пробиотическая биотехнология. Лабораторная 14. Лабораторная работа 14. Определение пребиотической активности полисахаридов

• Название: Лабораторная работа 14. Определение пребиотической активности полисахаридов
• Анкор: пробиотическая биотехнология
• Дата: 21.10.2021
• Размер: 0.61 Mb.
• Имя файла: Лабораторная 14.docx
• Тип: Лабораторная работа; #252895

Лабораторная работа № 14. Определение пребиотической активности полисахаридов.
Пребиотики — это неперевариваемые организмом-хозяином пищевые ингредиенты, которые оказывают благотворное влияние благодаря их избирательному метаболизму в желудочно-кишечном тракте. Главная ценность пребиотиков для здоровья человека в их направленном действии. Подпитывая необходимую для хорошей работы кишечника микрофлору, они тем самым одновременно угнетают размножение патогенных бактерий.

Равные дозы разных пребиотиков отличаются разной (большей или меньшей) способностью стимулировать рост и жизнедеятельность полезной микрофлоры и, соответственно, разным полезным эффектом. Для количественной оценки функциональной актив­ности и сравнения пребиотиков существует понятие "пребиотический индекс" (I_преб). I_преб отражает отношение роста пробиотика на среде с использованием пребиотика в качестве источника углеводов к росту на непребиотическом субстрате, таком как глюкоза, используемый в качестве контроля.
Цель: Определить пребиотическую активность полисахаридов с использованием штаммов лактобацилл

Задачи:

1. 
   Определить пребиотический индекс полисахаридов: пектин, инулин, гуаровая камедь, геллановая камедь.
   
2. 
   Оформить протокол лабораторного исследования.
   
3. 
   Ответить на контрольные вопросы.
   

Задания:

1. 
   Нарисовать схему проведения анализа в соответствии с нижеприведенным алгоритмом:
   

1. 
   Одну колонию штамма лактобактерий перенести в 10 мл бульона MРС, инкубировать 24 ч, при 37°С.
   

2. Приготовить среду МРС (1) (с 2% глюкозой в качестве источника углеводов).

3. Приготовить среду МРС (2) (без глюкозы) с добавлением 2% а) инулина, б) пектина, в) гуаровой камеди, г) геллановой камеди (по отдельности).



4. 1 мл посевного материала со штаммом лактобактерий добавить в каждую колбу МРС (1) и МРС (2) (а, б, в, г) и инкубировать 24 ч, при 37°С.

5. Каждый образец серийно разбавить физиологическим раствором для получения серии десятикратных разведений (до 10^-8).

6. Через 24 ч сделать поверхностный посев 100 мкл каждого образца из разведений 10^-5, 10^-7, 10^-8 (по 3 повторности) используя МРС агар. Инкубировать 24 – 48 ч, при 37°С.

7. Сделать подсчёт КОЕ, затем используя приведенную ниже формулу определить пребиотический индекс каждого полисахарида:
I _преб = КОЕ _{в среде с пребиотиком}/КОЕ _{в контрольной среде с глюкозой}

2. 
   Результаты оформить в следующих таблицах:
   

Таблица 1 – Среднее количество колониеобразующих единиц выросших на среде с различными источниками углеводов (полисахаридами)

штамм	Среднее КОЕ/мл на среде с глюкозой	Среднее КОЕ/мл на среде с инулином	Среднее КОЕ/мл на среде с пектином	Среднее КОЕ/мл на среде с гуаровой камедью	Среднее КОЕ/мл на среде с геллановой камедью

Таблица 2 – Пребиотический индекс пребиотиков-полисахаридов

штамм	Пребиотический индекс инулина	Пребиотический индекс пектина	Пребиотический индекс гуаровой камеди	Пребиотический индекс геллановой камеди

Для того, чтобы заполнить таблицы, необходимо:

А) выбрать один из вариантов (один вариант - 3 студента).

Б) В таблицу необходимо вставить среднее КОЕ/мл штамма лактобактерий на среде с глюкозой, инулином, пектином, гуаровой камедью, геллановой камедью. Они складываются из полученных значений, которые надо вычислить по данным таблицы 3.

В) Определить индекс пребиотической активности полисахаридов по вышеприведенной формуле.

I_preb выше 1 означает, что пребиотик стимулирует рост микроорганизмов в сравнении с непребиотическим субстратом. Если индекс близок к 1, это указывает на низкую эффективность оцениваемого пребиотика.

Таблица 3 – Количество колониеобразующих единиц выросших на среде МРС агар с различными источниками углеводов (число жизнеспособных бактерий ×10⁷ КОЕ/мл)

	Вариант
	1							2								3									4
	Lactobacillus rhamnosus GG			Lactobacillus casei 1				L.brevis АВ2				L.brevisАВ4				L.plantarumT-4				L.plantarumT-5				Lactobacillus casei 2					Lactobacillus casei 432
	повторность							повторность								повторность									повторность
	1	2	3		1	2	3		1	2	3		1	2	3		1	2	3		1	2	3			1	2	3		1	2	3
На среде МРС с глюкозой	20	15	16		9	8	10		21	25	17		14	9	7		22	26	27		25	23	27			8	7	6		22	20	24
На среде МРС с инулином	81	75	78		36	33	33		60	65	58		28	23	30		44	40	36		52	55	46			31	27	38		80	88	93
На среде МРС с пектином	65	63	58		30	28	26		50	55	45		32	28	27		42	35	40		49	50	45			27	25	23		73	78	83
На среде МРС с гуаровой камедью	45	40	38		14	13	12		30	34	29		21	19	19		31	28	34		44	40	45			10	11	15		43	40	37
На среде МРС с геллановой камедью	30	28	32		16	20	23		31	25	28		18	16	25		15	17	13		33	27	30			16	19	22		23	17	20

Оцените пребиотическую активность полисахаридов в отношении исходных лактобацилл-пробиотиков. Сделайте вывод, какой из полисахаридов является более активным пребиотиком?

3. 
   Контрольные вопросы:
   

1. Как определить пребиотический эффект пищевых ингредиентов путем вычисления пребиотического индекса?

2. Какие питательные среды, лабораторная посуда и оборудование необходимы для проведения этого анализа?

3. Для чего в пробиотические продукты питания добавляют пребиотические компоненты?

Разбалловка:

Задание 1 – 6 баллов

Задание 2 – 4 баллов

Задание 3 – 5 баллов

Итого: 15 баллов