№17 тема микробиология. № 17 тема микробиология. Классификация и морфобиологические свойства шигелл
 Скачать 23.26 Kb.
|
|
Классификация и морфо-биологические свойства шигелл: Бактериальная дизентерия – полиэтиологичное заболевание. Возбудители бактериальной дизентерии или шигеллёзов относятся к семейству Enterobacteriaceae, роду Shigella. По ферментативным антигенным свойствам они подразделяются на 4 группы: А, В, С и D, в которые входят 4 вида: гр. А - S. dysenteriae (маннитнегативные), гр. В - S. flexneri (маннитпозитивные), гр. С - S. boydii (маннитпозитивные), гр. D - S.sonnei (медленно ферментирующие лактозу и сахарозу на 2-е сутки). По отечественной классификации у S. dysenteriae различают 10 сероваров: I серовар - шигеллы Шига, II - шигеллы Шмитца-Штутцера, III-VII - шигеллы Ларджа-Сакса, VIII-X - провизорные, т. е. временные. У S. flexneri различают 6 сероваров: VI серовар - это шигеллы Ньюкастл. Серовары различаются еще по групповым и типовым антигенам: 1а,1в,2а,2в,3а,3в,3с,4а,4в, 5х+,6х+у+ У S. boydii различают 15 сероваров. S. sonnei однородны в антигенном отношении. Шигеллы сходны между собой по морфологии, тинкториальным свойствам. Это грамотрицательные бактерии, палочки с закругленными концами, типичные энтеробактерии, неподвижны, спор и капсул не образуют. Многие из них имеют половые пили и пили общего типа. Факультативные анаэробы. Растут на простых питательных средах при оптимуме рН среды 7,2, Т роста 37°. На плотных средах образуют колонии S- формы, шигеллы Зонне – S и R формы. На дифференциально-диагностических средах Плоскирева, Эндо (Левина): колонии в первые 2-е суток лактозоотрицательные, неокрашенные, голубоватые или розовые. В бульоне шигеллы растут с диффузным помутнением (S форма); колонии R - формы, образуют придонный осадок, среда остается прозрачной. Ферментативные свойства: все представители рода шигелл декарбоксилируют глютаминовую кислоту, не декарбоксилируют лизин и фенилаланин, не ферментируют мочевину, малонат натрия, глицерин, не образуют сероводород (исключение, слабо могут шигеллы Флекснера); углеводы ферментируют до кислоты (исключение, серовар шигелл Флекснера). Не растут на ацетатной и цитратной средах. S. dysenteriae: ферментируют глюкозу до кислоты, не ферментируют лактозу, сахарозу, маннит, вариабельны в отношении дульцита и образования индола, не декарбоксилируют орнитин. S. flexneri: ферментируют глюкозу и маннит, не ферментируют лактозу, сахарозу, дульцит, вариабельны в отношении индола, не декарбоксилируют орнитин. S. boydii: ферментируют глюкозу и маннит, не ферментируют лактозу и сахарозу, вариабельны в отношении дульцита, ксилоза, не декарбоксилируют орнитин. S. sonnei: ферментируют глюкозу и маннит, на 2-5 сутки лактозу и сахарозу, не ферментируют дульцит, не образуют индол, декарбоксилируют орнитин; вариабельны в отношении ферментации рамнозы и ксилозы (различают 4 хемовара). Окончательная идентификция шигелл осуществляется путем изучения антигенной структуры. Факторы вирулентности шигелл: Шигеллы образуют эндотоксин, энтеротоксин и цитотоксин. Эндотоксин освобождается после разрушения шигелл, действует нейротропно и увеличивает проницаемость сосудов. Энтеротоксин и цитотоксин - белки, энтеротоксин по механизму действия напоминает холероген и токсин холерного вибриона, но он менее токсичен. Цитотоксин препятствует синтезу белка в рибосомах клеток кишки. Особенности экологии, эпидемиологии и патогенеза заболеваний, вызываемых шигеллами. Шигеллёз – антропозное заболевание, но в питомниках от персонала установлено заражение обезьян. Источником инфекции является больной человек и бактерионоситель. Шигеллёз - инфекция с фекально-оральным механизмом заражения. Передача происходит алиментарным, контактно-бытовым путями, через контаминированные предметы (особенно среди детей дошкольного возраста). Имеет значение величина инфицирующей дозы (101-102). Попав в кишечник, шигеллы прикрепляются фимбриями к клеткам эпителия толстой кишки, проникают и размножаются в них без проникновения в кровь. Интоксикация организма обусловливается всасыванием через слизистую оболочку, главным образом толстого кишечника, токсинов шигелл. Шигеллы Зонне образуют энтеротоксин, способны размножаться в воде, молоке. Это обусловливает возможность пищевых токсикоинфекций, особенно у детей. Постинфекционный иммунитет видо- и типоспецифический, местный и общий, непрочный, непродолжительный. Обусловлен антителами М, A, G. При местном иммунитете имеют значение секреторные иммуноглобулины А, образуемые лимфоидными клетками слизистой оболочки кишки. Они покрывают ее и препятствуют прикреплению и проникновению шигелл в клетки эпителия. Материалы и методы микробиологической диагностики дизентерии. Основной метод исследования - бактериологический - направлен на выделение копрокультуры определенного вида, серовара шигелл. Исследуемый материал следует забирать до лечения; испражнения 1-2 г, рвотные массы, промывные воды кишечника, от трупа кусочки печени, селезенки, мезентериальные железы, отрезок толстой кишки с содержимым, объекты внешней среды - пищевые продукты, вода. Испражнения забирают с помощью ректальных тампонов из прямой кишки. Для взятия материала из судна, с пеленки можно использовать стерильные шпатели, ложки. Материал для посева доставляют в стерильных стекляных баночках или пробирках, содержащих на 1/3 консерванты - 30% раствора глицерина, 3% раствора хлорида натрия или боратную смесь, если время между сбором материала и посева может превысить 1-2 часа. Серологический метод является вспомогательным, ретроспективным при стертых формах заболевания, имеет значение при диагностике заболевания у детей и обследовании контактных. Исследуют сыворотку крови, выявляют антитела постановкой РА или РПГА с помощью обычных или эритроцитарных диагностикумов Флекснера и Зонне. Диагностический титр РА у детей 1:100, у взрослых 1:200 при дизентерии Флекснера, при дизентерии Зонне у детей 1:50, у взрослых 1:100. Аллергологический метод - вспомогательный, удобен для выявления хронических форм шигеллёза ставят внутрикожную пробу Цуверкалова с дизентерином (гидролизат из шигелл Флекснера и Зонне, белок). У детей до 3 месяцев эта проба отрицательна. В 20-25 % она может быть положительна у здоровых. Экспресс диагностика. РИФ - реакцией иммунофлюоресценции - выявляют шигеллы в мазках из надосадочной жидкости испражнений с помощью поливалентных флюоресцирующих дизентерийных сывороток. Этапы выделения и идентификация копрокультуры шигелл. Дифференциация шигелл. 1 этап: для посева выбирают слизисто-гнойные комочки и делают: прямой посев на две чашки со средой Плоскирева, причем одна из них должна содержать левомицетин (тетрациклин) мл среды, для выделения антибиотикозависимых шигелл. Т.к. серовар 1 шигелл dysenteriae плохо растут на среде Плоскирева, то дополнительно производят посев на чашку со средой Эндо или Левина.Для обогащения делают посев в отношении 1:5 в пробирку с селенитовой средой с последующим высевом через 24-48 часов из нее на чашки с вышеназванными цветными дифференциально-диагностическими средами. На II день: чашки вынимают из термостата и не вооруженным глазом или отбирают для выделения чистой культуры - копрокультуры - лактозоотрицательные колонии: прозрачные, бесцветные, голубоватые, розоватые; шигеллы Зонне в R-форме дают мутные колонии. Отвивают на комбинированные среды Ресселя (Олькеницкого) или короткий "пестрый ряд": скошенный агар, среды Гисса с глюкозой и лактозой. На III день: просматривают изменение цвета столбика и косяка, выделяют и отбирают подозрительные на шигеллы, т.е. ферментирующие глюкозу до кислоты или до кислоты и газа, и не ферментирующие лактозу. Для изучения морфологии и окраски по Граму из культур делают мазки. Проверяют подвижность культур в препарате "висячая" капля. В случае обнаружения S. dysenteriae, S. flexneri и S. boydii устанавливают серовар, а у S. flexneri дополнительно подсеровар по РА с типовыми и групповыми монорецепторнными сыворотками. Выпускают смесь 1 дизентерийных сывороток, включающих поливалентную сыворотку Флекснера и Зонне; смесь 2, включающую поливалентные сыворотки S.dysenteriae и S.boydii. Также выпускают поливалентные сыворотки Флекснера, Бойда, Лардж-Сакса и к провизорным шигеллам, видовую сыворотку Зонне, а также типовые и групповые. На III этапе выдают отрицательный ответ при отсутствии подозрительных колоний на чашках. При положительной РА копрокультуру для изучения ферментативных свойств засевают на "пестрый ряд": МПБ, среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой, дульцитом, ксилозой, орнитином. Проверяют фаголизабельность дизентерийным поливалентным фагом, ставят антибиотикограмму. На IV этапе: учитывают результаты "пестрого ряда", определения фаголизабельности и антибиотикограммы. Проводят идентификацию и дифференциацию и выдают окончательный ответ о виде и сероваре выделенных шигелл. Антипичные или неагглютинабельные шигеллы проверяют посевом на 5% лактозу, малонат натрия, ацетатную среду Козера, дульцит, глицерин, салицин, лизин, глутаминовую кислоту, фенилаланин. Специфическая профилактика и терапия шигеллеза: Специфическая профилактика (по эпид. показаниям) проводится инактивированной вакциной Шигеллвак, содержащей липополисахариды S. sonnei. Контактным проводят фагопрофилактику поливалентным дизентерийным фагом, содержащим смесь стерильных фильтратов фаголизатов S. flexneri 1, 2, 3, 4 и 6 сероваров и S. sonnei. Специфическую терапию проводят дизентерийным поливалентным фагом в таблетках перорально или жидким ректально в клизмах. При хронических формах дизентерии Флекснера и Зонне для стимулирования иммуногенеза в комплексе с антибиотиками вводят инактивированную лечебную спиртовую вакцину Чернохвостовой из шигелл Флекснера и Зонне. Неспецифическая профилактика заболеваний, вызываемых шигеллами заключается в активном выявлении больных и бактерионосителей, обследовании бактериологическим методом декретированного контингента, соблюдении санитарно-гигиенических норм и правил, санитарном просвещении населения. Классификация возбудителей иерсиниоза. Возбудители иерсиниоза относятся к сем. Еnterobacteriaceae, род Yersinia, виды Y. enterocolitica, Y. pseudotuberculosis. Морфо-биологические особенности иерсиний. Клетки иерсиний имеют овоидную форму (коккобациллы), склонны к полиморфизму. Грамотрицательны, подвижны при Т < 30° и неподвижны при 37°. Температурные пределы роста иерсиний варьируют от 0 до 39°. Наиболее благоприятная температура для выделения Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis 22-29°; границы рН для роста 5,8-8,0; оптимум рН=6,9-7,2. Хорошо растут на плотных питательных средах, образуя мелкие, блестящие, часто выпуклые с голубым оттенком колонии. Полиморфизм колоний выражен слабо, при старении отмечается сливной рост. На среде Эндо колонии имеют розоватый оттенок. При культивировании на жидких средах иерсиний вызывает помутнение среды. Y. enterocolitica ферментирует глюкозу и сахарозу без газообразования; образует индол, уреазоположительна. Факторы вирулентности иерсиний: Токсические свойства Y. enterocolitica связаны с ЛПС клеточной стенки (эндотоксин), некоторые сероварианты (О3 и О8) образуют термостабильный энтеротоксин. Могут синтезировать продукты, напоминающие экзотоксины. Факторами вирулентности считают адгезины и инвазины, облегчающие взаимодействие с кишечным эпителием низкомолекулярные протеины, ингибирующие активность бактерицидных факторов, и энтеротоксин. Особенности экологии, эпидемиологии и патогенеза заболеваний, вызываемых иерсиниями: Источником инфекции при иерсиниозе служат грызуны, собаки, кошки, домашние сельскохозяйственные животные. В Европе основной источник иерсиниоза - свиньи, а в Японии - ракообразные и рыба. Заражение происходит фекально-оральным путем, при употреблении в пищу недостаточно термически обработанных зараженных продуктов или продуктов, хранившихся при пониженной температуре. Большая заболеваемость иерсиниозом регистрируется в странах с теплым климатом, подъем заболеваемости отмечают в осенне-зимний сезон. Y. enterocolitica вызывает иерсиниоз – инфекцию, сопровождающуюся диареей, энтеритом, псевдоаппендицитом, иногда септицемией или острым артритом. Основная форма - энтероколит с диареей, болями в животе и лихорадкой. Бактерии проникают в слизистую оболочку тонкой кишки, размножаются в пейеровых бляшках и мигрируют в брыжеечные лимфоузлы. Основной защитный барьер организма – кислая среда желудка. Иммунитет: непродолжительный; антитела сохраняются в сыворотке крови в течение 8-18 месяцев после перенесенной инфекции. Материалы и методы микробиологической диагностики иерсиниозов. У больного с подозрением на иерсиниоз исследуют испражнения, кровь, рвотные массы, дуоденальное содержимое, мочу. Бак. методом культуру дифференцируют от прочих энтеробактерий по биохимическим признакам и серологическим свойствам в РА. Для серодиагностики используют РА, РНГА. Агглютинины обнаруживаются через 8-10 дней с начала заболевания. На I этапе бактериологического исследования, исследуемый материал засевается на среду Эндо, Левина, при необходимости, на селективную среду (CIN-arap). На II этапе - отбирают изолированные колонии, по культуральным признакам соответствующие Y. enterocolitica: лактозоотрицательные мелкие, выпуклые колонии. Часть пересевают на среду Клиглера (Олькеницкого), из другой части колонии делают мазок, окрашивают по Граму – грамотрицательные палочки (коккобациллы). Часть колоний пересевают на скошенный агар для накопления чистой культуры. На III этапе оценивают рост на среде Клиглера (Олькеницкого) - H2S-, глюкоза+, лактоза-, мочевина+. Готовят мазок, окрашивают по Граму для контроля чистоты культуры. Производят посев для выявления основных биохимических свойств: H2S, мочевина, лактоза, глюкоза, подвижность, индол. Ставится антибиотикограмма. На IV этапе оценивают биохимическую активность культуры. Ставится РА с О-антисыворотками, РА с монорецепторными сыворотками. При необходимости ставятся дополнительные тесты на углеводы. По результатам проводится окончательная идентификация культуры, даются рекомендации по рациональной антибиотикотерапии. Неспецифическая профилактика заболеваний, вызываемых иерсиниями. Профилактика иерсиниозов заключается в проведении дератизации, защите продуктов и воды от грызунов, соблюдении санитарно-гигиенических режимов на предприятиях общественного питания, детских садах, школьных столовых. Специфическая профилактика не разработана. Специфическая терапия не разработана. Для лечения используют антибиотики: у взрослых - фторхинолоны, тетрациклины; у детей - бета-лактамы (цефалоспорины). |