лекции микробы. Курс лекций по учебному материалу V семестра специальная микробиология. Вирусология. Одесса2012 Лекция 11

• Название: Курс лекций по учебному материалу V семестра специальная микробиология. Вирусология. Одесса2012 Лекция 11
• Анкор: лекции микробы.doc
• Дата: 22.12.2017
• Размер: 3.28 Mb.
• Имя файла: лекции микробы.doc
• Тип: Курс лекций; #12569
• страница: 12 из 38

Лабораторная диагностика. Основным методом диагностики заболеваний, вызываемых нехолер­ными патогенными вибрионами, является бактериологический с использованием таких селективных сред, как TCBS, Мак-Конки и других. Принадлежность выделенной культуры к роду Vibrioопределя­ют на основании ключевых признаков бактерий этого рода. Видовую принадлежность устанавливают с учетом признаков, указанных в таблице 2.

КАМПИЛОБАКТЕРЫ И ХЕЛИКОБАКТЕРЫ

К роду Campylobacterотносятся аэробные или микроаэрофильные подвижные вибриоидные грамотрицательные бактерии. Род Campylobacterвключает 13 видов. В 1991г. из него в качестве самостоятельного вычленен род Helicobacter(2 вида — Н.pyloriи H.mustelae, последний выделен от хорьков).

Кампилобактериоз — инфекционное заболевание, характеризующееся острым началом, лихорад­кой, поражением желудочно-кишечного тракта. Исследования, проведенные в последние годы, показа­ли, что в ряде стран кампилобактерии являются возбудителями острых кишечных заболеваний не реже (а иногда и чаще), чем сальмонеллы, шигеллы и ротавирусы, и вызывают — в зависимости от сезона и особенностей региона — от 3 до 15% ОКЗ.

В инфекционной патологии человека и животных важнейшую роль играют виды C.jejuni, C.coli, C.lari, вызывающие ОКЗ сходного клинического течения (кампилобактериозы). На основании способ­ности к росту при относительно высокой температуре инкубации (42 °С) они объединены в группу термофильных кампилобактерии. Среди прочих мезофильных видов кампилобактерии, предпочитаю­щих умеренную температуру инкубации (37 °С), известную роль в патологии человека играет С.fetus, зачастую являющийся возбудителем артритов, менингитов, васкулитов; виды C.concisusи C.sputorumрасцениваются как комменсалы полости рта, возможно, играющие роль в патогенезе пародонтита, а виды C.fennelliae, C.cinaediи C.hyointestinalisвстречаются в толстом кишечнике человека при иммуно-дефицитах той или иной природы. Helicobacterpyloriрасценивается как этиотропный агент, ассоции­рующийся с язвенно-эрозивными поражениями желудка и двенадцатиперстной кишки.

Кампилобактерии — грамотрицательные, тонкие, спирально изогнутые палочки размером 0,2—0,3x0,5—5,0, иногда до 8,0мкм. Могут иметь один полный (или чуть больше) виток спирали, могут быть С- или S-образной формы или напоминать крылья чайки при соединении двух клеток в короткую цепочку. В старых культурах могут иметь кокковидную или гиперспирализованную форму. Спор и капсул не образуют, имеют один—два полярно расположенных жгутика, обеспечивающих им высокую подвижность со стремительным, «штопорообразным» поступательным характером движе­ния. Жгутики могут быть в 2—3 раза длиннее клетки. Подвижность лучше видна при темнопольной или фазовоконтрастнои микроскопии. Кампилобактерии хорошо красятся всеми анилиновыми краси­телями. Содержание Г+Ц в ДНК 30-38 мол%.

Н.pyloriнесколько крупнее других видов и имеет форму палочки в виде спирали или «дуги вола» Не проходит через поры фильтра диаметром 0,65мкм. Через 5-7 дней культивирования клетки приобретают овоидную форму. Содержание Г+Ц составляет 35,8-37,1 мол%

Кампилобактерии являются хемоорганотрофами. Будучи термофилами, способны к росту при 37—44 °С, но не при 25 "С. Большинство кампилобактерии являются микроаэрофилами и капнофилами, т. е. требуют для культивирования пониженного содержания кислорода и повышенного — углекислого газа. Оптимальная атмосфера для культивирования патогенных видов кампилобактерии имеет следую­щий состав: О₂ — 5%, СО₂ — 10%, азот — 85%. Некоторые кампилобактерии при выращивании

могут проявлять себя как облигатные анаэробы. Энергию кампилобактерий освобождают из аминокис­лот и трикарбоновых кислот, но не из углеводов, к окислению и ферментации которых не способны.

Для культивирования кампилобактерий чаще используют специальные питательные среды, в осно­ву которых положены среды для выделения бруцелл. Однако в эти среды необходимо добавлять вещества, повышающие аэротолерантность кампилобактерий и снижающие окислительно-восстанови­тельный потенциал среды (кровь, тиогликолат натрия, метабисульфит натрия, пируват натрия, суль­фат закисного железа). Обычно используют мясные, печеночные, кровяные среды, часто в них добавляют антибиотики (новобиоцин, циклогексамид, бацитрацин, триметоприм) для подавления со­путствующей микрофлоры. На питательных средах рост кампилобактерий наблюдается обычно через 2-4 сут. На жидких питательных средах наблюдается диффузное помутнение с трудноразбиваемым выраженным осадком. На полужидких средах они вырастают в виде диффузного мутного кольца толщиной 1-4мм под поверхностью среды. Если кампилобактерий растут в условиях строгого анаэробиоза, отмечается помутнение всей среды.

На плотных средах с кровью кампилобактерии образуют два типа колоний: а) округлые неправиль­ной формы, с ровными краями, диаметром 2-8мм, бесцветные или светло-серые, прозрачные, гомо­генные (напоминают капли воды), при длительном культивировании могут приобретать серебристо-ма­товый оттенок; б) колонии правильной округлой формы, с ровными краями и диаметром 1-2мм, с блестящей выпуклой поверхностью, прозрачные, гомогенные, в старых колониях центр более плот­ный, чем периферия, и может образовываться желтоватый пигмент. Консистенция колоний невязкая, зона гемолиза отсутствует.

Кампилобактерии оксидазоположительны, желатин и мочевину не гидролизуют, реакции с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра отрицательны. Они продуцируют цитохромоксидазу, не растут на среде Ресселя; по способности образовывать каталазу делятся на 2 группы: каталазопозитивные (С.fetus, C.jejuni, C.coli, H.pylori) и каталазонегативные (C.sputorumи C.concisus). Различные их виды могут или не могут: образовывать сероводород, расти в присутствии 1% и 3,5% NaCl, бриллиантового зеленого, налидиксовой кислоты, цефалотина, гидролизовать гиппурат натрия, образовывать пигмент желтого цвета. На основании изучения этих свойств строится межвидовая дифференциация (табл. 3).

Свойства некоторых видов родов Campylobacter и Helicobacter
Вид	Окси- даза	Ката- лаза	Подвиж- ность	Рост при 26°С	Рост при 37°С	Рост при 42°С	Гиппу- рат Na	Цефа- дотин	Уре- аза	Рост на среде Ресселя, на простой среде
С. fetus	+	+	+	+	+	-	-	ч	-	-
C.jejuni	+	+	+	-	+	+	+	У	-	-
C.coll	+	+	+	-	+	+	-	У	-	-
C.lari	+	+	+	-	+	+	-	У	-	-
H.pylori	•f	+	+	-	+	?	-	Ч	+	-

Примечание + — положительный признак, - — отрицательный признак; > — непостоянный признак, У — устойчив, Ч — чувствителен

H.pylori — лофотрих или монотрих, иногда в популяции присутствуют обе формы На агаровых средах малоподвижен или неподвижен. Растет на средах для кампилобактерий, но предпочтение отдает шоколадному агару, образуя на нем колонии диаметром 0,5-1,Омм. На 10%-ном кровяном агаре отмечается слабый гемолиз. Для роста требуются микроаэрофильные условия или атмосфера, обогащенная С0₂. В аэробных или анаэробных условиях не растет.

H.pyloriоксидазо- и каталазопозитивен; сероводород не образует, гиппурат не гидролизует, имеет уреазу. Устойчив к хлориду трифенилтетразолия в концентрации 0,4—1,0 мг/мл; устойчив к 0,1%-ному раствору селенита натрия, в меньшей степени — к 1%-ному глицину.

Кампилобактерий имеют О-, Н- и К-антигены. C.jejuniи C.coli, наиболее часто вызывающие заболе­вание у человека, серологически гетерогенны. В зарубежной литературе описано 55 серогрупп, различа­ющихся по термостабильному О-антигену. Установлено, что штаммы, выделенные от человека, дают реакцию агглютинации только с сывороткой от людей, а сывороткой от иммунизированных животных они не агглютинируются; можно предположить, что идет формирование «человеческих» штаммов.

Кампилобактерий обладают сложным комплексом термостабильных и термолабильных факторов патогенности. Клеточная стенка содержит эндотоксин, действие которого напоминает действие эндо-

токсина сальмонелл и иерсиний. Некоторые штаммы способны продуцировать энтеротоксин, действие которого напоминает действие холерогена, а также присущий только кампилобактериям цитотоксин уникального строения, воздействие которого на слизистую оболочку толстой кишки человека приво­дит к изменениям дизентериеподобного характера.

При комнатной и, в особенности, при пониженной температурах резистентность кампилобактерий к действию факторов внешней среды весьма высока — в пищевых продуктах, водопроводной и сточных водах, молоке, моче, испражнениях они могут сохранять жизнеспособность в течение 1-5 нед Кампило­бактерий очень чувствительны к нагреванию свыше 50 °С, действию прямого солнечного и ультрафиоле­тового света и воздуха, высыханию, низким и высоким значениям рН среды, чувствительны к действию дезинфицирующих веществ в рабочих концентрациях

Эпидемиология. Кампилобактерийи (особенно термофильные) обнаруживаются у всех видов ди­ких и домашних животных и птиц, многие из которых являются их естественными резервуарами (крупный и мелкий рогатый скот, куры, скворцы, воробьи, попугаи и др ) Основным резервуаром кампилобактерий следует считать сельскохозяйственных животных, дополнительными — больных лю­дей и домашних животных, диких городских птиц и грызунов Основной путь передачи инфекции — пищевой (сырое молоко, битая птица, говядина, свинина), дополнительные — водный (речная и морская вода, загрязненные испражнениями животных) и бытовой (грубые нарушения санитарно-ги­гиенических норм при уходе за больными людьми и животными, а также при кулинарной обработке мясных продуктов) Кампилобактериозу свойственна выраженная летняя сезонность с почти полным отсутствием заболеваемости в зимние месяцы Чаще заболевание регистрируется в виде спорадиче­ских случаев, изредка — в виде более или менее крупных вспышек После перенесенного заболева­ния у людей, не леченных антибиотиками, бактерии с испражнениями выделяются достаточно допго в течение 2-5 нед, а иногда — до 10 недель.

Патогенез и клиника. У людей кампилобактериоз протекает в основном в виде энтеритов и энтероколитов, хотя описаны заболевания и другой локализации: септицемия, эндокардит, перикар­дит, менингит, поражения внекишечной локализации чаще отмечаются у людей старшего возраста или у больных со сниженной резистентностью организма

Инкубационный период 1-10 дней, чаще 1-5 дней Начало заболевания чаще острое, реже — подострое Обычно наблюдается умеренно выраженная интоксикация и диарея (до 10-20 раз в сутки), боли в нижней части живота В половине случаев отмечается наличие крови в испражнениях реже' — обезвоживание Чаще возникает и тяжелее протекает заболевание у детей в возрасте от 1 до 3 ле г Патогенез и степень тяжести находятся в прямой зависимости от факторов патогенности, имеющихся у данного штамма кампилобактерий, а также от количества бактерий, попавших в организм

У больных с язвенной болезнью желудка или двенадцатиперстной кишки и с хроническими гастритами из биоптатов слизистой оболочки стабильно выделяется Н pylon(в 60-90% случаев), что позволяет предположить ведущее значение данного возбудителя в возникновении этих заболевании

Иммунитет. Кампилобактери высокоиммуногенны Антитела появляются в крови в ранние сроки заболевания и в достаточно высоких титрах Титр до 1 5000 бывает уже на 5-й день заболевания достигнув максимума, титры антител в течение длительного времени медленно снижаются и через месяц могут быть еще достаточно высокими

Лабораторная диагностика. Для диагностики кампилобактериозов используют микроскопичес­кий, бактериологический и серологический методы. Микроскопический метод носит ориентировочный характер и может быть успешным только при наличии кампилобактерий в исследуемом материале (чаще в испражнениях) в больших количествах Тонкий мазок испражнений, зафиксированных на огне, окрашивают 1%-ным водным раствором основного фуксина в течение 10-20 с, затем промывают водой Так как для окрашивания большинства других бактерий требуется 2-5 мин, то в мазке за 10-20 с успевают окраситься обычно только кампилобактерий В нативном материале они имеют характерную форму (S-образные короткие цепочки в виде «крыльев чайки», реже — С-образные с оттянутыми концами)

Основной метод диагностики — бактериологический. Материал для посева — испражнения и ти содержимое прямой кишки, иногда — кровь, а также вода, молоко, другие пищевые продукты смывы с предметов и т д Посевы делают на специальные питательные среды, создают микроаэрофильные условия и инкубируют при 37 °С и 42 °С После получения типичных колоний культуру идентифици­руют по совокупности признаков

Серологический метод исследования играет весьма важную роль при широкомасштабных эпидеми­ологических исследованиях, но в диагностике кампилобактериозов его роль невелика. Реакция агглю­тинации ставится с аутоштаммами, можно с живой музейной культурой, но с формалинизированной культурой результаты получаются более четкими. Наиболее чувствительными являются РИФ и ИФМ. Могут также использоваться РСК, латекс-агглютинация, иммуноэлектрофорез, РПГА. Каждая из этих реакций имеет определенные достоинства, но тем не менее не позволяет достаточно надежно диагнос­тировать кампилобактериозы.

Специфическая профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана; дру­гие профилактические мероприятия включают строгое соблюдение ветеринарно-санитарных и санитарно-гигиенических норм переработки, транспортировки, хранения пищевых продуктов, правил личной гигиены, защиту водоемов от загрязнения сточными водами (особенно животноводческих хозяйств).

Для лечения кампилобактериозов используют антибиотики, наиболее эффективны гентамицин, эритромицин, менее эффективны канамицин, левомицетин, полусинтетические пенициллины.

Наиболее эффективным препаратом для лечения хронического гастрита и язвенной болезни желуд­ка или двенадцатиперстной кишки является Де-Нол (коллоидный субцитрат висмута), который соче­тают с трихополом (метронидазолом) и ампициллином для усиления терапевтического действия Де-Нол — специфический этиотропный препарат, избирательно действующий только на Н..pylori.
РЕКОМЕНДОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

1. Медична мікробіологія, вірусологія та імунологія : підручник для студ. Вищ. Мед. Навч. заклад. / За редакцією В.П.Широбокова/ Видання 2-е. – Винниця : Нова книга, 2011. – 952 с.

2. Протченко П.З. Загальна мікробіологія, вірусологія та імунологія. Вибрані лекції: Навч. посібник . – Одеса: Одес. Держ. мед. ун-т, 2002. – 298 с.

3. Пятк³н К. Д., Кривоше¿н Ю.С. М³кроб³олог³я. - К : Высшая школа, 1992. - 432 с.

Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. - М : Медицина, 1983. - 312 с.

4. Борисов Л.Б., Козьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / под ред. Борисова Л.Б. – Г. : Медицина, 1993. – 232 с.

5 Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник под ред. А.А.Воробьева. – М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 691 с.

6. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология /ред. Л.Б. Борисов, А.М. Смирнова. - М: Медицина, 1994. - 528 c.