ГФ №11, том 2. Общие методы анализа лекарственное растительное сырье редакционная коллегия
 Скачать 2.46 Mb.
|
|
затем фильтруют на воронке Бюхнера с отсасыванием. Обработку углем повторяют еще раз и получают бесцветный или светло - желтый раствор, который разливают в колбы по 100 мл и стерилизуют насыщенным паром под давлением в паровом стерилизаторе при 1 ати (0,1 МПа) 20 мин. 5. Приготовление 20% раствора хлористоводородной кислоты: 425 мл концентрированной хлористоводородной кислоты (d 1,19) разбавляют водой до 1 л. 6. Приготовление посевного материала: делают смыв суточной тест - культуры со скошенного пептонно - солевого агара раствором натрия хлорида изотоническим 0,9%. Плотность микробной взвеси должна быть от 1 до 2 млрд микробных клеток в 1 мл. 7. Приготовление основной питательной среды. Состав среды: аммония хлорида (х. ч.) 2 г натрия хлорида (х. ч.) 3 г калия фосфата двузамещенного (х. ч.) 0,4 г натрия цитрата трехзамещенного (х. ч.) 3 г сахара молочного 3 г агара микробиологического 15 г воды дистиллированной до 1 л рН среды до стерилизации 7,0 (потенциометрически). Среду разливают по 200 мл в колбы и стерилизуют насыщенным водяным паром в автоклаве при 1 ати (0,1 МПа) 20 мин. Хранят в прохладном месте не более 2 мес. Перед розливом в чашки Петри в расплавленную среду прибавляют по 5 мл стерильного 40% раствора глюкозы на каждые 200 мл среды. Раствор глюкозы стерилизуют при 0,5 ати (0,05 МПа) в течение 15 мин. 7. Приготовление 1% раствора натрия цитрата: 10 г натрия цитрата растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки. Раствор годен в течение 7 сут при хранении при температуре от 5 до 10 град. С. 7. Определение содержания кислоты никотиновой (витамина РР) Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанных в соответствующих частных статьях, взбалтывают в горячей воде в мерной колбе вместимостью 100 мл, охлаждают и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют; первые 10 мл отбрасывают. Из полученного фильтрата готовят раствор второго разведения с таким расчетом, чтобы содержание кислоты никотиновой в нем составляло около 0,005 мг в 1 мл. В две конические колбы с притертой пробкой вместимостью 50 мл помещают по 5 мл испытуемого раствора, в третью колбу - 5 мл раствора рабочего стандартного образца кислоты никотиновой, в четвертую - 5 мл воды (контрольный опыт на реактивы). Колбы помещают на 5 мин на водяную баню при температуре 50 град. С. Затем из бюретки (под тягой) во все колбы прибавляют по 2 мл роданобромидного раствора, перемешивают и оставляют на 10 мин на водяной бане при той же температуре. Затем колбы быстро охлаждают до комнатной температуры и выдерживают в защищенном от света месте в течение 1 ч. Одновременно проводят контрольный опыт на посторонние окрашенные вещества, присутствующие в растворе. Для этого к 5 мл испытуемого раствора прибавляют 3 мл раствора метола и 2 мл воды. Измеряют оптическую плотность растворов желтого цвета на фотоэлектроколориметре при длине волны около 440 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют воду. Содержание C6H5NO2 (кислоты никотиновой) в одном драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле: (D - D1) х 0,005 х 100 х V3 х б Х = -------------------------------- = (D0 - D2) х а х V2 х 1000 (D - D1) х V3 х б = --------------------------, (D0 - D2) х a х V2 х 2000 где D - оптическая плотность испытуемого раствора; D1 - оптическая плотность контрольного опыта на посторонние окрашенные вещества; D0 - оптическая плотность раствора рабочего стандартного образца кислоты никотиновой; D2 - оптическая плотность контрольного опыта на реактивы; 0,005 - содержание кислоты никотиновой в 1 мл раствора рабочего стандартного образца в миллиграммах; 100, V2 и V3 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже или одной таблетки, г; 1000 - пересчет в граммы. Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного образца кислоты никотиновой: 0,5000 г кислоты никотиновой растворяют в горячей воде в мерной колбе вместимостью 500 мл, прибавляют 5 мл раствора серной кислоты (5 моль/л) и доводят объем раствора водой до метки (основной раствор). Раствор годен в течение 6 мес при хранении в банке оранжевого стекла с притертой пробкой при температуре от 5 до 10 град. С. 0,5 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. 1 мл раствора рабочего стандартного образца содержит 0,005 мг кислоты никотиновой. Раствор используют свежеприготовленный. 2. Приготовление раствора серной кислоты (5 моль/л): медленно и осторожно, при постоянном перемешивании, вливают 30 мл концентрированной серной кислоты в 102 мл воды. 3. Очистка метола: 100 г метола (ч. д. а. или ч.) смешивают с 0,7 г натрия бисульфита и вносят в кипящие 500 мл раствора серной кислоты (0,05 моль/л). Если раствор сильно окрашен, к нему прибавляют 10 г активированного угля. Кипящий раствор быстро фильтруют через воронку Бюхнера, которая предварительно нагрета горячей водой. Фильтрат переносят в химический стакан вместимостью 1 л, прибавляют 0,3 г натрия бисульфита, 0,7 л 95% спирта, перемешивают, помещают в холодильник и оставляют на 18 ч. Выпавшие кристаллы отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывают 3 раза 95% спиртом и высушивают на воздухе в темноте. Перекристаллизованный метол хранят в банке оранжевого стекла с притертой пробкой в защищенном от света месте. При изменении метола его следует повторно перекристаллизовывать. 4. Приготовление раствора метола: перед употреблением готовят 8% раствор метола в растворе хлористоводородной кислоты (0,5 моль/л). 5. Приготовление роданобромидного раствора (проводят под тягой): к 4 мл брома прибавляют 100 мл воды, энергично встряхивают и отстоявшийся раствор декантируют. К охлажденной на льду бромной воде (взятой в количестве, нужном для анализа) прибавляют по каплям 10% раствор аммония роданида или калия до светло - желтого окрашивания, затем прибавляют 1% раствор аммония роданида до полного обесцвечивания и небольшими порциями кальций углекислый до прекращения выделения углекислого газа и образования осадка. Раствор фильтруют в банку оранжевого стекла с притертой пробкой и хранят при температуре от 5 до 10 град. С. Раствор годен в день приготовления. 8. Определение содержания никотинамида Определение проводят одним из приведенных ниже методов. 1. Точную навеску порошка растертых драже или таблеток, или соответствующее количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, содержащих около 0,05 г никотинамида, количественно переносят водой в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют; первые 10 мл отбрасывают, 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 25 мл раствора едкого кали (0,2 моль/л), доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Полученный раствор помещают в электролитическую ячейку полярографа, пропускают ток азота в течение 5 мин и полярографируют, начиная с - 1,4 В. Параллельно снимают полярограмму раствора рабочего стандартного образца никотинамида. Содержание C6H6N2O (никотинамида) в одном драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле: H1 х 0,1 х 100 х 50 х б H1 х б Х = ------------------------- = -------------, Н0 х а х 10 х 1000 Н0 х а х 20 где Н1 - высота полярографической волны испытуемого раствора; Н0 - высота полярографической волны раствора рабочего стандартного образца никотинамида; 0,1 - содержание никотинамида в 1 мл раствора рабочего стандартного образца никотинамида в миллиграммах; 100, 50 и 10 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже или одной таблетки в граммах; 1000 - пересчет в граммы. 2. Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанных в соответствующих частных статьях, количественно переносят водой в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют; первые 10 мл отбрасывают. Из полученного раствора готовят раствор второго разведения с таким расчетом, чтобы содержание никотинамида в нем составляло около 0,05 мг в 1 мл. В две конические колбы вместимостью 25 мл помещают: в одну - 1 мл испытуемого раствора, во вторую - 1 мл раствора рабочего стандартного образца никотинамида. В обе колбы прибавляют по 1 мл воды, 1 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,1 моль/л), 8 мл свежеприготовленного раствора хлорамина Б, 1 мл 1% раствора аммония роданида и оставляют на 10 мин. Затем прибавляют по 8 мл 95% спирта, 2 мл раствора калия фосфата однозамещенного (0,1 моль/л), 3 мл раствора натрия барбитурата и нагревают на водяной бане при 60 град. С в течение 10 мин, быстро охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность растворов фиолетового цвета на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре при длине волны 555 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь 95% спирт - вода в соотношении 1:2. Содержание C6H6N2O (никотинамида) в одном драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле: D1 х 0,05 х 100 х V3 х б D 1 х V3 х б Х = ------------------------- = -------------------, D0 х а х V2 х 1000 D0 х а х V2 х 200 где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора; Dо - оптическая плотность раствора рабочего стандартного образца никотинамида; 0,05 - содержание никотинамида в 1 мл раствора рабочего стандартного образца в миллиграммах; 100, V2 и V3 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже или одной таблетки в граммах; 1000 - пересчет в граммы. Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного образца никотинамида: 0,0500 г никотинамида растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки (основной раствор). Раствор годен в течение 1 мес при хранении в банке оранжевого стекла с притертой пробкой при температуре от 5 до 10 град. С. Перед анализом полярографическим методом 10 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 25 мл раствора едкого кали (0,2 моль/л) и доводят объем раствора водой до метки. 1 мл раствора рабочего стандартного образца содержит 0,1 мг никотинамида. Раствор годен в день приготовления. Перед анализом колориметрическим методом 5 мл основного раствора никотинамида переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора водой до метки. 1 мл раствора рабочего стандартного образца содержит 0,05 мг никотинамида. 2. Приготовление раствора натрия барбитурата: 1 г барбитуровой кислоты (ТУ 6-09-512-74 ч. д. а. или ч.) растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, прибавляют 11 мл раствора едкого натра (0,5 моль/л), доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют. Раствор годен в день приготовления. 3. Хлорамин Б: свежеприготовленный 1% раствор перед употреблением фильтруют. 9. Определение содержания кислоты аскорбиновой (витамина С) Точную навеску порошка растертых драже или таблеток или соответствующее количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, с содержанием около 0,1 г кислоты аскорбиновой количественно переносят водой в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют; первые 10 мл отбрасывают. 10 мл полученного раствора помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл 2% раствора хлористоводородной кислоты, 0,5 мл 1% раствора калия йодида, 2 мл 0,5% раствора крахмала, воды до общего объема 20 мл и титруют раствором калия йодата (0,00167 моль/л) до появления стойкого светло - синего окрашивания. Параллельно проводят контрольный опыт. Для этого в коническую колбу помещают 1 мл 2% раствора хлористоводородной кислоты, 0,5 мл 1% раствора калия йодида, 2 мл 0,5% раствора крахмала, воды до общего объема 20 мл и титруют раствором калия йодата (0,00167 моль/л) до появления стойкого светлосинего окрашивания. 1 мл раствора калия йодата (0,00167 моль/л) соответствует 0,0008806 г С6Н8О6 (кислоты аскорбиновой). 10. Определение содержания рутина (витамина Р) Точную навеску порошка растертых драже или таблеток, или количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанных в соответствующих частных статьях, взбалтывают с 40 мл горячего метилового или горячего абсолютного спирта, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора сухим ацетоном до метки, перемешивают и фильтруют; первые 10 мл отбрасывают. Из полученного раствора готовят раствор второго разведения в сухом ацетоне так, чтобы содержание в нем рутина было около 0,1 мг в 1 мл. К 2 мл полученного раствора прибавляют 8 мл цитратно - борного реактива, перемешивают и оставляют на 10 мин в защищенном от света месте. Измеряют оптическую плотность полученного раствора зеленовато - желтого цвета на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют сухой ацетон. Параллельно проводят определение с раствором Государственного стандартного образца рутина. Для этого к 2 мл раствора Государственного стандартного образца рутина прибавляют 8 мл цитратно - борного реактива и далее поступают, как указано выше. Содержание C27H30O16 х 3Н2О (рутина) в граммах (X) в одном драже или одной таблетке вычисляют по формуле: D1 х 0,1 х 100 х V3 х б D1 х V3 х б Х = ------------------------- = -------------------, D0 х а х V2 х 1000 D0 х а х V2 х 100 где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора; Dо - оптическая плотность раствора Государственного стандартного образца рутина; 0,1 - содержание рутина в 1 мл раствора Государственного образца в миллиграммах; 100, V2 и V3 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже или одной таблетки в граммах; 1000 - пересчет в граммы. Примечания. 1. Приготовление раствора Государственного стандартного образца рутина: 0,0250 г рутина, предварительно высушенного при температуре 135 град. С до постоянной массы, растворяют в 10 мл горячего метилового или горячего абсолютного спирта, переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл с помощью сухого ацетона и доводят объем раствора тем же ацетоном до метки. 1 мл раствора Государственного стандартного образца содержит 0,1 мг рутина. Раствор годен в течение 6 мес при хранении в хорошо укупоренной банке оранжевого стекла при температуре от 5 до 10 град. С. 2. Приготовление цитратно - борного реактива: к 10 г лимонной кислоты, высушенной при температуре 60 град. С в течение 2 ч, прибавляют 10 мл сухого ацетона (раствора А). К 0,8 г борной кислоты прибавляют 100 мл сухого ацетона (раствор Б). Оба раствора пересыщены, и перед употреблением их фильтруют. Непосредственно перед употреблением смешивают 4 мл раствора А и 4 мл раствора Б. 11. Определение альфа - токоферола ацетата (витамина Е) Точную навеску порошка растертых драже (не более 1 г) или 2 таблетки, растертые в порошок, количественно переносят 10 миллилитрами воды в коническую колбу вместимостью 100 мл и нагревают на водяной бане при температуре от 60 до 70 град. С при |