Методичка. Методичка_ДП_ВЭЖХ-2. Методические указания по выполнению лабораторной работы предназначено для студентов факультета промышленной технологии лекарств спхфа по дисциплине аналитической химии, обучающихся по направлениям подготовки 18. 04. 01 Химическая технология и19. 04. 01
 Скачать 365.94 Kb.
|
|
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ХИМИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Кафедра аналитической химии Методические указания по выполнению лабораторной работы ИДЕНТИФИКАЦИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИБАЗОЛА И ПАПАВЕРИНА В ТАБЛЕТКАХ «ПАПАЗОЛ» МЕТОДОМ ВЭЖХ Санкт-Петербург 2019 год Методические указания по выполнению лабораторной работы предназначено для студентов факультета промышленной технологии лекарств СПХФА по дисциплине аналитической химии, обучающихся по направлениям подготовки 18.04.01 «Химическая технология» и 19.04.01 «Биотехнология» (уровень высшего образования – бакалавриат). В методических указаниях по выполнению лабораторной работы приведены порядок выполнения лабораторной работы, обработка и представление результатов анализа, форма отчётов о выполненных работах. Составитель: Генералова Ю.Э. Одним из методов идентификации и количественного определения компонентов в смеси является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. При разработке методики анализа подбор условий осуществляют исходя из физических и физико-химических свойств аналитов, доступности реактивов и расходных материалов. Аналитическая методика, основанная на методе ВЭЖХ, должна содержать: - природу сорбента и геометрию колонки; - природу и состав подвижной фазы; - режим элюирования; - параметры работы детектора; - приготовление растворов. Данная работа будет выполняться на высокоэффективном жидкостном хроматографе, снабжённом спектрофотометрическим детектором и колонкой, заполненной обращённо-фазным сорбентом, в следующих хроматографических условиях: Колонка Геометрия колонки: 75 × 2 мм Сорбент: силикагель с октадецил- привитой фазой (октадецилсилил) Размер частиц сорбента: 5 мкм Диаметр пор сорбента: 120 Å Подвижная фаза Ацетатный буферный раствор (рН=5,5) – ацетонитрил Изократический режим элюирования Скорость потока 0,1 мл/мин Температура Комнатная Объём пробы 5 мкл Цель работы: - подбор некоторых хроматографческих параметров; - идентификация и количественное определение действующих веществ в таблетках «Папазол» методом внешнего стандарта; - сделать заключение о соответствии готовой лекарственной формы требованиям нормативно-технической документации. Оборудование и посуда: - высокоэффективный жидкостный хроматограф «Милихром А-02», - хроматографическая колонка, 75×2 мм, заполненная сорбентом ProntoSIL 120-5-C18AQ, - УЗ баня, - мерные колбы объёмом 50,0 и 10,0 мл, - мерные пипетки или автоматические дозаторы объёмом 5 мл, - автоматический дозатор на 100 мкл, - мембранные фильтры, шприцы, бюксы, виалы. Реактивы: - исходный раствор дибазола гидрохлорида с концентрацией 0,50 мг/мл; - исходный раствор папаверина гидрохлорида с концентрацией 0,25 мг/мл; - ацетонитрил, ацетатный буферный раствор (рН=5,5); - растворитель проб (близкий к составу подвижной фазы); - вода. Порядок выполнения работы Приготовление растворов Приготовление стандартного раствора: В мерную колбу объёмом 10,0 мл помещают 2,0 мл исходного раствора дибазола (концентрацией 0,50 мг/мл) и 4,0 мл исходного раствора папаверина (концентрацией 0,25 мг/мл), доводят до метки растворителем проб, тщательно перемешивают. Приготовление раствора дибазола гидрохлорида: В мерную колбу объёмом 10,0 мл помещают 2,0 мл исходного раствора дибазола (концентрацией 0,50 мг/мл), доводят до метки растворителем проб, тщательно перемешивают. Приготовление раствора папаверина гидрохлорида: В мерную колбу объёмом 10,0 мл помещают 4,0 мл исходного раствора папаверина (концентрацией 0,25 мг/мл), доводят до метки растворителем проб, тщательно перемешивают. Приготовление испытуемого раствора («задачи»). Раствор «задачи» готовят из таблетки «Папазол», которую предварительно взвешивают. Взвешивание проводят на технических весах (d=1 мг), в бюксе, массу таблетки записывают в лабораторный журнал. Таблетку переносят в мерную колбу объёмом 50,0 мл, добавляют около 40 мл воды, обрабатывают в течение 10 минут на УЗ бане, доводят до метки водой, тщательно перемешивают. Часть полученного раствора (около 5 мл) фильтруют через мембранный фильтр в сухой бюкс (если бюкс мокрый, первыми порциями фильтрата необходимо ополоснуть его стенки и вылить этот раствор, после чего продолжить фильтрование). 2,0 мл фильтрата переносят в мерную колбу объёмом 10 мл, доводят до метки растворителем проб. Раствор тщательно перемешивают. Приготовленные растворы с помощью автодозатора (150 мкл) помещают в виалы, виалы, ставят на карусель автосэмплера, отмечая номера гнёзд, в которые растворы. Проводят хроматографическое исследование. Проведение эксперимента Подбор условий анализа 1. Выбор аналитической длины волны проводят на основании спектров поглощения стандартных растворов веществ, снятых в лабораторной работе №2. Критерий выбора: достижение максимального отклика детектора обоих компонентов при минимальном уровне шума. При работе в коротковолновой области спектра (190 – 220 нм) наблюдается значительное увеличение шумов, нестабильность базовой линии, появление системных пиков. Выбор длины волны обсудить с преподавателем. 2. Подбор состава подвижной фазы. В качестве ПФ в данной работе используются: - ацетонитрил – органический компонент ПФ, содержание которого регулирует элюирующую способность ПФ, - буферный раствор – компонент ПФ, регулирующий рН среды, подавляет диссоциацию аналитов, увеличивая их сорбцию на обращено-фазовом сорбенте. Важно правильно подобрать соотношение органической и неорганической фазы для достижения оптимальных условий анализа. Критериями оценки работоспособности методики служат хроматографические параметры, рекомендованные нормы значений которых указаны в Государственной Фармакопее. В соответствии с ОФС.1.2.1.2.0001.15 «Хроматография»: Если в фармакопейной статье не указано иное, должны выполняться следующие требования и все дополнительные требования, приведённые в нормативном документе: - в испытаниях на примеси или количественное содержание для пика на хроматограмме растворе стандартного образца, используемого для количественных определений, значение величины фактора асимметрии (фактора симметрии) As должно находиться в пределах от 0,8 до 1,5; - разрешение между пиками Rs ≥ 1,5 (в случае не полностью разделённых пиков вместо разрешения может быть использовано соотношение p/v. При этом требования к минимальному значению соотношения p/v устанавливаются в фармакопейной статье). Помимо указанных в ГФ хроматографических параметров, важным показателем эффективности разделения является число теоретических тарелок. Для колонки длиной 75 мм и размером частиц сорбента 5 мкм этот показатель должен превышать 1000. Для подбора состава подвижной фазы стандартный раствор анализируют в условиях, меняя только один параметр: % органической фазы в составе элюента. Анализ проводят при содержании ацетонитрила 40, 50 и 60% Время записи хроматограммы 10 минут. На основании полученных хроматограмм заполняют таблицу, по данным которой выбирают оптимальный состав ПФ. Таблица 1 – Хроматографические параметры пиков дибазола и папаверина при изменении состава подвижной фазы %Б tr, мин As Rs N 40 Пик 1 Пик 2 50 Пик 1 Пик 2 60 Пик 1 Пик 2 Идентификация и количественное определение компонентов таблеток «Папазол» В выбранных условиях анализа (время записи всех последующих хроматограмм может быть уменьшено (обсудить с преподавателем)) последовательно анализируют растворы дибазола гидрохлорида и папаверина гидрохлорида, записывая по одной хроматограмме каждого раствора и отмечая времена удерживания каждого индивидуального компонента. Затем в выбранных условиях анализируют стандартный раствор и испытуемый раствор («задача»), записывая по три хроматограммы каждого раствора. На основании полученных данных заполняют таблицу. Таблица 2 – Времена удерживания и площади пиков дибазола и папаверина в анализируемых растворах Стандартный раствор Дибазол (с= ……..мг/мл) Папаверин (с= ……..мг/мл) tr, мин S tr, мин S 1 2 3 Среднее Испытуемый раствор («задача») 1 2 3 Для идентификации входящих в смесь веществ сравнивают абсолютные времена удерживания веществ в стандартных и испытуемом растворах. Времена удерживания не должны отличаться более чем на 2%. Рассчитывают содержания дибазола гидрохлорида и папаверина гидрохлорида в таблетке, используя метод внешнего стандарта. Приложение ОФС.1.2.1.2.0001.15 «Хроматография»: |