Моноклональные АТ.Захаров А.О.302 группа. "Моноклональные ат. Открытие. Этапы получения. Значение в медицине"
 Скачать 29.89 Kb.
|
|
МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ "РЕАВИЗ" РЕФЕРАТ по дисциплине: "Иммунология" На тему: "Моноклональные АТ. Открытие. Этапы получения. Значение в медицине" Выполнил студент: Захаров А.О 302 группы, лечебного факультета Преподаватель: Хабибулина Л. Р Самара 2017 Содержание:
1.Введение Моноклональные антитела (МАТ) сегодня используются в терапии заболеваний, большинство из которых еще несколько десятков лет назад считались неизлечимыми. Это онкологические, аутоиммунные, сердечно-сосудистые и инфекционные заболевания, воспалительные реакции различного генеза, системный склероз, идиопатический фиброз легких, гепатит В, СПИД, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, аллергические реакции, мышечная дистрофия, болезнь Альцгеймера, астма, диабет и другие заболевания. Препараты, изготовленные на основе моноклональных антител, относятся к новейшим в современной медицине. С середины 90-х годов до сегодняшнего дня на мировом фармацевтическом рынке одобрено более 30 лекарственных средств, имеющих в составе моноклональные антитела. Первоначально надежность методов и технологий производства моноклональных антител и безопасность их применения вызывали опасения у фармацевтических производителей. Однако сегодня научный и медицинский опыт показал возможность их эффективного и безопасного применения в медицине. Сейчас большинство фармацевтических компаний работают над разработкой новых лекарственных средств на основе моноклональных антител. На этапе разработки в мире находится около 300 МАТ. 2.История открытия Первый шаг — иммунизация антителами животных (XIX в. – начало XX в.) Ученых с давних пор интересовал вопрос о том, каким образом организм создает множество различных антител, обладающих уникальной специфичностью в отношении чужеродных веществ (антигенов), и каким образом эти антитела работают. Один из первых шагов к ответу на этот вопрос был сделан группой ученых, работавших в Институте инфекционных болезней в Берлине и открывших методы лечения дифтерии. В конце XIX века дифтерия у детей считалась смертельным неизлечимым заболеванием. Врач иммунолог-бактериолог Эмиль Беринг (Emil Behring) предположил, что лечение дифтерии может быть успешным в случае проявления естественной защитной реакции человеческого организма, а именно, если секретируемый дифтерийными бактериями токсин нейтрализовать. В 1890 г. Беринг совместно с японским ученым Сибасабуро Китасато установили, что неиммунизированные животные могут быть защищены от токсина дифтерийных бактерий с помощью инъекции антитоксина (антитоксической сыворотки) иммунизированных животных. В 1894 г. в период эпидемии дифтерии, унесшей жизни 50 000 детей в Германии, были произведены первые 25 000 доз антитоксина для применения в лечении людей. В 1901 г. Эмилю Берингу была присуждена Нобелевская премия за работу по сывороточной терапии. Однако на тот момент эффективность сыворотки была достаточно низкой, поскольку антитела в сыворотке вырабатывались клетками животных, а не самого пациента и вызывали лишь пассивный иммунитет. Антитоксин необходимо было вводить сразу после инфицирования, иначе было слишком поздно. Еще одним примером использования антисыворотки в терапии людей стали исследования Чарльза Ричета (Charles Richet) и Жюля Эрикура (Jules Héricourt), применявших для лечения онкологических заболеваний антисыворотку, полученную путем иммунизации животных тканями саркомы. С середины 30-х годов практика пассивной иммунизации сошла на нет в связи с открытием антибиотиков широкого спектра действия. Второй шаг — расшифровка структуры моноклональных антител (30–70-е гг. XX в.) В 30-х гг. появились ультрацентрифуги, позволявшие разделять антитела по размеру и форме. В 40-х гг. ученые научились сортировать антитела по электрическому заряду и размеру. Однако дальнейшая расшифровка структуры антитела была пока недоступна из-за их большого размера, в 20 раз превышавшего размер молекул белков, структуры которых к тому времени уже были расшифрованы. Только в 1962 г. на базе многочисленных исследований, проводившихся различными учеными, Родни Портер (Rodney Porter) расшифровал основную структуру антител, стало известно, что антитело состоит из легкой и тяжелой цепи. Позже Родни Портеру совместно с Джеральдом Эдельманом (Gerald Edelman) удалось определить последовательность 1300 аминокислот, входящих в белковую цепь антитела, производимого клетками раковой опухоли миеломы. В то время это была самая большая расшифровка аминокислотной последовательности, за что в 1972 году ученые получили Нобелевскую премию. В результате исследований Портера и Эдельмана стало известно, что антитело имеет форму буквы Y, в которой нижняя часть (тяжелая цепь) имеет постоянную структуру для разных антител, а плечи (легкие цепи) значительно различаются у различных антител. Именно эти плечи отвечают за связывание антитела с антигеном и его нейтрализацию. Третий шаг — разработка первой технологии синтеза антител (70–80-е гг. XX в.) К 1970-м годам уже были известны некоторые важные моменты о том, каким образом в организме человека вырабатываются антитела. В частности, было известно, что за продуцирование антител отвечают В-лимфоциты, причем каждый В-лимфоцит может вырабатывать только одно специфическое антитело, при этом он редуплицируется и за счет этого быстро производит большое количество идентичных по структуре антител — так называемых моноклональных, то есть произошедших от одной клетки-предшественницы. Добиться столь же быстрой выработки антител в лабораторных условиях удалось в 1975 году ученым Георгу Кёлеру (Georges Köhler) и Сезару Мильштейну (César Milstein). На тот момент была исследована способность клеток раковой опухоли миеломы быстро производить идентичные самим себе клетки. Кроме того, существовала возможность выделения антителопродуцирующих клеток из организма животных. Технология Кёлера и Мильштейна включала несколько этапов: у мыши вырабатывался иммунитет к известному антигену, затем из ее селезенки выделялись антителопродуцирующие клетки, эти клетки с помощью особой технологии соединялись с клетками миеломы с получением гибридомы, клетки которой непрерывно в большом количестве синтезировали антитела против известного антигена. Эта методика произвела переворот в изучении антител, поскольку позволила получать антитела с удивительно точным соответствием определенной структуре. В дальнейшем технология была усовершенствована, и в 1984 году Кёлер, Мильштейн и датский иммунолог Нильс Ерне (Niels Jerne) получили Нобелевскую премию за участие в создании антител, которые можно использовать для диагностических исследований и создания лекарственных средств. В дальнейшем было разработано множество технологий, позволивших усовершенствовать синтез антител за счет развития технологий рекомбинации ДНК, технологий клонирования клеток и других достижений генной инженерии. Четвертый шаг — применение искусственно синтезированных антител для лечения заболеваний (80-е гг. XX в.) При первых попытках применения для лечения людей антител, искусственно синтезированных из клеток животных, ученые столкнулись с трудностями. В 1979 г. впервые в мире ученые Филип Сташенко (Philip Stashenko) и Ли Надлер (Lee Nadler) применили искусственно синтезированные моноклональные антитела, полученные из клеток мышей, против антигенов, которые вырабатываются на поверхности клеток раковых опухолей. Однако было выявлено, что мышиные антитела в незначительной степени связывались с опухолевыми антигенами и воспринимались организмом как чужеродные клетки. С 1986 г. на фармацевтическом рынке началась реализация препарата компании Janssen «Ортоклон ОКТ3» (муромонаб), который позволяет купировать реакцию отторжения трансплантата почки, оказывая избирательное иммуноподавляющее действие. Препарат имеет полностью мышиное происхождение, то есть синтезируется мышиными гибридомами, полученными слиянием мышиной миеломы и мышиных В-лимфоцитов. Вскоре после выхода препарата на рынок стало ясно, что при длительном применении мышиных моноклональных антител в качестве лекарственных средств их эффективность снижалась. Это связано с тем, что мышиные белки являются иммуногенными для организма человека, то есть воспринимаются как чужеродные объекты. В связи с этим у пациентов, которым вводят мышиные антитела, быстро образуются человеческие антимышиные антитела (human antimurine antibody – HAMA). Образующиеся HAMA-антитела нейтрализуют эффект мышиных антител. Пятый шаг — создание химерных антител (90-е гг. XX в.) В начале 90-х гг. с использованием молекулярно-биологических методов, основанных на применении рекомбинантной ДНК, были созданы химерные антитела. В химерных антителах часть «мышиной» молекулы с помощью методов генной инженерии заменялась на участок человеческого происхождения, а часть оставалась фрагментом мышиного происхождения. Поскольку белковая последовательность химерных антител на 75% состояла из «человеческих» последовательностей аминокислот, то у пациентов, получавших химерные антитела, HAMA-антитела образовывались в значительно меньшем количестве, и это сделало препараты на основе химерных антител значительно более эффективными, чем на основе мышиных. В дальнейшем был выпущен целый ряд лекарственных средств на основе химерных антител: ритуксимаб, выпускаемый под брендами «Мабтера» и «Ритуксан», — для лечения раковых опухолей, «Ремикейд» (инфликсимаб) — для лечения болезни Крона, «Симулект» (базиликсимаб) — для профилактики острого отторжения трансплантата почки, «Реопро» (абциксимаб) — для профилактики стенокардии и острого инфаркта миокарда, а также другие препараты. Разработка химерных антител позволила практически полностью отказаться от использования мышиных антител. Однако в некоторых случаях использование мышиных антител и сегодня остается оправданным. Из одобренных к применению лекарственных средств сегодня лишь три являются мышиными: «Ортоклон-ОКТ3» (муромонаб-CD3), «Зевалин» (ибритумомаб тиуксетан) и «Бексар» (тозитумомаб-йод 131). Два последних являются радиоактивно мечеными мышиными МАТ. Их функция заключается в доставке радиоизотопов к клеткам лимфомы. Наличие радиоактивной метки позволяет применять эти антитела в очень небольших количествах, поэтому иммуногенность, обусловленная мышиными последовательностями, в этом случае не так значима. То, что эти препараты включают именно мышиные, а не гуманизированные или человеческие формы делает их более эффективными, потому что гуманизированные формы могли бы связываться одновременно не только с клетками-мишенями, но и со здоровыми клетками, нанося им вред. Также к применению сегодня одобрен один препарат на основе крысино-мышиного МАТ — это препарат «Ремоваб» (катумаксомаб) для лечения злокачественного асцита. Шестой шаг — создание гуманизированных и человеческих моноклональных антител (конец 90-х гг. XX в. — 2000-е гг. XXI в.) В конце 90-х гг. с помощью методов генной инженерии удалось свести к минимуму процент мышиных последовательностей аминокислот в искусственно синтезируемых антителах, благодаря чему были получены гуманизированные антитела, еще в меньше степени вызывающие образование HAMA-антител у человека. Начиная с конца 90-х гг. на рынок было выпущено множество препаратов на основе гуманизированных антител. Например: «Зенапакс» (даклизумаб) — для профилактики отторжения после трансплантации почки, «Герцептин» (трастузумаб) — для лечения рака молочной железы и рака желудка, «Ксолар» (омализумаб) — для лечения атопической бронхиальной астмы и сезонного аллергического ринита, «Раптива» (эфализумаб) — для лечения псориаза, а также многие другие. В 2000-х годах усовершенствованные методы генной инженерии наконец позволили добиться долгожданного результата и получить человеческие МАТ. В настоящее время человеческие МАТ чаще всего получают с помощью технологии трансгенных мышей (мышей, выведенных с использованием фрагментов чужеродной ДНК) или фагового дисплея (особый метод генной инженерии с использованием вирусов-бактериофагов). Например, сегодня для клинического применения одобрены такие препараты, созданные на основе человеческих МАТ, как «Бенлиста» (белимумаб) — для лечения красной волчанки, «Ервой» (ипилимумаб) — для лечения меланомы, «Симпони» (голимумаб) — для лечения ревматоидного артрита, псориатического артрита, болезни Бехтерева, а также другие препараты. Еще один тип веществ, созданных методами генной инженерии для лечения пациентов, — это так называемые «белки слияния», в которых искусственно соединены два отдельных белка, зачастую с различными функциями. Например, на основе такого вещества создан препарат «Амевив» (алефацепт) моноклональные антитела при псориазе, орфанный препарат «Аркалист» (рилонацепт) — для лечения редких генетических аутовоспалительных заболеваний, относящихся к группе криопинсвязанных периодических синдромов, и другие препараты. 3.Основные этапы получения моноклональных антител. Иммунизация животных. Обычно для иммунизации используют мышей и крыс, так как подходящие миеломные клетки этих животных широко распространены и, кроме того, не представляет сложностей выращивание полученных гибридом в организме крыс и мышей. Для иммунизации применяют, как правило, очищенные антигены. Назначение процесса иммунизации состоит в том, чтобы увеличить долю клеток, продуцирующих антитела заданной специфичности, и перевести эти клетки в функциональное состояние, при котором они способны сливаться и образовывать антителообразующие гибридные клетки. Конкретная схема иммунизации зависит от природы антигена и его иммуногенности. Антигены клеточной поверхности являются сильными иммуногенами, тогда как большинство растворимых белков - слабые иммуногены. В последнем случае необходимо применять адъюванты, усиливающие иммунный ответ. Среди адъювантов наибольшее распространение получил полный адъювант Фрейнда (ПАФ). Также для развития сильного иммунного ответа используют неоднократное введение антигена По ходу иммунизации необходимо определит титр антител к антигену (титр антител - величина, обратная разведению сыворотки, при которой степень иммунологической реакции снижается в два раза по сравнению с максимальной). Обычно это делают перед последней иммунизацией. В опыт набирают животных с высоким титром антител. Для большинства растворимых антигенов можно использовать следующую схему иммунизации. Вводят 1-100мкг антигена в ПАФ или в виде преципитата на квасцах внутрибрюшинно. Если есть возможность, то одновременно вводят 2*109 убитых клеток B. Pertussis. Через 2-3 недели вводят антиген на физиологическом растворе. Эту процедуру можно повторять до появления высокого титра антиген. Последнюю иммунизацию делают внутривенно, через 3 суток животные забиваются, и готовится суспензия клеток для гибридизации. В последнее время развиваются методы полной иммунизации вне организма с целью получения гибридомы. Слияние. Существует два основных варианта добавления ПЭГ, используемые в настоящее время. Первый метод заключается в следующем. В течение 1 минуты добавляют 1мл 50% раствора ПЭГ при 370єС с постоянным перемешиванием. Затем раствор постепенно разбавляют до 10 мл в течение нескольких минут средой без сыворотки, после чего клетки центрифугируют и ресуспендируют в среде культивирования. Во втором методе используют более длительную обработку клеток раствором ПЭГ. К осадку клеток добавляется 30-35% ПЭГ при комнатной температуре. Клетки центрифугируют 2 минуты, затем их оставляют при комнатной температуре еще на 5-7 минут. Затем из разводят в большом объеме среды с сывороткой, обмывают и культивируют. Клонирование гибридомных клеток. Клонирование осуществляется для выделения стабильных клонов гибридомных клеток. К основным методам клонирования клеток относится клонирование методом лимитирующих разведений, клонирование в полужидком агаре и клонирование с помощью цитофлориметра. Рассмотрим метод лимитирующих разведений. Если клетки посеяны в 96-луночные планшеты очень редко, то для лунок, в которой наблюдается рост клеток, подчиняется распределению Пуассона: Где (=1f (0) = 0.37. для того, чтобы получить разумную вероятность только одного клона в лунке, в более 37% лунок не должно наблюдаться роста клеток. Поскольку эффективность клонирования редко бывает равной 100%, клетки необходимо засевать при плотности 10,3 и 0,5 клеток на лунку. В тех планшетах, на которых наблюдается рост в половине лунок, содержатся изолированные клоны. При первом клонировании активной может оказаться только небольшая часть клонов. Необходимо всегда производить повторное клонирование, при котором доля положительных клонов будет возрастать. Для клонирования надо применять клетки питающего слоя. Используются те же виды клеток, что и для начального роста гибридом. Массовая обработка моноклональных антител. После отбора гибридомных клеток, синтезирующих интересующие исследователя антитела, можно приступить в их массовому наращиванию с целью получения больших количеств моноклональных антител. В начале культивирования гибридомные клетки могут расти медленно и плохо переносить низкую плотность посева. В связи с этим при пересеве клеток их надо разводить не более чем 3-5 раз. Ускорению роста клеток может способствовать добавление клеток питающего слоя. Гибридомные клетки необходимо поддерживать в логарифмической фазе роста и избегать повышения концентрации клеток выше 0,5млн/мл. клетки можно культивировать как в стационарной культуре, так и в роллерной, а также различного рода культиваторах. Для получения максимальной продукции моноклональных антител клеткам позволяют расти до предельной плотности. В такой культуре через определенное время наблюдается гибель гибридомных клеток. Надосадочная жидкость собирается, а клеточный осадок отбрасывается, то есть не пытаются культивировать оставшиеся живые клетки. Для получения больших количеств антител вводят гибридомные живые клетки в организм животных и получают из них асцитную жидкость. Предварительно животным вводят агенты, повышающие способность гибридом расти в брюшной полости. В качестве такого агента чаще всего выступает пристан - 0,5мл за 10-14 суток до введения клеток. Очистка антител. Для многих целей не требуется очистка антител, и они используются в виде культуральных жидкостей или асцитных жидкостей. Грубую иммуноглобулиновую фракцию можно получить высаливанием белка сульфатом аммония с последующим диализом. Если антитела необходимо выделить в чистом виде, то предварительно определяют их класс и подкласс, так как способы очистки различаются для антител разных классов. Это модно сделать с помощью метода иммунодиффузии по Ухтерлони. Выделение чистых антител лучше всего проводить на иммуносорбентах. При этом методе, однако, есть опасность, что при фиксации изменяется антигенная структура клеточной поверхности. Если не удается выделить антитела прямым способом, то получают иммуноглобулиновую фракцию с помощью различных методов аффинной и ионообменной хроматографии на сефарозес пришитым ковалентным белком А. 4.Применение моноклональных антител. Наиболее широко используются моноклональные антитела в медицинской диагностике. Если к антителами присоединить радиоактивные или магнитоактивные материалы и ввести их в живой организм, то можно выявить в нем патологические зоны. Такие моноклональные антитела присоединяются к пораженным болезнью клеткам организма, а соответствующие индикаторные материалы позволяют выяснить их местонахождение. Моноклональные антитела используются и в процессах очистки веществ. Современные технологии основаны на присоединении антител к твердой матрице носителя. К ним добавляют смесь молекул, содержащую искомый антиген. Затем комплексы антиген - антитело отмываются от примесей, не связанных с матрицей. После разрушения ковалентных связей антиген - антитело в растворе остаются свободные антигены. Если получить антитела определенного типа и иммунизировать ими животное, то образуются анти-антитела. Они могут быть использованы для стимуляции иммунной системы. На этом принципе основано получение вакцин нового типа. Наборы моноклональных антител могут быть также предназначены для борьбы с аллергенами. Благодаря высокий специфичности моноклональные антитела широко используются в качестве зондов для точного определения природы молекул поверхности клеток и клеточных органелл. С их помощью также можно проводить детекцию активности ферментов. Методы иммуноферментного анализа применяют в диагностике вирусных заболеваний растений. Это позволяет сократить время получения безвирусного посадочного материала, отбирать новые вирусоустойчивые сорта. При генно-инженерных экспериментах можно быстро отбирать клоны - продуценты. Новые возможности применения моноклональных антител в терапии инфекционных и опухолевых заболеваний дает их конъюгация с токсическим веществом. Благодаря избирательному свойству антител связываться только с определенной клеткой, последняя может быть уничтожена посредством токсина или излучения. Терапевтическое применение антител началось 1891 году, сразу же после того, как Беринг и Китазато показали, что сыворотка крови морских свинок, выживших после введения дифтерийного или столбнячного токсинов, приобретала способность защищать других животных от действия этих же токсинов. Высокая терапевтическая эффективность антител при лечении дифтерии и некоторых других заболеваний быстро завоевала признание врачей. К сожалению, их применение сопровождалось побочными реакциями. Препараты антител, полученные иммунизацией животных, вызывали у пациентов сывороточную болезнь, которая в последующем исключала или значительно ограничивала возможность их применения. Предупредить такие осложнения можно, применяя антитела из сыворотки человека, и в настоящее время разработан целый ряд препаратов на основе антител из донорской крови. Для полной реализации терапевтического потенциала антител необходимо было обеспечить получение антител высокой специфичности против различных антигенов, в том числе антигенов тканей человека, значительно снизить вероятность побочных реакций на их применение и разработать технологии получения этих антител in vitro в достаточно больших количествах. Принципиальное значение для этого имела разработка получения моноклональных антител, так как препараты моноклональных антител содержат совершенно одинаковые, идентичные по своей структуре и свойствам молекулы, специфичность которых может быть полностью охарактеризована. Серьезным препятствием для широкого применения антител являлась их чужеродность для организма-реципиента. После введения антител в организме больного вырабатываются антитела против введенных антител, что снижает эффективность препарата и развиваются аллергические реакции. Необходимо было снизить чужеродность вводимых антител, гуманизировать их, сделать максимально похожими на антитела человека. Позднее были разработаны технологии получения таких антител. В результате чего полученные антитела стали широко применяться в медицине. Лидером терапевтического использования моноклональных антител является онкология. Разработан целый ряд моноклональных антител против различных опухолеассоциированных антигенов; показано, что многие из них обладают высокой терапевтической активностью и широко применяются в клинике. Применение моноклональных антител в настоящее время является широко используемой формой иммунотерапии рака. Она относится к пассивной иммунотерапии, так как использует синтезированные вне организма антитела и часто не требуют активного участия иммунной системы больного, реактивность которой часто снижена . Одним из наиболее изученных противоопухолевых препаратов антител является Трастузумаб (Герцептин) - рекомбинантные моноклональные антитела, которые связываются с рецептором HER2/neu на поверхности клеток многих солидных опухолей. Герцептин высокоэффективен при запущенном раке молочной железы. Интенсивно изучается совместное применение Герцептина и химиотерапии при метастазах рака молочной железы. Для повышения избирательности действия на опухоли антитела конъюгируют с токсинами или радиоактивными веществами, что обеспечивает доставку действующего вещества непосредственно к опухолевым клеткам. Моноклональные антитела, связанные с токсинами, часто называются иммунотоксинами. Для их получения к антителам чаще всего присоединяют бактериальные (дифтерийный или псевдомональный) или растительные токсины (рицин А или сапорин). Применяют иммунотоксины для лечения некоторых опухолей, особенно лимфом. Это два радиоактивно меченых моноклональных антитела - Ибритумомаб (Зевалин) и Тозитумомад (Бексксар). Конъюгированные антитела оказывают более выраженный терапевтический эффект, но и осложнения при их применении наблюдаются чаще, что зависит от характера связанного с ним соединения. Значительные перспективы имеет применение антител для терапии аутоиммунных и хронических воспалительных заболеваний, а также для предупреждения отторжения трансплантата. Раскрытие молекулярных основ иммунного распознавания, формирования активного иммунного ответа и толерантности, установление центральной роли в этих процессах Т-лимфоцитов позволяет направленно использовать целый ряд препаратов антител при таких заболеваниях, как ревматоидный артрит, псориаз, рассеянный склероз, сахарный диабет и другие. Высокой эффективностью при лечении ревматоидного артрита обладал Алемтузумаб (Кэмпас). У большинства больных после применения препарата наблюдается стабилизация процесса или переход в длительную ремиссию. Однако при проведении повторных курсов препарата в некоторых случаях наблюдалось образование антиидиотипических антител. Целый ряд препаратов моноклональных антител (Эфализумаб, Алефацепт и др.) предложены для лечения псориаза, характеризующегося развитием хронического воспаления кожных покровов и суставов. К активным противоаллергическим препаратом относится Омализумаб - мнонклональные антитела, избирательно связывающиеся с lgE и предотвращающие его взаимодействие с высокоэффективными рецепторами Fcе-Ri. Эффективность Омализумаба при лечении тяжелых форм бронхиальной астмы была подтверждена клиническими исследованиями, в которых приняли участие 1070 больных. 5. Заключение На основании ранее изложенного можно сделать вывод, что моноклональные антитела представляют собой новую группу лекарственных препаратов, обладающих высокой эффективностью при лечении рака, аутоиммунных и воспалительных процессов, а также ряда других заболеваний. Уже сейчас они позволяют помочь больным с такой паталогией, которую раньше не удавалось контролировать. Разработка новых препаратов многочисленными биотехнологическими компаниями позволяет ожидать появления в ближайшем будущем еще более разнообразных и эффективных лекарственных средств данной группы. Гуманизированные моноклональные антитела составляют значительную и быстро растущую часть общего рынка фармацевтических препаратов. Производством моноклональных антител в настоящее время занимаются около 200 биотехнологических компаний, реализующих сотни новых проектов.Ежегодный рост продаж препаратов моноклональных антител составляет более 20%. Это позволяет надеяться, что наиболее востребованные препараты моноклональных антител получат еще более широкое применение для лечения нуждающихся в них больных. 6. Список литературы
|