Диффтерия Коклюш. Лабораторнаядиагностикадифтерии и
 Скачать 2.91 Mb.
|
|
Лабораторная диагностика дифтерии и коклюша КЛАССИФИКАЦИЯ КОРИНЕБАКТЕРИЙ ПОРЯДОК Actinomycetales СЕМЕЙСТВО Corynebacteriaceae РОД Corynebacterium ВИДЫ ВОЗБУДИТЕЛЬ ДИФТЕРИИ C. diphtheriae БИОВАРЫ: gravis mitis intermedius C. pseudotuberculosis верхние дыхательные пути поверхность кожи урогенитальный тракт C. pseudodiphtheriticum верхние дыхательные пути поверхность кожи C. xerosis поверхность кожи урогенитальный тракт C. аmycolactum урогенитальный тракт Corynebacterium non diphtheriae Среда Клауберга II •Питательный агар •Теллурит калия •Глицериновая смесь •Лаковая кровь Кровяной теллуритовый агар (КТА) •Питательный агар •Теллурит калия •Дефибринированная или гемолизированная кровь СРЕДЫ ДЛЯ ПЕРВИЧНОГО ПОСЕВА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Колонии C. diphtheriae на среде Клауберга Биовар gravis Биовар mitis ОСНОВНЫЕ ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ C. diphtheriae Коринетоксагар предназначен для определения токсигенности дифтерийных микробов. Состав: панкреатиче ский гидролизат минтая, натрия хлорид, натрия карбонат, агар, 20 % сыворотки крови крупного рогатого скота или сыворотки лошадиной. Ат Ат Ат Ат Ат Аг (экзотоксин) Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг Токсигенная культура Токсигенная культура Нетоксигенные культуры Диск, пропитанный антитоксином диагностическим дифтерийным «Усы» преципитации (Аг+АТ) РНГА (РОПГА) для выявления дифтерийного токсина Диагностикум эритроцитарный дифтерийный антительный жидкий для определения токсина в РНГА – моноклональные антитела, связанные с эритроцитами. Штаммы коринебактерий дифтерии засевают в жидкую питательную среду и инкубируют при 37° C в течение 18 часов, используют надосадочную жидкость среды культивирования Через 2,5 - 3,5 часа производят учет результатов реакции. Допускается - через 18 - 24 часа. Положительная проба Пизу на наличие цистиназы В составе питательной среды: цистин и уксусно - кислый свинец. Цистиназа расщепляет цистин, выделяется сероводород , который взамодействуя с индикатором, образует серно - кислый свинец - соединение темно - коричневого цвета. Инкубация 37 ̊С – 24 часа Ускоренный метод - большое количество культуры – 3 часа. Проба на наличие уреазы C. diphtheriae не имеет уреазы В составе питательной среды: мочевина и фенолрот (крезолрот). Уреаза расщепляет мочевину с образованием аммиака и углекислоты. Повышается pH среды - покраснение индикатора. При отсутствии фермента среда остается желтой. Ускоренная проба Заксе: 37 ̊С – 30 мин. Бульон с мочевиной: 37̊С – 24 часа Определение активности нитратредуктиазы Тест позволяет определить способность восстанавливать нитраты в нитриты. Способность к восстановлению N0 3 в N0 2 определяют культивированием в МПБ 24 часа при 37 ° C, содержащем 1% раствор KN0 3 . Для определения нитритов в среду добавляют несколько капель реактива Грисса. Этот реактив состоит из сульфаниловой кислоты и α- нафтиламина. При взаимодействии реактива Грисса с нитритами образуется азокраситель , и при положительном результате наблюдают появление красного окрашивания. Вид Разложение Р ед укц и я ни тр ат ов цистина глюкозы сахарозы крахмала мочевины C. diphtheriae gravis + К - К - + C. diphtheriae mitis + К - - - + C.pseudo- diphtheriticum (C.hofmani) - - - - + + (-) БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД Исследуемый материал (отделяемое слизистой зева, носа и из места атипичной локализации Тампоны должны быть доставлены в лабораторию не позднее 3-х часов с момента взятия материала. 1 день Зев Нос 24 часа 2 день Постановка проб на: токсигенность, цистиназу 48 часов /3 день Посев на: сахарозу глюкозу крахмал мочевину 72 часа / 4 день Учет свойств Определение биохимического варианта Учет День исслед-я Исследуемый материал Что сделать Результат 1 день Отделяемое слизистой ротоглотки, носа (и, при необходимости, из мест атипичной локализации) на тампонах Произвести посев на чашку с Коринебакагаром. 2 день Рост колоний на чашке с Коринебакагаром (24 часа) 1) Описать морфологию колоний 2)Изучить и зарисовать мазок из материала колоний, окраска по Леффлеру 3) Поставить пробы на: - токсигенность, - цистиназу 4) Провести пересев на скошенный сывороточный агар 1) ______________________________ _______________________________ _______________________________ _______________________________ _______________________________ Протокол. Лабораторная диагностика дифтерии Выполнил _____________________________ Проверил ___________ 3 день 1. Пробы на а) токсигенность б) цистиназу 2. Рост чистой культуры на скошенном сывороточном агаре 1)Учесть результаты проб, зарисовать 1) Описать характер роста. 2) Приготовить мазок-препарат, окрасить по Нейссеру, зарисовать 3) Провести посев на среды Гисса с сахарозой, глюкозой, крахмалом, тест с мочевиной 1. а) б) Цистиназа « » 1) Рост в виде «шагреневой кожи» 2) 4 день Рост культуры на средах Гисса с сахарозой, глюкозой, крахмалом, тест с мочевиной. Изучить биохимические свойства Сахароза Глюкоза Крахмал Уреаза « » Заключение: Выполнил _____________________________ Проверил ___________ Показания для применения. Лечение больных дифтерией. Гастон Рамон (1886-1963) Культуру бактерий, продуцирующих экзотоксин, выращивают в жидких питательных средах для накопления токсина, а затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел. К фильтрату добавляют 0,3- 0,4% раствора формалина и помещают в термостат при температуре 37-40 °С на 3-4 нед. до полного исчезновения токсических свойств. дифтерийный анатоксин Вакцины, содержащие дифтерийный анатоксин • АКДС • АДС-анатоксин • АДС-М- анатоксин • АД-М-анатоксин • Д.Т. Вакс (дифтерия, столбняк) • БУБО-Кок (дифтерия, столбняк, коклюш, гепатит В) Тетракок Тетракок - вакцина для комбинированной профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита у детей с 2-мес. до 6 лет; 1 доза вакцины Тетракок (0,5 мл) содержит: •очищенный дифтерийный анатоксин, •очищенный столбнячный анатоксин •Bordetella pertussis, •инактивированные вирусы полиомиелита 1,2,3 типов, •гидроокись алюминия, формальдегид, фенолэтанол. Пентаксим ® содержит антигены дифтерийного и столбнячного анатоксина, компоненты клеточной стенки возбудителя коклюша, инактивированный вирус полиомиелита 1,2,3 типов и капсульные полисахариды гемофильной палочки тип b. Разовая доза составляет 0,5 мл. Профилактика у детей от 3-х месяцев до 3 лет 11 месяцев 29 дней. Инфанрикс ИПВ - ацеллюлярная вакцина для профилактики: Дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита Состав: ДT, СT, 3 Ag коклюшного микроба (КT+ФГA+ПРT), 3 инактивированных вируса полиомиелита (тип 1, 2, 3) Инфанрикс Пента - ацеллюлярная вакцина для профилактики: Дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита, гепатита В Состав: ДT, СT, 3 Ag коклюша (КT+ФГA+ПРT), 3 инактивированных вируса полиомиелита (тип 1, 2, 3), очищенный HBsAg Инфанрикс Гекса -ацеллюлярная вакцина для профилактики: Дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита, гепатита В, Hib - инфекции Состав: ДT, СT, 3 Ag коклюшного микроба (КT+ФГA+ПРT), 3 инактивированных вируса полиомиелита (тип 1, 2, 3), очищенный HBsAg, коньюгат капсульного полисахарида Hib Б О Р Д Е Т Е Л Л Ы РОД Bordetella ВИДЫ B. pertussis B. parapertussis B. bronchiseptica B. avium Мазок из чистой культуры B. рertussis, окраска по методу Грама Рост колоний B. рertussis на кровяном агаре Забор материала от больного Борде — Жангу среда плотная питательная среда для культивирования гемоглобинофильных бактерий, представляющая собой картофельно- глицериновый кровяной агар. Среда Казеиново-угольный агар (КУА) кислотный гидролизат казеина глубокой степени расщепления крахмал растворимый уголь активированный дрожжевой диализат калий фосфорнокислый однозамещенный магний хлористый кальций хлористый медь сернокислая кислота глутаминовая цистеин агар микробиологический Вакцины, содержащие коклюшный компонент Протокол. Лабораторная диагностика коклюша Исследуемый материал Что сделать Результат Мазок-препарат из культуры B. pertussis, окрашенный по методу Грама Изучить морфологию (демонстрация), зарисовать. Колонии B. pertussis на КУА Изучить характер роста (демонстрация). ______________________ ______________________ ______________________ ______________________ ______________________ ______________________ ______________________ ______________________ Выполнил _____________________________ Проверил ___________ |