Лабораторная работа 4. Лабораторная работа Определение содержания белка

• Название: Лабораторная работа Определение содержания белка
• Дата: 25.04.2022
• Размер: 21.31 Kb.
• Имя файла: Лабораторная работа 4.docx
• Тип: Лабораторная работа; #494289

Лабораторная работа 4.

Определение содержания белка

1. Количественное определение содержания белка  методом лоури

Ход работы:

1. 
   Используем стандартный раствор белка и дистиллированную воду в 4 пробирках готовят  растворы белка различной концентрации (таблица 1). Пятая проба не содержит белка и служит контролем на реактивы:
   

Таблица 1 – Приготовления растворов с необходимой концентрацией белка для калибровочного графика

№ пробы	Концентра- ция белка, мг/мл	Объем стандартного раствора белка, мл	Объем дистиллированной воды, мл	Общий объем исследуемой пробы , мл
1	0,063	0,1	0,3	0,4
2	0,120	0,2	0,2	0,4
3	0,183	0,3	0,1	0,4
4	0,250	0,4	0	0,4
5(К)	0	0	0,4	0,4

2. 
   Во все пробирки добавляем  по 2 мл реактива №3, перемешивают, спустя 10 мин добавляют 0,2 мл реактива №4 Фолина — Чокальтеу. Реакционную смесь перемеши­вают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин.
   
3. 
   Спектрофотометрический измеряем окраску. Измеряем оптическую плотность.
   

4. 
   Пользуясь калибровочной кривой, определяем неизвестную концентрацию белка в исследуемом растворе, соответствующую измеренному значению оптической плотности.
   

2. Спектрофотометрическое определение содержания белка по методу брэдфорд

Ход работы:

1. 
   Сток-раствор: 6 мг растворили в 5 мл дистиллированной воды.
   

Таблица 2 – Приготовления растворов с необходимой концентрацией белка для калибровочного графика

№ пробирки	Концентрация белка мкг/мл	Объем сток-раствора мкл	Объем воды мкл
1	50	22	978
2	100	44	956
3	200	166	830
4	400	330	660
5	800	660	330
6	1000	833	166

Для определения содержания белка используем калибровочную кривую. По калибровочной кривой определяем содержание белка на 1 мл раствора.

2. 
   Для проведения анализа взяли из раствора белка 50 мкл и смешали с 1,5 мл реактива Бредфорд.
   
3. 
   Пробирки с реакционной смесью хорошо встряхнули и оставилипри комнатной температуре на 10 мин.
   
4. 
   Содержимое пробирки переливаем в стеклянную кювету и затем с помощью спектрофотометра или фотоэлектроколлориметра измеряем оптическую плотность раствора.
   

D₁=0,0112 C₁=15

D₂=0,0226 C₂=25

D₃=0,217 C₃=375