробное действие также зависит от длительности воздействия, температуры и имеющихся видов микроорганизмов. Вегетативные клетки, особенно грамотрицательные, очень чувствительны к нагреванию и действию спиртовых растворов. Остаточное микробное загрязнение после подобных экстрагирующих процессов - это в основном бактериальные эндоспоры, устойчивые к воздействию антибактериальных средств, например, этанола. Водно-спиртовая экстракция при нагревании обычно эффективна в отношении препаратов с общим количеством аэробных микроорганизмов менее 10 КОЕ/мл. |