Лекция 7,8 МБ диагностика (1). Микробиологическая диагностика
 Скачать 70.22 Kb.
|
|
ОГБПОУ СПО «Ивановский медицинский колледж» Лекция 7,8 Тема: «Микробиологическая диагностика». Предмет: « Основы микробиологии, иммунологии, вирусологии». Специальность: Лечебное дело, Сестринское дело Курс: 1, 2 Подготовлена преподавателем: Смирновой О.А. утверждена на заседанииЦМК лечебного делаПротокол №____от_________ Председатель ЦМК_________ 2022 год Инструкция для обучающегося: изучить теоретический материал по теме лекции Ответить на вопросы для самоконтроля. 1) Укажите правила забора материала от пациента на бактериологические исследования 2) Перечислите методы МБ диагностики. Сущность микроскопического метода исследования микроорганизмов Сущность бактериологического метода исследования микроорганизмов. Требования к питательным средам. Классификация питательных сред. Тема занятия. «Методы микробиологической диагностики». Мотивация. Изучение основ микробиологии, вирусологии, иммунологии обеспечивает формирование базы знаний, необходимых для освоения всех профессиональных модулей. В первую очередь это лечение пациентов с инфекционными заболеваниями, кожными заболеваниями, лечение пациентов в хирургии, гинекологии, фтизиатрии и др. Знания преимуществ и информативности различных методов микробиологической диагностики обеспечат правильную тактику ведения пациентов с инфекционными заболеваниями. В результате изучения темы студент должен: Знать: Основные правила забора материала от пациента на бактериологическое исследование, требования и классификацию питательных сред Характеристику основных методов микробиологической диагностики, их возможности и диагностическое значение. Рассмотреть: преимущества и недостатки различных методов диагностики инфекционных заболеваний Актуализация. Для создания предпосылок к восприятию учебного материала рекомендуется ответить на вопросы теста. 1. Наиболее быстрый метод лабораторной диагностики: 1. серологический 2. микроскопический 3. бактериологический 4. аллергический 2. Для серологического исследования берется: 1. кал 2. кровь из пальца 3. моча 4. кровь из вены 3. Гр «-» микробы при микроскопии имеют цвет: 1. красный 2. зеленый 3. фиолетовый 4. желтый 4. Внутрикожная аллергическая проба проводится на коже: 1. плеча 2. подлопаточной области 3. предплечья 4. в любом месте 5 Биологический метод исследования заключается в: 1. посеве исследуемого материала на питательные среды 2. приготовлении мазков на предметных стеклах и рассматривании в микроскоп 3. выявлении специфических антител в сыворотке крови 4. заражении лабораторных животных и изучении их органов и тканей 6. К оптической части микроскопа относятся: 1. тубус 2. окуляр 3. предметный столик 4. объектив 7. Наиболее точный метод лабораторной диагностики: 1. серологический 2. микроскопический 3. бактериологический 4. аллергический 8. Для диагностики кишечных инфекций чаще всего исследуется: 1. кровь 2. кал 3. моча 4. желчь 9. Гр «+» микробы при микроскопии имеют цвет: 1. красный 2. зеленый 3. фиолетовый 4. желтый 10. К механической части микроскопа относится: 1. тубус 2. окуляр 3. предметный столик 4. объектив Лекция 7,8 Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней. План лекции. Правила забора материала от пациента на бактериологические исследования Методы МБ диагностики. Микроскопический метод исследования микроорганизмов Бактериологический метод исследования микроорганизмов. Требования к питательным средам. Классификация питательных сред. Сравнительная характеристика методов микробиологической диагностики. Правила забора материала от пациента на бактериологические исследования. Успешность бактериологического метода исследования во многом зависит от правильности забора материала от пациента! Брать материал необходимо до начала антибактериальной терапии или через 5 – 7 дней после последнего приема препарата). Соблюдать асептику, избегая попадания посторонней микрофлоры с кожи пациента и из окружающей среды. Использовать стерильную лабораторную посуду: контейнеры для мочи, мокроты, грудного молока, кала; стерильные ватные тампоны для отделяемого из раны, мазков со слизистых оболочек глаза, уха, носа, зева. Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования. Транспортировку материала в лабораторию необходимо производить в максимально короткие сроки (1,5 – 2 часа) без переохлаждения, соблюдая меры предосторожности, т. к. материал заразен. Для бактериологического исследования мочи необходимо забирать утреннюю среднюю порцию мочи ( первую порцию спускают ). Необходимо провести туалет наружных половых органов (мытьё с мылом или мягким детергентом). Объем необходимый для исследования 10 – 20 мл. Для исследования кала необходимо горшок либо судно обдать кипятком, для защиты от дезинфицирующих средств можно поместить на дно лист, проглаженный горячим утюгом. Пробу испражнений отбирают сразу после естественной дефекации с помощью прилагаемой к контейнеру лопаточкой. При наличии патологических примесей необходимо выбрать участки, содержащие слизь, гной, хлопья, но свободные от крови. Не забирать кал с памперса! Объем необходимый для исследования – не более 1 чайной ложки. Мокроту следует собирать утром. Перед сбором необходимо почистить зубы, прополоскать рот кипяченной водой. Отделяемое из носа берет медсестра с помощью стерильного ватного тампона. Мазок из зева берет медсестра с помощью увлажненного стерильного ватного тампона. Тампоны помещают в стерильные пробирки Методы МБ диагностики. 1. Микроскопический - приготовление мазков на предметном стекле, высушивание, окрашивание и рассматривание в микроскоп, определение формы, м/о, тинкториальных свойств. Тинкториальное свойство – отношение м/о к окраске. Некоторые микробы имеют своеобразный внешний вид: - холерный вибрион – в виде запятой - менингококк – диплококки в виде кофейных зерен - биполярное окрашивание присутствует только у чумных палочек Микроскопический метод подробно рассмотрен в лекции по морфологии бактерий. 2. Бактериологический – «Золотой стандарт микробиологической диагностики» - проводят посев материала от больного на стерильные питательные среды и через 24 - 48 часов инкубации в термостате исследуют выросшие колонии, выделяют чистую культуру и определяют ее культуральные, биохимические свойства. Длится в среднем 3-4 дня. 3. Биологический - заключается в заражении исследуемым материалом лабораторных животных: мышей, крыс, морских свинок, кроликов. Его используют для определения типа токсина, активности антимикробных препаратов. 4. Серологический - определение специфических антител в сыворотке крови больного. С этой целью используют серологические реакции. Исследуют парные сыворотки: 1-ую берут на 5 - 7 день болезни, 2 -ую - через 10-14 дней. О диагнозе свидетельствует повышение титра антител в 4 раза и более. 5. Аллергологический - заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препарат. С этой целью вводят внутрикожные или накожные диагностические пробы. Например, проба Манту, для диагностики туберкулеза. Аллергеном здесь является туберкулин –смесь фильтратов убитых МБТ вакцинного штамма. Микроскопический метод исследования микроорганизмов. (копия материала из лекции 2) Этапы приготовления мазка 1. Берут обезжиренное стекло. 2. Маркером на стекле рисуют кружок размером с 5-копеечную монету 3. Бактериальной петлей наносят культуру в обозначенное место на предметном стекле. 4. Высушивают 5. Фиксируют а) физическим способом над пламенем горелки до чувства жжения от прикосновения стекла к коже запястья; б) химическим способом: спиртом или ацетоном Если мазок готовят из культуры, выращенной на твердой питательной среде, то предварительно на стекло наносят каплю физ. раствора и затем равномерно размешивают культуру по поверхности предметного стекла. Бактериальная петля до взятия и после нанесения культуры должна стерилизоваться в пламене горелки. Забор материала проводят там же в асептических условиях над пламенем горелки. Окраска мазка простым способом. При простом способе используют один краситель.\ Этапы окраски простым способом: 1. пипеткой наносят краситель на приготовленный препарат 2. оставляют на определенное время 3. затем осторожно сливают краситель 4. препарат промывают водой 5. высушивают Окраска мазка сложным способом (по Граму). При сложном способе мазок окрашивают несколькими красителями. При окраске по Граму основным красителем является генциановый фиолетовый дополнительным – фуксин. В зависимости от окраски все микроорганизмы делят на Гр «+» и Гр «-«. Гр «+» бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет (основным красителем), а Гр «-« бактерии в красный цвет (дополнительным красителем). Различная окраска определяется свойством клеточной стенки. У Гр «+» бактерий клеточная стенка имеет толстый клеточный каркас, состоящий из муреина и теихоевых кислот, который задерживает основной краситель, у Гр «-« бактерий такого каркаса нет и клеточная стенка не удерживает основной краситель и докрашивается дополнительным. Этапы окраски по Граму: 1. На фиксированный мазок наносят несколько капель генцианового фиолетового красителя. Ждут 1-2 минуты. 2. Закрепляют раствором Люголя. Ждут 1-2 минуты 3. Обесцвечивают спиртом 0,5 – 1 минут ждут 4. Промывают водой 5. Наносят Фуксин. Ждут 1-2 минуты 6. Промывают водой 7. Высушивают Красители: - красные (фуксин, Конго-красный, нейтральный красный); - синие (метиленовый, толуидиновый); - фиолетовые (генциановый, метиловый); - коричнево-желтые (везувин, хризоидин); - зеленые (бриллиантовым, малахитовый) Сложные методы окраски: - по Граму; - по Цилю-Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий). tbs, проказа - по Ожешко (выявление спор.) и др. Бактериологический метод исследования микроорганизмов. Бактериологический метод исследования является основным методом в диагностике инфекций бактериальной природы. Позволяет точно определить вид микроорганизма, выделенного от больного. Этот метод включает посеве исследуемого материала пациента на питательные среды, выделение чистой культуры, изучение ее свойств и индентификацию вида бактерий. Метод точный, но длительный, от 3 до 5 дней (иногда 2 мес), трудоемкий. Может включать в себя определение чувствительности микроорганизмов, выделенных от больного, к антибиотикам. Этапы бактериологического метода или этапы выделения чистой культуры. 1-й день 1 этап. Посев исследуемого материала бактериальной петлей или пипеткой на поверхность агара в чашке Петри  Чашку Петри помещают в термостат Т = 37 С0 (24 – 48 ч.) 2-й день: 2 этап А.Изучение роста микробов на чашке Петри (изучение культуральных свойств) Оценивается: а) величина колонии – крупная (> 4 мм), средняя (2-4 мм), мелкая (1-2 мм) б) характер поверхности: гладкая, шероховатая, бугристая в) расположение на поверхности среды: выпуклая, плоская, вдавленная г) форму края: ровный, изрезанный, волнистый д) консистенцию колоний (мягкая, плотная слизистая, вязкая) Б. Приготовление мазка и окраска его по Граму (изучение тинкториальных свойств и морфологических) Тинкториальное свойство характеризует отношение м/о к окраске. В. Пересев культуры на скощенный агар для накопления чистой культуры в термостат Т = 37 С0 (24 ч.) 3-й день: 3 этап Изучение роста микробов на скошенном агаре , приготовление мазка и окраска по Граму, чтобы убедиться в чистоте культуры. Чистая культура содержит бактерии одного вида. Штамм – чистая культура, выросшая из определенного источника. Для изучения биохимических свойств микроба производят посев на различные дифференциально – диагностические среды. Например: А – Длинный ряд сахаров («пестрый ряд» или среда Гисса) для определения сахаролитических свойств бактерий. Среда состоит из ряда пробирок, содержащих различные сахара(глюкоза, лактоза,сахароза, мальтоза, рибоза и др) и индикатор, который меняет цвет в случае разрушения сахара под действием ферментов исследуемых бактерий. Б – Кровяной агар для определения гемолитических свойств. В - Полужидкая среда для изучения подвижности культуры. Производят посев в полужидкую среду в пробирке уколом бактериальной петли до дна. Ставится тест определения чувствительности м/о к АБ методом дисков. Чистую культуру засевают на питательную среду в чашку Петри, накладывают диски с различными АБ. Все чашки Петри и пробирки с дифференциально – диагностическими средами помещают в термостат на 24 часа 4-й день: оценка результата роста м/о на диф-диагностических средах. А. Среда Гисса имеет пестрый вид, т.к. м/о имеют определенный набор ферментов, расщепляющий сахара. Б. Кровяной агар. Если микроорганизм обладает гемолитическим свойством, то вокруг колоний образуется просветление. Гемолиз – разрушение оболочки эритроцита. В. Посев уколом в полужидкую среду. Микроорганизм подвижен – рост наблюдается в виде помутнения всей среды. Микроорганизм неподвижен – рост наблюдается только по уколу бактериальной петлей через среду. 4- 5 день После анализа культуральных, тинкториальных, морфологических, сахаролитических, гемолитических свойств, оценки подвижности микроорганизма происходит индентификация вида бактерии и выдается ответ. В названии микроорганизма род пишется с заглавной буквы, вид пишется с прописной буквы. Также дается заключение о чувствительности м/о к антибиотикам. Схема бактериологического метода исследования.  Требования к питательным средам. 1. питательность ( должны содержать белки, аминокислоты, рН, факторы роста) 2. осмотическое давление среды = осм. давлению клетки м/о 3. стерильность 4. влажность (для плотных сред) 6. прозрачность 7. унифицированность (постоянное кол-во ингредиентов). т.е. стандартность Классификация питательных сред: 1. по компонентам - натуральные (мясо, дрожжи, кровь, костная мука, молоко, яйца, соя, кукуруза, картофель); - синтетические (органические и неорганические соединения) 2. по консистенции: - жидкие - плотные (агар-агар – полисахарид из морских водорослей, желатин, свернутая сыворотка крови, яйца, картофель) - полужидкие 3. по составу - простые (МПБ, МПА, пептонная вода, питательный желатин) - сложные (кровь, углеводы, сыворотка крови, желчные кислоты) 4. по назначению А) Основные – на них растет большинство м/о (МПА) Б) Специальные (для стрептококка к среде добавляют сахар) В) Элективные (избирательные) – благоприятны для определенного вида микроорганизма, но задерживают рост других. Например, соли желчных кислот подавляют рост E.сoli, но стимулируют рост возбудителя брюшного тифа. Жидкие элективные среды – среды накопления. Например, пептонная вода с рН 8,0 – среда накопления для холерного вибриона. Г) Диф-диагностические среды – отличают м/о друг от друга по ферментативной активности. Например: Среды Гисса: пептонная вода + углевод + индикатор; Д) Консервирующие среды – для первичного посева и транспортировки, в которых подавляется рост патогенных м/о и сапрофитов. Например, глицериновая смесь. Сравнительная характеристика методов микробиологической диагностики
|