микра. Метод бумажных дисков с антибиотиком (дискодиффузионный метод)

• Название: Метод бумажных дисков с антибиотиком (дискодиффузионный метод)
• Анкор: микра
• Дата: 15.06.2022
• Размер: 15.01 Kb.
• Имя файла: микра.docx
• Тип: Документы; #592371

Диффузионные методы основаны на диффузии антибактериального препарата (АБП) из носителя в плотную питательную среду, инокулированную микроорганизмом, и регистрации диаметра зоны ингибирования (задержки) роста исследуемого микроорганизма.

• Метод менее чувствителен и менее точен, чем метод серийных разведений, но на практике применяется чаще из-за своей простоты.

Метод бумажных дисков с антибиотиком (дискодиффузионный метод).

• Для проведения этого метода используют стандартные диски, содержащие определенное количество антибиотиков, и стандартную питательную среду

• На поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности.

• Помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика.

• Инкубируют при уcловиях, благоприятных для каждого конкретного микроорганизма.

• Измеряют диаметры зон задержки роста вокруг диска в миллиметрах (с учетом диаметра диска).

• Оценивают результат по специальной таблице путем сопоставления диаметра зон задержки роста испытанной культуры с пограничными значениями диаметра зоны в таблице

. • Исследуемую культуру относят к одной из трех категорий: чувствительная, умеренночувствительная и устойчивая

Е-тест (E-test или эпсилометрический метод) Метод близок по технологии постановки к методу бумажных дисков.

• В качестве носителя используется узкая полоска полимера (0.5х6.0 см), на которую нанесен градиент концентраций АБП (от минимальных до максимальных). Значения концентрации АБП в каждом участке полоски нанесены на наружной (обращенной к исследователю) поверхности.

• Ингибирование роста микроорганизма вокруг полоски носителя происходит в зоне, где концентрация антибиотика, диффундирующего из носителя, выше МПК.

• В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Етеста получают значение МПК.

Е-тест сочетает простоту постановки метода бумажных дисков и точность

метода серийных разведений

: • Позволяют количественно оценить чувствительность выделенного микроорганизма к антибактериальным средствам и определить МПК препарата

• Для определения величины МПК заданные концентрации антибиотиков вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма. После инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста.

• Основаны на использовании двукратных последовательных разведений концентраций АБП от максимальной к минимальной

Метод серийных разведений в жидкой питательной среде (бульоне)

Существует 2 варианта данного метода: макрометод (пробирочный) и микрометод (планшетный). Макрометод .

• Тестирование проводят в пробирках в конечном объеме 1 мл для каждого разведения.

• Питательный бульон разливают по 0,5 мл в каждую пробирку.

• Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов:

• Приготовление двукратных серийных разведений АБП:

• Инокуляция: по 0,5 мл микробной суспензии с концентрацией микроорганизма 106 вносят в каждую пробирку с 0,5 мл соответствующего разведения АБП. Конечная концентрация микроорганизма в каждой пробирке 5 х105 КОЕ/мл.

• Контроль – пробирка с бульоном и культурой микроорганизма (контроль роста). Отрицательный контроль – пробирка с бульоном (контроль стерильности).

• Инкубирование: все пробирки, закрытые пробками, или колпачками, инкубируют при условиях, обеспечивающих рост испытуемых микроорганизмов.

• Учет и интерпретация результатов: пробирки с посевами просматривают в проходящем свете. Рост культуры в пробирке с АБП сравнивают с контрольной пробиркой.

- наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность.

‐по мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается

. • Определение МБК: из нескольких последних пробирок с задержкой роста делают посев петлей на сектора чашки Петри. За МБК, которая, как правило, на несколько разведений меньше МПК, принимают концентрацию препарата в последней пробирке, посев из которой не дал роста.

• Недостаток метода: низкая производительность – применение ограничивается исследованиями небольшого числа микроорганизмов.

Микрометод

•Процедура проведения испытания аналогична таковой при использовании макрометода

•Величина конечного объема – до 0,2 мл

•Наличие соответствующего оснащения лаборатории: планшет на 96 лунок со стерильными крышками, многоканальных пипеток

• Преимущества метода: - высокая производительность - возможность длительного хранения заранее приготовленных планшет - экономия расходных материалов.

Метод серийных разведений в агаризованной среде

• Принцип проведения испытания аналогичен методу разведений в бульоне

• Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов:

• Приготовление двукратных серийных разведений АБП

• Агаризованную среду расплавляют и охлаждают до температуры 45-50° С.

• Приготовление чашек с агаризованной средой и разведениями АБП: смешивают агаризованную среду и растворы АБП непосредственно в чашке Петри

• Инокуляция и инкубирование: бактериологической петлей переносят 1-2 мкл суспензии исследуемых микроорганизмов на поверхность агаризованной среды

. • На поверхности агара образуется пятно диаметром 5-8 мм. После подсыхания чашки переворачивают и инкубируют при условиях, благоприятных для роста исследуемых микроорганизмов.

• Учет и интерпретация результатов: аналогично методу разведения в бульоне. Чашки Петри помещают на темную, не отражающую свет поверхность. За МПК принимают концентрацию АБП, вызвавшую полное ингибирование видимого роста.

Преимущества метода: на одной чашке можно определять чувствительность нескольких микроорганизмов.