методы исследования физиология. методы физиологические. Определение количества гемоглобина крови методом Сали

• Название: Определение количества гемоглобина крови методом Сали
• Анкор: методы исследования физиология
• Дата: 25.06.2022
• Размер: 186.38 Kb.
• Имя файла: методы физиологические.docx
• Тип: Документы; #614981

1. 
   Определение количества гемоглобина крови методом Сали.
   

Количество гемоглобина крови определяется калориметрическим методом, с помощью гемометра Сали, который состоит из штатива с тремя пробирками. Две крайние запаяны и содержат солянокислый гематин. Средняя открыта и градуирована. В среднюю пробирку налейте 0,1 N раствор соляной кислоты до нижней метки. Сделайте прокол кожи пальца и капилляром возьмите кровь, точно до метки 20 мкл, осторожно оботрите кончик капилляра ваткой, погрузите его на дно и выдуйте кровь так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая капилляра, сполосните его соляной кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пробирки перемешайте легким встряхиванием и оставьте стоять 2-3 минуты. В это время происходит гемолиз эритроцитов и образование солянокислого гематина. Затем к раствору прибавляйте по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет совершено одинаков с цветом стандартного раствора. Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора будет показывать количество гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах.

Нормы: мужчины 130-160 г/л, женщины 120-150 г/л

2. 
   Определение количества эритроцитов в 1 л крови.
   

Указанным выше способом наберите в капилляр гемометра Сали 20 мкл крови и далее выдуйте в пробирку, в которой находится 4 мл 3% раствора хлористого натрия. Взвесь осторожно перемешайте легким встряхиванием пробирки. Получается разведение крови в 200 раз.

Заполнение счетной камеры разведѐнной кровью. Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеется 4 желоба. Между ними образуются узкие площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. Т.к. боковые площадки выше средней на 0,1 мм, то при наложении покровного стекла образуется камера глубиной 0,1 мм. Для того, чтобы гарантировалась глубина 0,1 мм, покровное стекло должно притираться до появления колец Ньютона. Камера Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 малых. Сторона малого квадрата – 1/20 мм. Площадь – 1/20 х 1/20 = 1/400 мм, а объем над малым квадратом – 1/400х1/10 = 1/40000мм3 (1/4000 мкл).

Методика притирания покровного стекла. Предметное стекло помещают на указательные пальцы обеих рук. Сверху на предметное стекло кладется покровное и мягким скользящим движением больших пальцев покровное стекло притирают до появления колец Ньютона. Далее каплю тщательно перемешанной разведенной крови, взятой пипеткой из пробирки, выдувают у края покровного стекла. В силу капиллярности капля заполняет камеру. Подсчет эритроцитов в камере и вычисление количества эритроцитов в 1 л крови. Посчитайте эритроциты при малом увеличении микроскопа в 5 квадратах, расположенных по диагонали и разделѐнных на 16 маленьких. Таким образом, подсчет производится в 80 малых квадратах.

Нормы: мужчины 4-5*10^12, женщины 3,9- 4,7* 10^12

3. 
   Определение количества лейкоцитов в 1 л крови.
   

Методика забора крови такая же, как и при подсчете эритроцитов. Отличие появляется на этапе разведения крови. Для разведения крови используется 0,4 мл 3% раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (уксусная кислота лизирует эритроциты, а метиленовый синий окрашивает ядра лейкоцитов). Получается 20-кратное разведение крови. Притирают покровное стекло к счетной камере и заполняют ее разведенной кровью. Лейкоциты считают при малом увеличении микроскопа в 25 больших квадратах, что соответствует 400 малым

Учитывая, что объем крови, соответствующий малому квадрату, – 1/4000 мкл и разведение крови в 20 раз, подсчитайте по формуле:

Нормы: 4-9*10^9

4. 
   Определение группы крови по системе АВО с помощью моноклональных антител.
   

На предметные стекла наносят по одной капле цоликлонов анти-А и анти-В. Рядом с этими каплями наносят по одной маленькой капле (1/10 от объема цоликлона) исследуемой крови. Стандартные реагенты и капли крови смешивают разными уголками предметного стекла и наблюдают за реакцией в течение 2,5 минут.

Цоликло́н — это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов.

5. 
   Определение резус-принадлежности крови с помощью цоликлона анти Д.
   

На предметное стекло нанесите большую каплю (около 0,1 мл) реагента, рядом поместите маленькую каплю крови (0,01-0,05 мл) и перемешайте их. Через несколько секунд стекло следует покачивать, что позволит развиться более полной крупнолепестковой агглютинации. Реакция проявляется через 20-60 секунд. Результаты учитываются через 3 минуты.

6. 
   Определение времени свертывания крови по методу Сухарева
   

Кровь для исследования берут из пальца после удаления первой капли. В сухой капилляр, используемый в СОЭ, наберите столбик крови высотой 25-30 мм. Заметьте время. Кровь наклоном капилляра переведите на середину трубки. Держа капилляр пальцами, покачивайте его на 300 -450 , в обе стороны. Свободное перемещение показывает, что свертывание крови ещѐ не наступило. Начало свертывания крови характеризуется замедлением движения еѐ при наклоне капилляра. На внутренней поверхности стенки появляются небольшие сгустки. Полное свертывание крови соответствует моменту полной остановки движения крови. В норме начало свертывания от 30 сек до 2 мин., конец от 3 до 5 минут.

Определение времени кровотечения по способу Дуке.

Обработайте палец спиртом. Проколите кожу пальца на глубину 3мм. Заметьте время. Каждые 30 сек вытекающую каплю осторожно впитывайте фильтровальной бумагой, которая не должна касаться ранки. Отсутствие крови на бумаге считаем за момент прекращения кровотечения. Продолжительность кровотечения в норме равна 2-4 минуты

7. 
   Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)
   

Для данной работы используется прибор Панченкова, состоящий из штатива и капилляров. Капилляр промойте 5% раствором цитрата натрия. Затем наберите цитрат в капилляр до метки Р (реактив) и выдуйте его в тигелек. Вслед за этим сделайте прокол в коже пальца и в тот же капилляр наберите двукратно кровь до метки К. Обе порции крови смешайте в тигельке с имеющимся там цитратом натрия в соотношении 4:1. Наберите в капилляр цитратную кровь до метки 0 и поставьте капилляр в штатив. Эритроциты оседают. Наверху появляется прозрачный слой сыворотки. Величина столбика сыворотки, появившейся за час и выраженной в миллиметрах, и является СОЭ.

8. 
   Пальпация пульса. Пульс – это толчкообразные колебания стенок сосудов, которые возникают вследствие движения крови при ее изгнании из сердца. Пульс исследуют путем прижатия в местах поверхностного расположения сосудов. В терапевтической практике чаще всего пульс прощупывают на лучевой артерии, а если такое исследование затруднено, возможно определение пульса на сонной, бедренной, височной и других артериях. Характеристики пульса:
   

1. 
   Симметричность – это одинаковые пульсовые колебания, определяемые на симметричных лучевых артериях. В норме пульс симметричный, при патологии асимметричный
   
2. 
   Ритмичность – это временной промежуток между пульсовыми волнами. Если они одинаковые, то пульс ритмичный (p. regularis), если разные, то пульс аритмичный
   
3. 
   Частота пульса – это число пульсовых волн, зарегистрированных в течение 1 мин. При правильном ритме пульса частоту его подсчитывают в течение 15 с и умножают полученное значение на 4. При неправильном ритме частоту пульса необходимо подсчитывать в течение 1 мин. В норме частота пульса составляет 60–80 в 1 минуту.
   
4. 
   Напряжение определяется сопротивлением артерий нажиму давящего пальца и зависит от величины АД.
   
5. 
   Наполнение определяется колебанием максимального, а также минимального объёма артерии и зависит от величины ударного объёма, ОЦК и распределения крови
   

9. 
   Измерение артериального давления по Короткову и Рива-Роччи. Методика: Испытуемый обнажает левую руку и садится к столу. Предплечье обнаженной руки должно лежать на столе ладонной поверхностью вверх. Затем на плечо наложите манжету, предварительно выпустив из нее воздух, так, чтобы средняя часть манжеты приходилась на медиальную поверхность плеча, а нижний край был на 2 см выше локтевого сгиба. Зафиксируйте манжету с такой плотностью, чтобы под нее можно было подвести 2 пальца. Во время исследования испытуемый не должен видеть шкалы манометра или тонометра
   

а) Пальпаторный способ Рива-Роччи. Закрыв вентиль груши, нащупайте пульс лучевой артерии. Затем быстро нагнетайте грушей воздух в манжету, пока не исчезнет пульс. После этого, постепенно открывая вентиль груши, медленно выпускайте воздух из манжеты до появления пульса, замечая давление в этот момент по шкале манометра или тонометра. Давление в манжете при появлении пульса соответствует систолическому давлению в плечевой артерии.

б) Аускультативный способ Короткова. Нащупайте место наилучшей пульсации плечевой артерии в области локтевого сгиба медиальнее сухожилия двуглавой мышцы плеча. Левой рукой установите фонендоскоп над артерией. Быстро накачивая воздух грушей, поднимите давление до уровня, превышающего предполагаемую величину систолического давления у испытуемого ( при этом отсутствуют какие-либо звуковые явления). Постепенно открывая вентиль, медленно выпускайте воздух из манжеты, следя за уровнем давления по шкале манометра или тонометра. Заметьте давления в манжете в момент появления ритмических звуков. При этом величина его будет соответствовать систолическому давлению в плечевой артерии. Продолжая снижать давление в манжете, необходимо уловить момент, когда звуковые явления резко ослабевают или полностью исчезают. По уровню давления в манжете в этот момент судят о величине диастолического давления в сосуде

Нормы:

10. 
    Запись и анализ электрокардиограммы.
    

Методика: Перед началом необходимо ознакомиться с устройством электрокардиографа и назначением ручек управления. Для этого извлеките прибор из сумки и подключите его к сети в соответствии с приложенной к прибору инструкцией. Установите скорость протягивания ленты 25 мм\с нажатием кнопки «25». При этом каждый 1 мм бумаги по горизонтали будет соответствовать 0,04 с. Зарегистрируйте калибровочный сигнал. Испытуемого с обнаженными предплечьями и голенями усадите на стул в удобном положении. Внутреннюю сторону нижней части предплечья и переднюю поверхность нижней трети голени в местах наложения электродов обработайте спиртом. Поверх смоченных 5% раствором хлористого натрия марлевых прокладок наложите электроды в следующем порядке:

правая рука – красный,

левая рука – желтый,

левая нога – зеленый,

правая нога – черный.

11. 
    Выслушивание (аускультация) тонов сердца.
    

Методика: Испытуемый обнажается до пояса. Затем, пользуясь рисунком, с помощью разноцветных мелков аккуратно отметьте точки акустической проекции клапанов сердца на грудную стенку. Точки акустической проекции будут следующими: двухстворчатого клапана – в пятом межреберье слева, на 1 см кнутри от срединно-ключичной линии; трехстворчатого клапана – на грудине у места прикрепления мечевидного отростка; аортального клапана – во втором межреберье у правого края грудины и клапана легочной артерии – во втором межреберье слева у края грудины.

Затем возьмите тремя пальцами (большим, указательным и средним) стетофонендоскоп и приложите его к исследуемому участку грудной клетки. Выслушивать тоны сердца начинайте с двухстворчатого клапана, затем переходите на трехстворчатый, аортальный и пульмональный клапаны. Для отличия первого тона от второго ориентируйтесь на их высоту и продолжительность, а также длительность интервалов между ними. Кроме того, первый тон совпадает с пульсом сонной артерии.

12. 
    СПИРОМЕТРИЯ.
    

В работе используется водяной или сухой (портативный) спирометр. Выдох в спирометр производится через рот, при этом нос следует зажать. Для повторного измерения необходимо установить исходное положение шкалы спирометра. Для этого у водяного спирометра извлекают пробку и цилиндр опускается, а у сухого спирометра поворачивают измерительную шкалу и нулевое деление шкалы совмещают со стрелкой. Исследование объемов повторяют в положении стоя 3 раза и вычисляют среднюю величину

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДЫХАТЕЛЬНОГО ОБЪЕМА (ДО) После обычного спокойного вдоха сделайте обычный спокойный выдох в спирометр

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗЕРВНОГО ОБЪЕМА ВЫДОХА (РО выдоха) После обычного спокойного выдоха в атмосферу сделайте максимально глубокий выдох в спирометр.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИЗНЕННОЙ ЕМКОСТИ ЛЕГКИХ (ЖЕЛ). Сделайте максимально глубокий вдох, а затем максимально глубокий выдох в спирометр без рывков, медленно, напрягая дыхательные мышцы, включая и брюшной пресс.

РАСЧЕТ ВЕЛИЧИНЫ РЕЗЕРВНОГО ОБЪЕМА ВДОХА (РО вдоха) Пользуясь полученными данными, найдите резервный объем вдоха как разность между ЖЁЛ и суммой ДО и РО выдоха. Для правильной оценки результатов ЖЁЛ необходимо определить % отклонения фактической ЖЁЛ от должной (ДЖЁЛ) ДЖЁЛ рассчитывайте по формуле Людвига: ДЖЕЛ для мужчин = 40 Р + 30 В – 4400 мл ДЖЕЛ для женщин = 40 Р + 10 В – 3380 мл, где Р – рост в сантиметрах, В – вес в килограммах. Отклонение в % ЖЕЛ от ДЖЕЛ рассчитывать по формуле:

Рассчитайте остаточный объем (ОО). В норме он составляет 30% от ЖЕЛ

13. 
    РЕГИСТРАЦИЯ ПОТОК-ОБЪЕМНОЙ СКОРОСТИ ВДОХА И ВЫДОХА (ПНЕВМОТАХОМЕТРИЯ)
    

Методика: Пневмотахометрия – многоплановый функциональный тест. Скорость воздушного потока в трубке зависит от работоспособности дыхательных мышц, грудной клетки, эластического сопротивления легких, поэтому показатели пневмотахометрии отражают функциональное состояние этих отделов органов дыхания. Кроме того, пневмотахометрия отражает и состояние бронхиальной проходимости. Для измерения мощности вдоха испытуемый после полного выдоха делает форсированный вдох через датчик пневмотахометра. При измерении мощности выдоха испытуемый из положения максимального вдоха делает форсированный выдох через датчик. Каждую операцию повторяют три раза

14. 
    Определение силы сокращения различных скелетных мышц человека (динамометрия).
    

Для определения силы мышц кисти рук применяют ручной динамометр, а для определения силы мышц разгибателей туловища становой динамометр. В первом случае испытуемый в положении стоя отводит вытянутую руку в сторону под прямым углом к туловищу и максимально сжимает кистью динамометр дважды. Силу мышц оценивают по лучшему результату. При определении станового усилия испытуемый ставит ноги на нижнюю пластину, руками берѐтся за верхнюю рукоятку и с максимальным усилием разгибает туловище, растягивая пружину. Пробу производят два раза и для оценки суммарной силы мышц берут наилучший показатель.

15. 
    Определение остроты зрения
    

Методика: Остроту зрения определяют с помощью таблиц со специально подобранными знаками, называемыми оптотипами, которые расположены в 12 строк. Величина знаков в каждой строке убывает сверху вниз. Сбоку каждой строки стоит цифра, обозначающая расстояние, с которого нормальный глаз различает детали оптотипов данного ряда под углом в 1 минуту, а весь знак под углом в 5 минут. Таблицу помещают на хорошо освещенной стене. Испытуемого усаживают на стул на расстоянии 5 м от таблицы и предлагают закрыть один глаз рукой без надавливания. Экспериментатор указкой показывает испытуемому знаки вразбивку, а не подряд, переходя от крупных к мелким. Длительность экспозиции не более 2-3 с. Остроту зрения определяют по последней строчке, которую испытуемый называет безошибочно и рассчитывают по формуле:

16. 
    Определение полей зрения.Периметрия
    

Методика: Для исследования применяют прибор периметр Ферстера, состоящий из металлической дуги, которая укреплена на штативе и может вращаться, описывая полусферу. В центре дуги имеется маленький белый диск, который служит фиксационной точкой. На противоположном конце прибора имеется опора для подбородка испытуемого. Испытуемого усаживают спиной к свету и предлагают поместить подбородок на опору, высоту которой надо определить таким образом, чтобы исследуемый глаз оказался на одном уровне с фиксационной точкой. Ведите фишку по шкале периметра от периферии к центру сначала сверху вниз, а затем снизу вверх. Отмечают, на каком градусе испытуемый начал отчетливо видеть предлагаемый ему для различения цвет. Опыт проводят сначала при вертикальном положении полукруга, затем при повороте его на 90 градусов. Исследуемые цвета зелѐный, красный, синий, белый.

17. 
    Исследование воздушной и костной проводимости звука.
    

Проба Вебера. Приложить ножку звучащего камертона к средней линии лба или макушке головы. Опишите свои ощущения. Не кажется ли вам, что звук громче в одном ухе, чем в другом, или что он поступает только с одной стороны? Если при проведении этой пробы вы слышите звук одинаково громко обоими ушами, вы можете имитировать нарушение проводимости одного уха, закрыв слуховой проход ваткой.

Проба Ринне Плотно приложите ножку камертона (вибрирующего с любой частотой) сосцевидному отростку. Вы услышите звук благодаря костной проводимости. Громкость звука будет уменьшаться по мере затухания колебаний камертона. В тот момент, когда вы перестанете слышать звук, перенесите камертон к наружному уху. Услышали вы снова звук? Если «да», то это означает, что чувствительность вашего уха при воздушной проводимости выше, чем при костной. В этом случае проба Ринне считается положительной, что является нормой. Если, приблизив камертон к наружному уху, Вы не слышите звука, повторите пробу, но в обратном порядке: сначала приложите ножку камертона к сосцевидному отростку. Если теперь вы слышите звук, то это указывает на нарушение передачи звука. Это отрицательная проба

18. 
    Особенности бинаурального слуха. Для проведения работы используйте фонендоскоп с различной длиной звукопроводящих трубок. Испытуемый садится спиной к исследователю. В уши ему вставьте трубки фонендоскопа так, чтобы он не знал, к какому уху подходит короткая трубка. Легким постукиванием по тыльной стороне фонендоскопа вызвать звукоощущение у испытуемого, который указывает сторону, откуда доносится звук. Поменяйте местами трубки фонендоскопа и снова проведите пробу.
    
19. 
    Адаптивная реакция зрачка на свет (прямая и cодружественная).
    

Посадите испытуемого лицом к окну. Заметьте, какова ширина его зрачка. Прикройте двумя руками его глаза на 10 с. Испытуемый в это время должен представить себе, что он смотрит на удаленный предмет. Снимите руку с одного глаза и посмотрите на зрачок, затем снимите руку с другого глаза. Наблюдайте рефлекторную реакцию на прямой свет. Испытуемый находится в том же положении. Снова закройте руками оба его глаза. Чуть-чуть приоткройте один глаз так, чтобы Вы могли видеть его зрачок, а свет из окна при этом не попадал в глаз. Снимите руку со второго глаза и посмотрите, как в результате содружественной рефлекторной реакции на свет изменится зрачок первого глаза, который остается прикрытым.

20. 
    Наблюдение некоторых двигательных рефлексов у человека.
    

В клинике исследование проприоцептивных рефлексов проводят для

оценки возбудимости ЦНС, а также для определения уровня возможного

нарушения функций ЦНС. При хроническом утомлении отмечается снижение

сухожильных рефлексов, а при неврозах – усиление. При остеохондрозе,

пояснично-крестцовом радикулите и других заболеваниях отмечается

снижение или исчезновение рефлексов.

Ход работы

1. Коленный рефлекс:

– усадите испытуемого на стул так, чтобы одна нога лежала на колене

другой, а пальцы рук были сомкнуты;

– нанесите отрывистый равномерный удар перкуссионным молоточком

или ребром ладони чуть ниже коленной чашечки;

– сравните рефлекс на правой и левой ноге (определите, одинаковой ли

силы требуется удар для получения одного и того же эффекта).

Дуга коленного рефлекса замыкается на уровне II – IV поясничных

сегментов спинного мозга, а чувствительное и двигательное волокна

рефлекторной дуги проходят в составе бедренного нерва