ГФ №11, том 2. Общие методы анализа лекарственное растительное сырье редакционная коллегия
 Скачать 2.46 Mb.
|
|
калибровочный коэффициент. Калибровочный коэффициент определяют на 3-4 искусственных смесях нипагина и нипазола с равными концентрациями компонентов. Для метода абсолютной калибровки график строят по 4-5 искусственным смесям с концентрацией нипагина от 0,05 до 0,15%. Примечания. 1. Определение калибровочного коэффициента: нипагин и нипазол, взятые в количествах по 0,050 г (точные навески), помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 5 мл спирта, растворяют и доводят объем раствора водой до метки и хроматографируют. Рассчитывают среднее значение калибровочного коэффициента не менее чем из 3 определений по формуле: S2 x Рх К = ---------, S1 x P2 где Рх - навеска нипагина в граммах. Раствор должен быть свежеприготовленным. 2. Приготовление калибровочных смесей: 0,025; 0,040; 0,050; 0,060; 0,075 г нипагина (точные навески) вносят соответственно в 5 мерных колб вместимостью 50 мл. В каждую колбу прибавляют по 2,5 мл 95% спирта, растворяют навеску и доводят объем раствора водой до метки. Раствор должен быть свежеприготовленным. 3. Приготовление раствора внутреннего стандарта: около 0,125 г нипазола (точная навеска) вносят в мерную колбу с притертой пробкой вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл 95% спирта, растворяют и доводят объем раствора 95% спиртом до метки. Срок годности раствора 14 сут при хранении при температуре от 4 до 8 град. С. 4. Приготовление суспензий к анализу: во флакон с суспензией вносят 1-2 капли хлористоводородной кислоты и встряхивают. МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ 1. Определение ретинола ацетата и ретинола пальмитата (витамина А) а) Точную навеску порошка растертых драже (не более 1 г) или 2 таблетки, покрытые оболочкой и растертые в порошок, количественно переносят 15 миллилитрами предварительно свежепрокипяченной и охлажденной до температуры 40 град. С воды в коническую колбу вместимостью 100 мл, нагревают на водяной бане при температуре от 60 до 70 град. С при перемешивании в течение 5 мин, прибавляют 8 мл раствора аммиака и нагревают при той же температуре в течение 15 мин. Затем прибавляют 30 мл 95% спирта, 3 мл 50% раствора едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с обратным холодильником при температуре кипения смеси. Содержимое колбы тотчас охлаждают до комнатной температуры, количественно переносят 50 мл воды в делительную воронку и извлекают 150 мл эфира для наркоза в течение 2 мин. В случае образования эмульсии проводят дополнительное извлечение эфиром 3 раза по 25 мл. Объединенные эфирные извлечения промывают сначала 30 мл воды, затем 50 мл 4% раствора едкого кали и снова водой по 50 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с фенолфталеином). Промытые эфирные извлечения количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем раствора эфиром до метки и перемешивают; 5 мл полученного раствора помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл. Эфир отгоняют в токе азота или под вакуумом на водяной бане при температуре не выше 40 град. С. Остаток растворяют в пропаноле - 2 до получения концентрации витамина А около 2 мкг (6 ME) в 1 мл. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длинах волн 300, 310, 325, 334 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют пропанол - 2. Отношение значения оптической плотности при длине волны 300 нм к значению оптической плотности при длине волны 325 нм не должно превышать 0,73. Вычисляют оптическую плотность D325 (испр.) с поправкой на сопутствующие витамину А примеси по следующему уравнению: D325 (испр.) = 6,185 х D325 - 2,555 х D310 - 4,260 х D334, где D325, D310 и D334 - оптические плотности испытуемого раствора при соответствующих длинах волн. Если D325 (испр.) не отличается от D325 больше чем на +/-5%, то содержание витамина А в ME в одной таблетке или драже (X) вычисляют по формуле: D325 х 250 х V х 3330000 х б D325 х V х 915 х б Х = ---------------------------- = -------------------- а х 5 х 100 х 1820 а где D325 - оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 325 нм; 250; 5 и V - разведения в миллилитрах; 3330000 - количество витамина А в ME, соответствующее одному грамму 100% ретинола; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1820 1% удельный показатель поглощения (Е ) 100% ретинола в пропаноле - 1 см 2 при длине волны 325 нм. Если D325 (испр.) отличается от D325 больше чем на +/- 5%, содержание витамина А в ME в одном драже или таблетке вычисляют по вышеприведенной формуле, подставляя вместо D325 величину D325 (испр.). б) При наличии в составе испытуемого препарата альфа - токоферола ацетата (витамина Е) дополнительно проводят гидрирование. Для этого промытые эфирные извлечения, полученные, как указано выше, упаривают в токе азота или под вакуумом на водяной бане при температуре не выше 40 град. С. Остаток тотчас растворяют в пропаноле - 2 до получения концентрации ретинола около 20 мкг (60 ME) в 1 мл (раствор А). 15 мл раствора А переносят в колбу для гидрирования вместимостью 50 мл, прибавляют около 0,2 г палладиевого катализатора, перемешивают и гидрируют в течение 15 мин в приборе, изображенном на рис. 5. <*> -------------------------------- <*> Рис. 5. Прибор для гидрирования. а - газометр с водородом; б - бюретка, снабженная тройным краном; в - колба для гидрирования; г - магнитная мешалка. (Рисунок не приводится). При проведении гидрирования водород из газометра а забирают в бюретку б, снабженную тройным краном и заполненную водой. Сначала тройной кран поворачивают так, чтобы провести забор водорода из газометра, после чего кран газометра закрывают, а тройной кран бюретки поворачивают так, чтобы водород из бюретки поступал в колбу для гидрирования, снабженную небольшой вводной трубкой. Перемешивание раствора при гидрировании проводят с помощью магнитной мешалки. Для вытеснения воздуха из колбы через всю систему 3 раза пропускают водород. После заполнения системы водородом колбу закрывают пробкой, включают магнитную мешалку и ведут гидрирование при комнатной температуре. Расход водорода на гидрирование наблюдают по уменьшению объема водорода в бюретке. Примечание. Проба на полноту гидрирования: 1 мл фильтрата помещают в фарфоровую чашку и удаляют растворитель упариванием на закрытой водяной бане. Остаток растворяют в 1 мл хлороформа, прибавляют 5 мл раствора сурьмы хлорида; не должно появляться синего окрашивания. В случае появления окраски гидрирование продолжают в течение более длительного времени, прибавляя катализатор. По окончании гидрирования в колбу прибавляют 0,3 г силикагеля марки КСМ или ШСМ, перемешивают и фильтруют; 3 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора пропанолом - 2 до метки и перемешивают (раствор Б). 3 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора пропанолом - 2 до метки и перемешивают (раствор В). Измеряют оптическую плотность раствора В на спектрофотометре при длинах волн 300, 310, 325, 334 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор Б. Содержание витамина А в ME в одной таблетке или драже вычисляют, как описано выше, введя в формулу расчета разведение в пропаноле - 2. Примечания. 1. При анализе таблеток, покрытых оболочкой, средняя масса таблетки в формуле не учитывается. 2. При анализе препаратов, не содержащих аскорбиновую кислоту, перед омылением прибавляют к испытуемой навеске 0,1 г аскорбиновой кислоты. 3. 1 г 100% ретинола ацетата соответствует 2907000 ME. 1 г 100% ретинола пальмитата соответствует 1817000 ME. 4. Пропанол-2 (изопропиловый спирт) (х. ч.) при измерении поглощения должен иметь величину оптической плотности, не превышающую 0,01 в области от 320 до 350 нм и 0,05 - от 280 до 300 нм по сравнению с водой в кювете с толщиной слоя 10 мм. 5. Очистка азота: азот газообразный (ос. ч.) пропускают последовательно через поглотители со щелочным раствором пирогаллола А [5 г пирогаллола А (ч. д. а.) на 100 мл 20% раствора едкого кали], концентрированной серной кислотой, стеклянной ватой и плавленым кальция хлоридом. 6. Приготовление палладиевого катализатора: в трехгорлую колбу вместимостью 1,5-2 л с мешалкой помещают 840 мл воды, 100 мл концентрированного раствора аммиака и 210 г аммония карбоната (х. ч. или ч. д. а.). При непрерывном перемешивании реакционную массу нагревают до температуры 50 град. С и в течение 30 мин прибавляют раствор, полученный растворением 52,5 г кальция карбоната (ч. д. а.) в смеси 130 мл концентрированной кислоты хлористоводородной с 130 мл воды. Температуру реакционной массы поддерживают от 50 до 80 град. С. Выделившийся белый осадок отфильтровывают и тщательно промывают водой до исчезновения запаха аммиака. После этого осадок отжимают. В колбу с суспензией свежеосажденного кальция карбоната в 400 мл воды прибавляют при интенсивном перемешивании горячий раствор, полученный растворением 5 г палладия хлорида (ч. д. а. или ч.) в смеси 12 мл концентрированной хлористоводородной кислоты с 30 мл воды. Смесь перемешивают 10 мин, затем нагревают от 80 до 85 град. С и при этой температуре перемешивают в течение 15 мин. Горячую смесь насыщают водородом (марки А) в течение 6 ч. Приготовленный катализатор промывают водой до отсутствия ионов хлора. Получают около 43 г палладированного кальция карбоната, который сушат при температуре от 100 до 105 град. С до постоянной массы. Хранят в банке оранжевого стекла при комнатной температуре. Годен в течение 3 мес. 2. Определение содержания витамина А в жирах рыб и морских млекопитающих Около 1,5 г жира (точная навеска) помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 0,1 г аскорбиновой кислоты, 30 мл свежеприготовленного 10% спиртового раствора едкого кали и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин при температуре кипения смеси. Содержимое колбы тотчас охлаждают, прибавляют 50 мл воды, переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл и трижды извлекают эфиром для наркоза: первый раз 50 мл, второй и третий раз по 30 мл. Объединенные эфирные извлечения промывают сначала 30 мл воды, затем 50 мл 4% раствора едкого кали и снова водой от 30 до 40 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с фенолфталеином). Промытые эфирные извлечения медленно фильтруют через бумажный фильтр с 8 г безводного натрия сульфата в колбу для отгона. Фильтр с натрия сульфатом 3 раза промывают эфиром по 10 мл, который фильтруют в ту же колбу. Эфир отгоняют в токе азота на водяной бане при температуре не выше 40 град. С. Остаток растворяют в небольшом объеме хлороформа для наркоза и разбавляют тем же хлороформом так, чтобы в 1 мл раствора содержалось около 30 ME витамина А; 0,4 мл полученного раствора переносят в кювету фотоэлектроколориметра с толщиной слоя 10 мм и быстро прибавляют 4 мл хлороформного раствора сурьмы хлорида, содержащего 2% уксусного ангидрида. Измеряют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны около 620 нм. Показание прибора отмечают не позднее чем через 5 с после прибавления в кювету хлороформного раствора сурьмы хлорида. По калибровочному графику находят содержание витамина А в международных единицах в 1 мл испытуемого раствора. Содержание витамина А в 1 г жира в международных единицах (МЕ) (X) вычисляют по формуле: CV Х = ----, а где С - содержание витамина А в 1 мл раствора, найденное по калибровочному графику, в международных единицах (МЕ); V - разведение в миллилитрах; а - навеска в граммах. Примечания. 1. Построение калибровочного графика: около 0,1 г (точная навеска) раствора ретинола ацетата в масле активностью 100000 ME в 1 мл для инъекций с учетом фактического содержания витамина А разводят в хлороформе для наркоза таким образом, чтобы получить раствор, содержащий 100 ME витамина А в 1 мл. Затем из него готовят последовательные разведения с содержанием витамина А от 5 до 50 ME в 1 мл с интервалом 5 ME. Из каждого разведения отбирают по 0,4 мл раствора и проводят колориметрическую реакцию так же, как при анализе испытуемого раствора. Для построения калибровочного графика откладывают по оси ординат найденные значения оптической плотности, а по оси абсцисс - соответствующие им количества витамина А в 1 мл раствора в международных единицах. При смене реактивов (особенно раствора сурьмы хлорида) калибровочный график проверяют, используя для этого свежеприготовленные хлороформные растворы препарата витамина А, применяемого в качестве эталонного раствора. 2. Приготовление хлороформного раствора сурьмы хлорида, содержащего 2% уксусного ангидрида: 230 г сурьмы треххлорной помещают в колбу и растворяют в 1 л хлороформа для наркоза при нагревании на водяной бане при температуре около 40 град. С. Колбу закрывают притертой пробкой и оставляют на ночь. Прозрачную часть раствора сливают в мерный цилиндр вместимостью 1 л, прибавляют 2% (по объему) уксусного ангидрида, переносят в банку оранжевого стекла, перемешивают и закрывают притертой пробкой. Раствор годен для анализа через сутки после приготовления в течение 42 сут. 3. Определение содержания тиамина хлорида и тиамина бромида (витамина B1) Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанное в соответствующих частных статьях, количественно переносят 30 миллилитрами раствора хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л) в мерную колбу вместимостью 100 мл, взбалтывают, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и фильтруют; первые 10 мл отбрасывают. Из полученного раствора готовят с использованием раствора хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л) раствор второго разведения так, чтобы содержание в нем витамина B1 (в пересчете на тиамина хлорид) было около 0,001 мг в 1 мл. 1 мл полученного раствора помещают в делительную воронку с притертой пробкой вместимостью 50 мл, во вторую делительную воронку помещают 1 мл раствора стандартного образца тиамина хлорида. В обе делительные воронки прибавляют по 4 мл подкисленного раствора калия хлорида и по 3 мл окислительной смеси; воронки одновременно встряхивают и оставляют стоять в течение 1 мин, затем прибавляют по 15 мл изобутилового или изоамилового спирта, или бутанола-1, одновременно энергично встряхивают в течение 2 мин и дают разделиться слоям. Водный слой удаляют, спиртовой фильтруют через бумажный фильтр с 1 г безводного натрия сульфата. Полученные фильтраты переносят в кювету флуориметра и измеряют флюоресценцию растворов при длине волны около 436 нм. Установку прибора проводят по раствору рабочего стандартного образца тиамина хлорида. Содержание витамина B1 в пересчете на тиамина хлорид (C12H17ClN4OS х HCl) в одном драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле: А1 х 0,001 х 100 х V3 х б А1 х V3 х б Х = --------------------------- = --------------------- A2 х а х V2 х 1000 А2 х а х V2 х 10000 где А1 - показание флуориметра испытуемого раствора; А2 - показание флуориметра раствора рабочего стандартного образца тиамина хлорида; 0,001 - содержание тиамина хлорида в 1 мл раствора рабочего стандартного образца в миллиграммах; 100, V2, V3 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже или одной таблетки, г; 1000 - пересчет в граммы. Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного образца тиамина хлорида: 0,1000 г тиамина хлорида, предварительно |