Лекция 1, 2 класс морф физиол м.о.. Лекция 1 Введение в предмет. Классификация микроорганизмов
 Скачать 1.76 Mb.
|
|
жидкой питательной среде состоит из нескольких фаз: 1. Исходная стационарная фаза – начинается сразу после посева культуры на жидкую питательную среду и продолжается 1 – 2 часа. 2. Лаг – фаза, или фаза задержки размножения – характеризуется началом интенсивного роста клеток, но скорость их деления невелика. Обе первые фазы связаны с адаптацией бактерий к пит-ой среде, увеличением массы клеток и активизацией ферментных систем. 3. Лог – фаза – экспоненциальная, отличается максимальной скоростью размножения клеток и увеличения бактериальной популяции. (5-6 час). Бактерии делятся каждые 20-40 мин. 4. Фаза отрицательного ускорения – бактериальные клетки становятся менее активными, удлиняется время генерации. Это обуславливается истощением источников питания, накоплением продуктов обмена, дефицитом кислорода. 5. Стационарная фаза . Наступает равновесие между количеством клеток, находящихся в состоянии покоя, погибающих и вновь образующихся. 6. Гибель клеток бактерий. 10 час до нескольких недель. Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными краями или неровными краями ( S и R - формы ), различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий. Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают ее, например синегнойная палочка ( Pseudomonas aeruginosa ) окрашивает в синий цвет. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. Так, колонии « чудесной палочки» имеют кроваво-красный пигмент, растворимый в спирте. Существуют пигменты, нерастворимые ни в воде, ни в органических соединениях. Наиболее распространены среди м.о. такие пигменты, как каротины, ксантофиллы, меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного, коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксиддисмутазой и пероксидазами защищают м.о. от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием. Вид, форма, цвет и другие особенности колоний на плотной питательной среде могут учитываться при идентификации бактерий, а также отборе колоний для получения чистых культур. В промышленных условиях при получении биомассы микроорганизмов с целью приготовления антибиотиков, вакцин, диагностических препаратов, эубиотиков культивирование бактерий и грибов осуществляют в ферментерах при строгом соблюдении оптимальных условий для роста и размножения культур. Культивирование бактерий. Бактерии выращивают на естественных и искусственных питательных средах. Естественные среды ( на основе мяса, молока, рыбы и др.) имеют несбалансированное соотношение компонентов, их состав точно не известен. Искусственные питательные среды включают вещества в строго определенных соотношениях с учетом потребностей данного вида в питательных веществах, ростовых добавках, солях. Питательные среды должны быть стерильными и иметь, помимо необходимых для роста бактерий компонентов, оптимальные значения рН, окислительно-восстановительного потенциала, осмотического давления. Классификация питательных сред. Среды различаются: По консистенции - плотные, полужидкие, жидкие. По составу - простые и сложные. По источнику – естественные и синтетические (искусственные) По назначению – специальные, элективные, дифференциально-диагностические, транспортные, обогащения. Основой плотной питательной среды являются гелеобразные вещества: агар-агар (2-3 %), желатин (10 -15 %), которые добавляют к жидким питательным средам (МПБ), получая таким образом мясопептонный агар (МПА). Простые питательные среды применяют для выращивания многих бактерий. Сложные питательные среды включают дополнительные компоненты – сыворотку крови (сывороточный агар), кровь (кровяной агар), сахар (сахарный бульон). На кровяном агаре бактерии, продуцирующие гемолизин, образуют колонии с зоной гемолиза. Определенные виды бактерий выделяют на элективных (избирательных) средах. Элективной средой для стафилококка является желточно-солевой агар (ЖСА), холерного вибриона – щелочной МПА, дифтерийной палочки - свернутая сыворотка. Дифференциально-диагностические среды (Гиса, Эндо, Левина, Плоскирева) содержат индикатор, меняющий цвет при изменении рН в результате расщепления бактериальными ферментами углеводов питательных сред, что позволяет дифференцировать бактерии с различными ферментативными свойствами. С помощью сред Плоскирева и Эндо можно по цвету колоний отличить кишечную палочку от шигелл дизентерии в зависимости от их действия на лактозу. Одним из бактериологических методов исследования является выделение чистых культур бактерий Объекты окружающей среды, включая и материал больного ( гной, мокрота, фекалии), обычно содержат смесь различных микробов. С целью их обнаружения и определения видовой принадлежности (идентификации) применяют бактериологическое исследование (бактериологический метод), которое заключается в посеве проб исследуемого материала на питательные среды для получения (выделения) чистой культуры и последующей ее идентификации. Выделение чистой культуры производят поэтапно в течение нескольких дней, для чего вначале используют механическое разобщение бактерий на плотных питательных средах ( посев штрихом, шпателем на несколько чашек Петри). На следующий день получают отдельные изолированные колонии. После описания культуральных свойств различных типов колоний (размер, цвет, форма, края), выросших на чашке с плотной питательной средой, делают пересев из каждого типа колоний на скошенный агар для накопления чистой культуры. На третий день чистую культуру начинают идентифицировать по различным свойствам - морфологическим, тинкториальным, ферментативным, антигенным и др. При выделении чистых культур анаэробов посевы исследуемого материала выращивают в анаэробных условиях на специальных средах в анаэростатах, исключающих доступ свободного кислорода. Особенности культивирования риккетсий и хламидий. Риккетсии и хламидии - облигатные внутриклеточные паразиты, размножаются в цитоплазме и ядре инфицированных клеток. Они не расту на искусственных питательных средах, используемых для обычных бактерий. Для культивирования риккетсий и хламидий применяют куриные эмбрионы, культуры клеток с пониженным метаболизмом, а также чувствительных животных. Риккетсии можно культивировать путем инфицированных ими переносчиков возбудителей инфекций - вшей, блох, клещей. Особенности культивирования грибов и простейших. Грибы по типу питания - гетеротрофы, по отношению к кислороду – аэробы и факультативные анаэробы. Растут в широких диапазонах температур (оптимальная температура 25-30 С), имеют половой и бесполый способы размножения. Грибы выращивают на сусле-агаре или жидком сусле, среде Сабуро, Чапека. Рост и накопление культуры грибов происходит в течение нескольких суток. Для выделения культуры грибов можно исследуемым материалом заражать лабораторных животных. Простейшие имеют органы движения (жгутики, реснички, псевдоподии), питания (пищеварительные вакуоли). По типу питания они могут быть гетеротрофами Илии аутотрофами. Размножаются бесполым и половым путем. Некоторые простейшие имеют сложный жизненный цикл, сопровождающийся сменой форм развития, полового и бесполого размножения, образуют цисты. Многие простейшие (дизентерийная амеба, лямблии, трихомонады, лейшмании, балантидии) могут расти на питательных средах, содержащих нативные белки и аминокислоты. Для их культивирования используются также культуры клеток, куриные эмбрионы и лабораторные животные. Литература: Прозоркина НВ. Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии. Учебное пособие. Ростов-на-Дону. Феникс. 2002. Основы медицинской бактериологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Шуба ГМ. М. 2001. |