Гиста. №1 Занятие Гистология. Организации живой материи
 Скачать 63.98 Kb.
|
Занятие 1 1. Гистология наука о микроскопическом и субмикроскопическом строении, развитии и жизнедеятельности тканей животных организмов. Следовательно, гистология изучает один из уровней организации живой материи тканевой. Различают следующие иерархические уровни организации живой материи: клеточный; тканевой; структурно-функциональные единицы органов; органный уровень; системный уровень; организменный уровень Гистология, как учебная дисциплина, включает в себя следующие разделы: цитологию, эмбриологию, общую гистологию (изучает строение и функции тканей), частную гистологию (изучает микроскопическое строение органов). Основным объектом изучения гистологии является организм здорового человека и потому данная учебная дисциплина именуется как гистология человека. Основная задача гистологии состоит в изучении строения клеток, тканей, органов, установления связей между различными явлениями, установление общих закономерностей. Клетка впервые была открыта Р.Гуком в 1665 году. Гук при помощи сконструированного им примитивного микроскопа увидел в тонком срезе пробкового дерева клетки. Это и были клетки. Существенный вклад в клеточную теорию внесли Пуркинье, Броун, Шванн и Вирхов. Так, в 1830 году Пуркинье обнаружил в клетке цитоплазму, в 1833 году Броун увидел в клетке ядро, в 1838 году Шванн пришел к заключению, что клетки различных организмов имеют сходное строение, а в 1858 году Вирхов установил, что новые клетки образуются в результате деления материнской клетки. Основные положения клеточной теории 1 Клетка – наименьшая единица живого. 2 Клетки всех организмов имеют сходное строение. 3 Новые клетки образуются путем деления материнской клетки. 4 Многоклеточные организмы состоят из клеток, объединенных в ткани и орга-ны, регулируемые нервной, эндокринной и иммунной системами. Клетка элементарная единица живого, состоящая из цитоплазмы и ядра и являющаяся основой строения, развития и жизнедеятельности всех животных и растительных организмов. Основные компоненты клетки: ядро; цитоплазма. По соотношению ядра и цитоплазмы (ядерно-цитоплазматическое отношение) клетки подразделяются на: клетки ядерного типа объем ядра преобладает над объемом цитоплазмы; клетки цитоплазматического типа цитоплазма преобладает над ядром. По форме клетки бывают: круглыми (клетки крови); плоскими; кубическими или цилиндрическими (клетки разных эпителиев); веретенообразными; отростчатыми (нервные клетки) и другие. Большинство клеток содержат одно ядро, однако могут быть в одной клетке 2, 3 и более ядер многоядерные клетки. В организме имеются структуры (симпласты, синтиций), содержащие несколько десятков или даже сотен ядер. Однако эти структуры образуются или в результате слияния отдельных клеток (симпласты), или в результате неполного деления клеток (синцитий). Морфология этих структур будет рассмотрена при изучении тканей. Структурные компоненты цитоплазмы животной клетки: плазмолемма (цитолемма); гиалоплазма; органеллы; включения. Плазмолемму, окружающую цитоплазму, нередко рассматривают как одну из органелл цитоплазмы. Этапы приготовления гистологического препарата а) Приготовление срезов 1. Взятие и фиксация материала. Для предотвращения аутолиза кусочки, вырезанные из органов, погружают в фиксатор (формалин, метанол и др.) 2. Обезвоживание и уплотнение (заливка) материала .Образцы обезвоживают, проводя по батарее растворов этанола с возрастающей концентрацией, а также через смесь этанола с ксилолом и затем - через чистый ксилол. Образцы помещают в смесь ксилола с парафином и в чистый жидкий парафин. При охлаждении он затвердевает. 3. Приготовление срезов. Из парафина вырезают блок с образцом. На микротоме с него срезают слои по 7-10 мкм и крепят к предметным стёклам 4. Окрашивание срезов. Срезы переводят в водную среду (через батарею растворов этанола с убывающей концентрацией), красят и промывают. 5. Заключение срезов в консервирующую среду .Наконец, срезы опять возвращают в гидрофобную среду – с помощью батареи р-ров этанола с возрастающей конц., капают на них консервирующую среду – напр., канадский бальзам -- и накрывают покровными стеклами. б) В случае приготовления мазков, отпечатков и тотальных, или плёночных, препаратов этапы 2 и 3 из перечисленных опускаются. Строение микроскопа Объектив – самая важная часть микроскопа, который привинчивается к нижней части тубуса. Объектив в микроскопе находится в непосредственной близости от рассматриваемого предмета, за что он и получил свое название. Он состоит из системы оптических линз, вставленных в латунную оправу, и требует весьма бережного обращения и тщательного ухода (никоим образом не следует надавливать объективом на лежащий на предметном столике препарат, так как это может вызвать повреждение или даже выпадение линзы). Окуляр – вставляется в верхнюю часть тубуса. В него рассматривается изображение предмета (а не предмет), направленное объективом вверх. Он состоит из системы линз, вставленных в металлический цилиндр. Окуляр строит изображение, увеличивает его, но не выявляет подробности строения. Конденсор – собирает и концентрирует в плоскости препарата весь свет, отраженный от зеркала. Конденсор состоит из цилиндра (оправы) внутри которого расположены2 линзы. Поднимая и опуская конденсор можно регулировать освещение препарата. Диафрагма – расположена в нижней части конденсора. Также как и конденсор служитдля регулирования силы света. Зеркало – служит для улавливания света от источника освещения. Оно подвижно прикреплено под столиком, вращаясь вокруг горизонтальной оси. Зеркало с одной стороны - плоское, с друзой - вогнутое. МЕХАНИЧЕСКАЯ СИСТЕМА: основание (штатив) или массивная ножка (1); коробка с микромеханизмом (2) и микровинтом (3); податочный механизм для грубой наводки – макровинт или кремальера (8); предметный столик (4); винты (5, 6, 12, 13);головка (9);револьвер (10);клеммы;тубус (11);дуга или тубусодержвтель(7); Кремальера (макровинт) – служит для приблизительной «грубой» установки на фокус. Микровинт - служит для более тонкой и точной наводки. Предметный столик – прикрепляется к передней части колонки, на которой помещают исследуемый предмет. На столике имеется 2 клеммы; с их помощью закрепляется препарат. Передвижение препарата осуществляется с помощью винтов, которыерасположены сбоку столика. Тубус – служит для соединения объектива и окуляра, и соединен со штативом таким образом, что может подниматься и опускаться. Передвижение тубуса осуществляется с помощью двух винтов: макрометрического и микрометрического. Штатив – соединяет все вышеуказанные части микроскопа. Правила работы с микроскопом: Работать с микроскопом следует без торопливых и резких движений. В работе с микроскопом соблюдайте чистоту и аккуратность. Оберегайте микроскоп от пыли и загрязнения. 1. Перенос микроскопа осуществляется двумя руками: одной рукой – за тубусодержатель, другой – снизу за основание. 2. Микроскоп устанавливается прямо перед работающим, напротив его левого глаза, и не перемещается. 3. С правой стороны располагаются необходимые инструменты, материалы и альбом для зарисовок. 4. Перед началом работы мягкой (желательно батистовой) тряпочкой протираются от пыли окуляр, объектив, зеркало. 5. Поставив микроскоп на постоянное место, опускаем при помощи микровинта тубус микроскопа, глядя при этом сбоку микроскопа, так, чтобы объектив малого увеличения находился на расстоянии 1 см. от предметного стекла. 6. Каждый объект изучается сначала при малом увеличении, в затем переводят на большое. 7. Для освещения используются естественный свет, но не прямой, солнечный или электрический, лучше матовый. 8. Установка освещения: а) удалить матовое стекло под конденсором; б)установить конденсор фронтальной линзой на уровень столика микроскопа (поднять его с помощью винта; в)открыть полностью диафрагму; г) установить объектив малого увеличения; д) движением зеркала направить свет так, чтобы, пройдя через объектив, пучок света полностью освещал плоскость входного зрачка объектива. 9. После установки освещения помещаем препарат на предметный столик, чтобы рассматриваемый объект находился под фронтальной линзой объектива малого увеличения. Затем снова опускаем тубус при помощи кремальеры так, чтобы между фронтальной линзой малого объектива и покровным стеклом препарата было расстояние 3-4 мм (при опускании тубуса нужно смотреть не в окуляр, а сбоку на объектив). 10. Глядя в окуляр левым глазом (не закрывая правый), плавно поворачиваем правой рукой винт кремальеры не себя, находим изображение, одновременно левой рукой придаем объекту выгодное положение. 11. Переходя на большое увеличение, переводим револьвер и на место малого увеличения ставим объектив 40х . При большом увеличении, вращая микровинт, добиваются четкого изображения (вращают микровинт не более чем на пол-оборота). Помните, что при вращении микро- и макровинта по часовой стрелке тубус с объективами опускается вниз, а при обратном вращении поднимается. 12. После работы опять устанавливаем объектив малого увеличения. 13. Только при малом увеличении следует снимать препарат со столика микроскопа. Микроскоп после работы нужно протереть салфеткой и поместить под чехол. Методы Гистохимические и цитохимические методыпозволяет определять состав химических веществ и даже их количество в изучаемых структурах. Метод основан на проведении химических реакций с используемым реактивом и химическими веществами, находящимися в субстрате, с образованием продукта реакции (контрастного или флюоресцентного), который затем определяется при световой или люминесцентной микроскопии. Метод гистоавторадиографии позволяет выявить состав химических веществ в структурах и интенсивность обмена по включению радиоактивных изотопов в изучаемые структуры. Метод используется чаще всего в экспериментах на животных. Метод дифференциального центрифугирования позволяет изучать отдельные органеллы или даже фрагменты, выделенные из клетки. Для этого кусочек исследуемого органа растирают, заливают физиологическим раствором, а затем разгоняют в центрифуге при различных оборотах (от 2-х до 150 тыс.) и получают интересующие фракции, которые затем изучают различными методами. Метод интерферометрии позволяет определить сухую массу веществ в живых или фиксированных объектах. Иммуноморфологические методы позволяет с помощью предварительно проведенных иммунных реакций, на основании взаимодействия антиген-антитело, определять субпопуляции лимфоцитов, определять степень чужеродности клеток, проводить гистологическое типирование тканей и органов (определять гистосовместимость) для трансплантации органов. Метод культуры клеток (in vitro, in vivo) выращивание клеток в пробирке или в особых капсулах в организме и последующее изучение живых клеток под микроскопом. Включения — непостоянные структурные компоненты цитоплазмы. Классификация включений: трофические; секреторные; экскреторные; пигментные. В процессе жизнедеятельности в некоторых клетках накапливаются случайные включения: медикаментозные, частички угля, кремния и так далее. Трофические включения — лецитин в яйцеклетках, гликоген, липиды, имеются почти во всех клетках. Секреторные включения — секреторные гранулы в секретирующих клетках (зимогенные гранулы в ацинозных клетках поджелудочной железы, секреторные гранулы в эндокринных железах и другие). Экскреторные включения — вещества, подлежащие удалению из организма (например, гранулы мочевой кислоты в эпителии почечных канальцев). Пигментные включения — меланин, гемоглобин, липофусцин, билирубин и другие. Эти включения имеют определенный цвет и придают окраску всей клетке (меланин — черный или коричневый, гемоглобин — желто-красный и так далее). Необходимо отметить, что пигментные включения характерны только для определенных типов клеток (меланин содержится в меланоцитах, гемоглобин — в эритроцитах). Однако, липофусцин может накапливаться во многих типах клеток обычно при их старении. Его наличие в клетках свидетельствует о их старении и функциональной неполноценности. Жизненный цикл у этих клеточных типов различен. Жизненный цикл у часто делящихся клеток — это время их существования от начала деления до следующего деления. Жизненный цикл таких клеток нередко называют митотическим циклом. Такой клеточный цикл подразделяется на два основных периода: митоз или период деления; интерфаза — промежуток жизни клетки между двумя делениями. |