Кишечая палочкавозбудитель эшерихиозов
 Скачать 46.47 Kb.
|
|
Кишечая палочка-возбудитель эшерихиозов Лабораторна диагностика Материалом для исследования при внекишечных формах эшерихиозов служит гной, кровь, желчь, моча; при кишечных-испражнения, рвотные массы. В качестве материала используют смывы с игрушек, рук персонала, роддомов, больниц, молочных кухонь, пищевые продукты. Основной метод исследования- бактериологический. Производят посев материала на среду Эндо, выделяют чистую культуру и идентифицируют по биохимическим свойствам на средах Гисса и антигенным свойством в реакции агглютинации с ОК- и О-агглютинирующими сыворотками. Возбудитель холеры Лабораторная диагностика. Основным методом лабораторной диагностики холеры является бактериологический. Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, секционный материал, а также вода, пищевые продукты. В связи с тем, что холера- особо опасная инфекция, исследования проводятся в специализированных лабораториях. Диагностика холеры осуществляется поэтапно: 1) Из испражнений готовят мазки, окрашивают по Граму и разведенным фуксином. В мазках обнаруживают изогнутые палочки, расположенные в виде стаек рыб. 2) Производят посев исследуемого материала на 1%-ную щелочную пептонную воду и щелочной агар для выделения чистой культуры. 3) Идентифицируют выделенную культуру по: морфологическим признакам (в мазке); подвижности в препарате «висячая капля»; ферментативным свойствам на средах Гисса (отсутствие ферментации арабинозы), на мясо-пептонном желатине (воронкообразное разжижение) и нитрозоиндоловой пробе (розовое окрашивание вследствие появления нитрозоиндола под влиянием холерного вибриона);антигенным свойствам в реакции агглютинации с О1 агглютинирующей сывороткой. 4) Для дифференциации биовара V. cholerae и биовара el-tor исследуют гемолитические свойства выделенной культуры, определяют ее чувствительность к полимиксину и бактериофагам. Биовар V. cholerae эритроциты барана не гемолизирует, чувствителен к полимиксину и бактериофагу С Мукерджи четвертого типа. Биовар el-tor вызывает гемолиз бараньих эритроцитов, устойчив к полимиксину, лизируется бактериофагом el-tor II. Окончательное заключение о выделенной культуре выдают через 36-48 часов. Для ретроспективной диагностики применяют серологический метод - реакцию агглютинации и реакцию непрямой гемагглютинации. Ускоренные методы диагностики: иммунофлюоресцентый;иммобилизация вибрионов О1 холерной сывороткой. Возбудитель сибирской язвы Лабораторная диагностика. Материал для исследования берут в соответствии с формой заболевания: содержимое карбункула, кровь, мокрота, рвотные массы, испражнения. Основные методы исследования- микроскопический и бактериологический. Сначала используют микроскопический метод. Для выявления капсулы препараты окрашивают по Граму, а также по Ребингеру. С целью выделения чистой культуры возбудителя материал высевают на МПА и МПБ, идентифицируют по отсутствию лецитиназной и фосфатазной активности, способности к капсулообразованию, ставят пробу с сибиреязвенным бактериофагом и пенициллином («жемчужное ожерелье»). Этот тест основан на способности В. anthracis в растущих культурах на средах, содержащих 0,1-0,05-0,5 ЕД пенициллина, образовывать после трех-шести часов инкубирования характерные шаровидные формы микроорганизмов, напоминающие «жемчужное ожерелье». Заражение лабораторных животных (биологический метод) производится для выделения чистой культуры и оценки се вирулентности. Для обнаружения бесклеточного сибиреязвенного антигена в трупном материале, кожевенном и меховом сырье широко используют реакцию термопреципитации по Асколи. Диагностическое значение имеет также кожная аллергическая проба с антраксином. Внутрикожное введение заболевшему этого вещества приводит к развитию на этом месте гиперемии и инфильтрации.В качестве экспресс-метода для диагнг сибирской язвы используют люминесцентно-серологический. Возбудители трихомикозов Возбудитель трихофитии Диагностика. Диагноз устанавливается на основании учета клинической картины поражения, морфологии гриба в волосе при микроскопическом исследовании в 20-30 %-ной щелочи и культуре гриба, полученной на среде Сабуро. Возбудитель микроспории Диагностика основывается на характерной клинической картине поражения волосистой части головы. Возбудитель эпидермофитии стоп Лабораторная диагностика основывается на обнаружении при исследовании в едкой щелочи нитей мицелия в чешуйках кожи, покрышках пузырьков, соскобах с глубоких частей пораженных ногтей и на характерных клинических симптомах и локализации высыпаний. Возбудитель криптококкоза Лабораторная диагностика. Исследуют спинномозговую жидкость, гной абсцессов, соскобы с грануляций, биоптаты тканей. При окраске по Граму криптококки отрицательны. Возбудитель хромомикоза Лабораторная диагностика. Микроскопически исследуют чешуйки, корочки, гной. В 10-15 %-ном растворе едкой щелочи грибы имеют вид овальных, округлых, многоугольных или неправильной формы клеток. Возбудитель ботулизма Лабораторная диагностика. Цель лабораторных исследований обнаружение типа ботулинического токсина и возбудителя ботулизма в материалах, взятых от больного. Ими могут быть рвотные массы, промывные воды желудка, кровь. Исследуются пищевые продукты, явившиеся причиной отравления; при пост-мортальном исследовании используется трупный материал. Бактериологический метод предполагает выделение чистой культуры на среде Китта-Тароцци, кровяном и сахарном агаре с последующей идентификацией по ферментативным и антигенным свойствам. Биологический метод связан с постановкой реакции биологической нейтрализации токсина соответствующей специфической антитоксической сывороткой, при этом устанавливают антигенный тип токсина. Белые мыши, защищенные специфическим типом антитоксина, остаются живыми после введения соответствующего токсина, тогда как контрольные животные без такой защиты погибают. Возбудитель кандидомикозов Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: кожные и ногтевые чешуйки, отделяемое пораженных участков слизистых оболочек, гной, кал, моча, кровь, спинномозговая жидкость, биоптаты тканей. Диагностика основывается на двух методах: микроскопическом с использованием мазков, окрашенных метиленовым синим, по Граму или другим способом; микологическом с посевом исследуемого материала на питательные среды (агар Сабуро, сусло-агар или кандида-агар). Получение только культуры Сandida при посеве патологического материала не дает права для диагноза кандидомикоза, за исключением выделения возбудителя из крови. Большое значение для диагностики кандидозов придается серологическим реакциям: реакция агглютинации, реакция преципитации, реакция связывания комплемента с растворимыми антигенами. Однако из-за перекрестных антигенов, общих с другими грибами, эти реакции не всегда информативны, поэтому в настоящее время используют реакцию иммунодиффузии, иммуноэлектрофореза, непрямой гемагглютинации и реакцию агглютинации латекса. Hеполные антигены и неполные антитела можно обнаружить в реакции торможения непрямой гемагглютинации и в реакции непрямой иммунофлюоресценции. Имеет место также диагностическое использование аллергических проб, реакции специфического лизиса лейкоцитов, дегрануляция базофилов. Возбудители дифтерии Лабораторная диагностика. Бактериологический метод основан на выделении чистой культуры и идентификации возбудителей по культурально-морфологическим, биохимическим и токсическим свойствам. Объектом для исследования служит отделяемое зева, носа, глаз, кожи и прочее, которое берут ватным тампоном и высевают на среду Клауберга или кровяной теллуритовый агар. Перечисленные среды содержат 0,04 % теллурита калия, который подавляет рост сопутствующей микрофлоры (стафилококки, стрептококки).Через 24-48 часов культивирования производят микроскопию мазков и дают предварительный ответ. Дифтерийные коринобактерии не всегда бывают морфологически типичными, в ряде случаев возбудитель принимает форму коротких палочек, расположенных не под углом, а беспорядочно, со слабовыраженной зернистостью. Кроме того, образование гранул волютина происходит не всегда и, следовательно, этот признак не является абсолютным. Наиболее достоверный метод-токсинообразование. Дифференциацию токсигенных и нетоксигенных штаммов производят по методу Оухтерлони (метод двойной иммунодиффузии в чашках Петри или метод преципитации в агаре). Он основан на способности дифтерийного экзотоксина вступать в соединение с антитоксином и образовывать преципитаты в виде стрел-усиков. Серологические реакции применяют для изучения коллективного иммунитета. Они включают: РПГА, отличающуюся высокой чувствительностью, проводимую с антительным диагностикумом; реакцию Шика, проводимую для определения индивидуальной невосприимчивости к дифтерийному токсину; реакцию нейтрализации цитотоксического действия дифтерийного токсина в культуре ткани; РИА; иммуноферментный анализ (ИФА). возбудитель столбняка Лабораторная диагностика. В основе диагностики обнаружение возбудителя или его токсина. Материалом служат взятые из раны кусочки омертвевшей ткани, пропитанные раневым экссудатом тампоны, мокрота или слизь из дыхательных путей, рубцы, оставшиеся после ранения. Сочетают бактериоскопию (мазки-отпечатки) и посевы на питательные среды. Перед посевом исследуемый материал (кусочки ткани) гомогенизируют в двойном объеме физиологического раствора и высевают на среду Китта-Тароцци. Для устранения сопутствующей микрофлоры инфицированные посевы 20 минут прогрева- ют при 80 °С. Для обнаружения токсина растертый в ступке исследуемый материал (или культуральную жидкость) выдерживают при комнатной температуре 1 час, после чего смешивают с противо-столбнячной сывороткой (1 мл экстракта плюс 0,5 мл разведенной сыворотки, со- держащей 200 МЕ в 1 мл). Смесь выдерживают 40 минут и вводят внутримышечно белым мышам. Контрольным животным исследуемый материал вводят без сыворотки. Используют также агглютинирующие и люминесцирующие сыворотки. возбудитель эпидемического возвратного тифа Лабораторная диагностика. Микроскопический метод основывается на обнаружении возбудителя в крови. Во время приступа лихорадки приготавливают мазок и толстую каплю крови, окрашивают их по методу Романовского-Гимза. Окрашенные спирохеты легко распознаются по характерной форме. Спирохету, благодаря се подвижности, можно увидеть и в неокрашенных мазках свежих препаратов крови, используя после разведения физиологическим раствором метод висячей капли, или при исследовании препарата в темном поле зрения.Серологические методы исследования (реакция агглютинации, pеакция связывания комплемента) имеют меньшее значение. возбудитель эндемического клещевого возвратного тифа Лабораторная диагностика. Решающим является обнаружение спирохет в крови больного. Методика исследования та же, что и при вшивом возвратном тифе, однако при данном заболевании количество возбудителей значительно меньше и их не всегда можно обнаружить. Особенно важное значение имеет биологический метод— заражение кровью больного морских свинок, восприимчивых к этой болезни (к возбудителям вшивого возвратного тифа морские свинки устойчивы). Серологические реакции не нашли широкого применения. Возбудитель брюшного тифа Лабораторная диагностика разработана на основе патогенеза болезни. На первой неделе заболевания, когда интенсивность бактериемии наиболее высока, применяется бактериологический метод - посев крови на среду Раппопорт или желчный бульон для выделения гемокультуры. На второй неделе брюшного тифа проводится серологическая диагностика для определения антител в сыворотке крови больного. С этой целью ставят реакцию агглютинации (реакция Видаля). Реакция Видаля может быть положительной только у больных, а и у переболевших вакцинированных, но у больных в разгар болез- ни находят О-Н-агглютинины, у привитых и переболевших только Н-агглютинины. Для серологической диагностики брюшного тифа и паратифов А и В применяют реакцию непрямой гемагглютинации с Vi - О-антигенами и, являющуюся более чувствительной, чем реакция Видаля. В период реконвалесценции, когда возбудители в большом количестве покидают организм с испражнениями и мочой, выделяют копро- и уринокультуру, высевая испражнения на висмут-сульфит агар и мочу на среду обогащения. Одним из современных методов диагностики являются иммуноферментный и иммунорадиометрический анализы. Возбудитель Бруцеллы Лабораторная диагностика проводится с использованием бактериологического и серологического методов. При бактериологическом методе выделяются уринокультуры, миелокультуры, но чаще всего - гемокультуры. Для этого взятую непосредственно от больного венозную кровь выссвают на сахар- ный или печеночный бульон. Бруцеллы растут очень медленно, их культуры обычно обнаруживают через 1-30 суток. При серологических исследованиях наиболее широко используют pеакции агтлютинации (Райта, Хеддльсона), пассивной гемагглютинации, реакцию связывания комплемента, реакцию Кумбса, иммуно- флюоресценции с использованием антиглобулиновых сывороток. Положительные результаты реакции агглютинации, реакции пассив- ной гемагглютинации указывают на активность процесса, а при хро- непрямой иммунофлюоресценции, напротив, свидетельствуют о воля текущих хронических формах демонстрируют низкие титры. Реакции Кумбса и непрямой иммунофлюростенции напротив свидетельствует о вяло текущих хронических инфекционных процессах и имеют большое диагностическое значение, особенно при других отрицательных реакциях. Широко используют в лабораторной диагностике аллергическую пробу с бруцеллином (реакцию Бюрне), дающую положительные результаты при латентном течении болезни и у привитых людей. Возбудитель бактериальной дизентерии Лабораторная диагностика основана бактериологических серологических исследованиях. Для бактериологического анализа у больных берут испражнения (обязательно до назначения этиотропных препаратов) или комочки слизи, гноя, крови в испражнениях и делают посев на чашки Петри с дифференциально-диагностическими средами Эндо, ЭМС, Плоскирева и на селенитовую среду, содержащую феноловые производные, которые тормозят рост сопутствующей микрофлоры. Через 18-24 часа инкубирования в термостате на чашках выбирают бесцветные лактозоотрицательные колонии и пересевают на скошенный агар для выделения чистой культуры, которую идентифицируют по биохимическим свойствам и антигенной структуре. Для серологической диагностики дизентерии используется ре- акция непрямой гемагглютинации (РHГА) с эритроцитарными диагностикумами. РНГА проводят повторно с интервалом не менее семи дней («парные сыворотки»). Диагностическое значение имеет нарастание титра антител вчетверо, выявляющееся с 10-12-го дня болезни. Возбудитель менингококка Лабораторная диагностика. Исследуемым материалом является спинномозговая жидкость, кровь, смыв с носоглотки. Применяют бактериоскопический, серологический методы диагностики. Бактериоскопический метод используют при микроскопии окрашенных по 1 раму и Леффлеру мазков из осадка спинномозговой жидкости. Выделение чистой культуры и ее идентификацию проводят на специальных средах с помощью тестов на оксидазную активность, ферментативные и антигенные свойства. Серодиагностику проводят, используя рeакции преципитации, связывания комплемента. Бактериологическое исследование связано с посевом на специальные среды – асцит-агар, асцит-бульон, сывороточные среды. Серологическая диагностика проводится с помощью реакции связывания комплемента, непрямой гемагглютинации. Возбудитель туберкулеза Материалом для исследования служат мокрота, гной, спинномозговая или плевральная жидкость, моча, испражнения, пунктаты лимфатических узлов. Нативный материал после обогащения исследования бактериоскопическим окрашиванием мазков по Цилю-Нильсену или люминисцентно с использованием ауромина. Бактериологический метод. Исследуемый материал после предварительной обработки 5 %-ной серной кислотой или 10 %-ным этидовым спиртом в течение 15-20 минут засевают на стандартную среду Левенштейна-Йенсена для выделения чистой культуры. Применяется также метод микрокультур Прайса, который позволяет вырастить микобактерии в течение трех-десяти дней. Биологический метод. В качестве высокочувствительной модели используют морских свипок, которым вводят нативный материал или выделенную чистую культуру подкожно, внутрибрюшинно или в головной мозг. Последний метод исследования дает наиболее быстрое развитие туберкулезной инфекции (через 10-12 дней). Животные погибают от генерализованного туберкулеза с поражени- ем периферических лимфатических узлов, легких, печени, селезенки, почек. Серологические методы. Реакция связывания комплемента, реакция непрямой гемаглютинации с эритроцитами барана, нагруженными полисахаридом или туберкулином, предназначена для вы- явления специфических антитсел в сыворотке больных туберкулезом. Кожная туберкулиновая (аллергическая) проба Манту - наиболее распространенная, высокочувствительная, объективная диагностическая реакция. Возбудитель сифилиса Лабораторная диагностика сифилиса слагается из двух методов: бактериоскопического и серологического. Для бактериоскопического исследования пользуются тканевой жидкостью из шанкра, пунктатом из лимфоузла. Полученный материал исследуют в затемненном поле зрения, где бледная трепонема выявляется в живом виде. Диагностически учитывают морфологи- ческие особенности возбудителя. Для серологической диагностики используют сыворотку больного. Проводят: комплекс серологических рсакций (реакция связывания комплемента - реакция Вассермана и две осадочные реакции: Кана, Закса-Витебского, или цитохолиевая); реакцию иммобилизации трепонем (РИТ), она положительна, если подвижность утратили 50% трепонем, и отрицательна, если менее 20 %; реакцию иммунофлюоресценции (РИФ); микрореакцию с кардиолипиновым антигеном для экспресс-диагностики сифилиса при массовых обследованиях населения. Возбудитель стафилакокка Лабораторная диагностика. В качестве исследуемого материала используют гной, мочу, кровь, мокроту, отделяемое слизистых оболочек; при токсикоинфекциях рвотные массы, промывные во- ды, испражнения. Используют бактериоскопический и бактериологический метод. При бактериоскопическом методе используют окраску по Граму, определяя в мазке типичные морфологические признаки. Несмотря на то, что стафилококки принадлежат к наиболее легко обнаруживаемым и распознаваемым коккам, при подтверждении диагноза возникают определенные трудности в связи со следующим: 1)стафилококки обладают большим разнообразием проявлений биологической активности, зависящей от разных, не всегда учитываемых факторов, а также выраженной морфологической широкой изменчивостью, в том числе и под влиянием антибиотиков; 2)стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры из группы условно-патогенных микробов, и наряду с непатогенными, патогенные стафилококки обитают в организме людей, распространяясь в нем весьма неравномерно. Например, применение антибиотиков в неактивных дозах способствует образованию л-форм стафилококков, которые, обладая не рядом нетипичных свойств, сохраняют основное - вызывать гнойновоспалительный процесс.Хронические стафилококковые инфекции чаще всего и вызываются л-формами возбудителя. Существует также мнение, что белый стафилококк, не вызывающий коагуляции плазмы и не типирующийся специфическими фагами, то есть не обладающий классическими признаками патогенности, ответственен за гнойно-воспалительные осложнения в хирургии. Бактериологический метод. Для выделения чистой культуры производят посев на желточно-солевой, молочно-солевой, кровяной агары. Идентификацию проводят по гемолитическим свойствам, лецитовителлазной активности, плазмокоагулирующей и гиалуронидазной способности и характеру пигмента. Обязательным тестом на болезнетворность является также подтверждение способности расщеплять магнит в анаэробных условиях. Для выявления источников инфекции проводят фаготипирование. В связи с широким распространением антибиотикоустойчивых штаммов определяют чувствительность к антибиотикам. Профилактика и лечение. Возбудитель стрептококка Лабораторная диагностика. Исследуемым материалом являются мокрота ,гнойное отделяемое, кровь ,моча, испражнения. Используют бактериоскопический , бактериологический, серологический методы исследования. Бактериоскопический метод предполагает окраску мазков по Грам (грамположительны)и наблюдение характерного расположения бактерий попарно и в виде цепочек. Бактериологический метод связан с выделением чистой культуры на кровяном агаре и сахарном бульоне с ее последующим идентификацией. Серологическая диагностика заключается в определении в сыворотке крови О-стрептолизина, антистрепногиалуронидазы, стрептокиназы , в том числе с люминесцентными сыворотками. Возбудители пищевых токсиноинфекций. Лабораторная диагностика. Из лабораторных методов наиболее важное значение имеют бактериологический и серологический. Бактериологическому методу исследования могут подвергаться испражнения больных, рвотные массы, промывные воды желудка, моча, кровь, желчь. Из серологических методов применяют реакцию агглютинации и непрямой геагглютинации. Возбудитель гонококковой инфекции Материалом для исследования - гнойное отделяемое уретры, влагалища, шейки матки, предстательной железы и других органов, пораженных гонококком. Бактериологические метод. Включает посев на безасцитные среды при следующих условиях: pH от 7,2 до 7,4, содержание углекислого газа в атмосфере 10-20%, температура 37°С. Все колонии гонококка имеют круглые очертания, ровные края, блестящую поверхность. При микроскопии по методу Грама - грамотрицательными кокки, беспорядочно рассыпанными по периферии скопления и более густо расположенными в центре. Вырабатывают цитохромоксидазу (выявляется путем заливки поверхности 1% водным раствором диметилпарафенилендиамина -покраснение колоний гонококка, а затем почернение), расщепляет глюкозу до кислоты. ПЦР при подозрении гонореи. Процесс диагностики гонореи основан на копировании определенного участка ДНК, соответствующего заданным параметрам. Серологический метод. Включают различные способы регистрации реакций «антиген-антитело». Для выявления гонококковой инфекции используется реакция Борде-Жангу (РСК Возбудитель газовой анаэробной инфекции Возбудители - Clostridium perfringens, С. novyi, С. septicum, С. histolyticum, С. difficile и др. Материалом для исследования служат кусочки пораженной и некротизированной ткани, жидкость отеков, кровь. При пищевых токсикоинфекциях, вызванных клостридиями, исследуют рвотные массы, промывные воды желудка, кал. Используют микроскопический, бактериологический и биологический методы исследования. Микроскопический метод. Готовят мазки - отпечатки из патологического материала, окрашивают по Граму и Бури-Гинсу. При обнаружении в мазках по Граму большого количества грамположительных грубых или полиморфных палочек, а при окраске по Бури-Гинсу капсул можно предположить, что у больного газовая анаэробная инфекция. Используют также люминесцентную микроскопию. Мазок-отпечаток обрабатывают иммунофлуюоресцентной видоспецифической сывороткой и изучают в люминесцентном микроскопе. Вокруг микробных клеток обнаруживают желто-зеленое свечение. Бактериологический метод. Патологический материал растирают в ступке с кварцевым песком и готовят 10% гомогенат на физиологическом растворе. Делят его на 2 части. Первую часть гомогената прогревают на водяной бане при температуре 80ºС в течение 20-30 минут для уничтожения вегетативной микрофлоры. Жидкость из отека и кровь центрифугируют 30 минут при 3000 об. мин. Для посева используют осадок. Исследуемый материал высевают на следующие питательные среды: кровяной агар Цейсслера, желточный агар, в глубину столбика висмут - сульфит агара, на бензидиновый агар, среду Виллиса-Хоббса, СКС, в 5 пробирок со средой Китта-Тароцци, 4 из которых перед посевом кипятят в течение 20 минут, а затем быстро охлаждают. 1 пробирка остается без прогрева. Целесообразно засевать материал для исследования в мясопептонный агар и сахарный агар, которыми заполняют пастеровские пипетки. Посевы помещают в анаэростаты и ежедневно наблюдают рост на плотных питательных средах. Посевы в жидких питательных средах выращивают в обычных условиях в термостате в течение 15 суток. Чистую культуру анаэробных микробов идентифицируют на основе: 1) морфологических и тинкториальных свойств (готовят мазки, окрашивают по Граму для выявления грубых или полиморфных грамположительных палочек, среди которых могут встречаться споровые формы); 2) подвижности (готовят препарат «висячая капля»); 3) биохимических свойств (засевают в среды Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, мальтозой, сахарозой, глицерином, салицином, а также лакмусовым молоком, желатином, свернутой сывороткой, изучают лецитиназную активность на желточном агаре, ставят пробу на каталазу; 4) аэротолерантности (высевают чистую культуру на сектор кровяного агара и культивируют 24-48 часов при 37°С в аэробных условиях). Выделенную культуру микробов изучают путем люминесцентной микроскопии на способность продуцировать токсин. На предметное стекло с микробами наносят каплю акридинового оранжевого, накрывают покровным стеклом и исследуют в иммерсионной системе люминесцентного микроскопа. Если культура токсигенная - палочки зеленого цвета. Палочки красного цвета или зеленого с красными участками указывают на слабую токсигенность или её отсутствие. Биологический метод. Исследуемый материал, взятый от больного с подозрением на раневую газовую анаэробную инфекцию, вводят внутримышечно или внутрибрюшинно белым мышам или морским свинкам. У зараженных животных при наличии анаэробов развивается картина анаэробной инфекции. Возбудитель лептоспироза Материалом для лабораторных исследований служат кровь, спинномозговая жидкость, моча. В течении первые 5 дней применяют метод микроскопии крови, посевы крови и заражение лабораторных животных. С пятого дня и позднее проводят серологические исследования при помощи реакции микроагглютинации, С десятого дня микроскопируют мочу. Метод прямой микроскоnии. Поскольку лептоспиры окрашиваются с трудом, для выявления их в нативном состоянии производят микроскопирование крови, СМЖ и мочи с применением контрастного темного поля. В положительных случаях в препаратах обнаруживают серебристого цвета активно двигающиеся лептоспиры. Бактериологический метод. Для выделения чистой культуры лептоспир применяют водно-сывороточную питательную среду с добавлением в нее кроличьей сыворотки. Лептоспиры растут медленно, не изменяя внешнего вида питательной среды, поэтому посевы, сохраняемые в термостате не менее двух месяцев, проверяют многократно, через каждые пять-семь дней, микроскопируя в темном поле. Биологический метод. Наилучшей экспериментальной моделью для лептоспирозной инфекции являются морские свинки, крольчата и золотистые хомяки. Заражение производят внутрибрюшинно или подкожно, а также нанесением материала на скарифицированную кожу. В положительных случаях животные спустя недельный срок peагируют повышением температуры, уменьшением массы тела, адинамией. При тяжелом течении заболевания у них появляется желтуха, и животные погибают. Серологический метод. Классическим и специфическим методом распознавания лептоспироза надо считать реакцию микроагглютинации (PMA) с живыми культурами лептоспир. Кроме этого, применяются: реакция связывания комплемента, реакция пассивной гемагглютинации, иммуноферментный метод (ИФА). Разработана pеакция иммуноадгезивной гемагглютинации (РИАГА). Серологический метод (ИФА) Это иммунологическое исследование, в основе которого лежит реакция “антиген-антитело”. Метод позволяет оценить качественные и количественные показатели возбудителя в крови РИФ Реакция иммунофлюоресценции основана на свойстве иммунных комплексов подсвечиваться иммунофлюоресцентным веществом. НРИФ( IgM, IgG) Метод непрямой иммунофлюоресценции используется не так часто. Он позволяет определить тип антител в различных титрах сыворотки крови. Иммуноглобулины типа М говорят об острой стадии процесса, а антитела класса G - признак хронического течения или ранее перенесенного заболевания. ПЦР Основа диагностики - обнаружение участков нуклеиновых кислот генетического материала возбудителя, что делает постановку диагноза максимально точной. Паразитологический метод Суть исследования заключается в непосредственном обнаружении возбудителя в биологическом материале. Для этого проводится исследование крови, слюны, спинномозговой жидкости, биоптатов. Обнаружить микроорганизмы можно с помощью специального окрашивания. Метод имеет неоднозначную оценку. Аллергологический метод. Проводится аллергопроба с внутрикожным введением токсоплазмина. Если реакция положительная - это говорит о том, что пациент действительно болеет и требует более тщательного обследования. Проба становится положительной, начиная с четвертой недели болезни. |