Организация лабораторно-производственной деятельности на примере ветеринарной лаборатории. Организация лабораторно производственной деятельности (3). Организация лабораторно производственной деятельности

• Название: Организация лабораторно производственной деятельности
• Анкор: Организация лабораторно-производственной деятельности на примере ветеринарной лаборатории
• Дата: 11.08.2022
• Размер: 197.24 Kb.
• Имя файла: Организация лабораторно производственной деятельности (3).docx
• Тип: Реферат; #644281
• страница: 5 из 6

2. Лабораторная диагностика инфекционного ринита кур (гемофилеза кур)

2.1 Материал для исследования

Материал от каждой птицы отбирается отдельными инструментами в отдельные стерильные ёмкости. Забор крови: в объеме 2 мл в стерильные пробирки с 3% K₂EDTA или K₃EDTA (с фиолетовой крышкой). Закрытую пробирку с кровью необходимо аккуратно перевернуть несколько раз.

Забор сыворотки: Кровь забирается в вакуумную пробирку с красной или коричневой крышкой (с активатором свертывания) в объеме 2-4 мл. Цельную кровь необходимо подержать при комнатной температуре до момента, когда она свернется, затем убрать в холодильник. По возможности отделите сыворотку и переместите ее в пустую пробирку типа Эппендорф или шприц [2].

Отбор помета: отбирается в стерильную посуду в количестве 1-10 г.

Отбор соскобов, мазков со слизистых оболочек: материал отбирается стерильными зондами (урогенитальный зонд типа А) вращательными движениями, захватывая клетки эпителия. После забора конец зонда помещается в стерильную одноразовую микропробирку типа Эппендорф на 1,5 мл с 0,5 мл физ. раствора. Материал хранить при температуре от +4 до +8 °C.

Стерильно отбирают серозно-фибринозный экссудат из перитонеальной, плевральной, перикардиальной полостей, пораженных суставов, при наличии симптомов поражения — ЦНС-фрагменты тканей головного мозга, при наличии пневмонии — кусочки легких на границе пораженной и здоровой ткани. Материал транспортируют в термосе со льдом.

2.2 Бактериологическая Диагностика

2.2.1 Микроскопия

H.parasuis — факультативный аэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,4 (см. Рисунок 2).


Рисунок 2. Рост возбудители гемофилеза на кровяном МПА с баккормилками
На обычных средах возбудитель не растет, требует добавления в среду готового фактора роста — V-фактор (NAD-никотинамидаденин-динуклеотид или NAD-фосфат NADP). В качестве источника V-фактора используют дрожжевой экстракт, энзиматически чистой NAD (NADP), гретую кровь барана (лошади) или растущую культуру «бактерийкормилок», которая при этом выделяет в окружающую среду Vфактор, что обеспечивает возможность роста вокруг колоний «бактерий-кормилок» сателлитньгх мелких колоний H.parasuis. Стерильные дрожжевой экстракт и чистый NAD добавляют в МПА, МПБ, агар и бульон Хоттингера. Рост H.parasuis также зависит от наличия в среде сыворотки крови (барана, лошади, крупного рогатого скота), которую добавляют в питательную среду в количестве 8-10%. Для первичного выделения возбудителя лучше всего использовать кровяной агар (5- 10% дефибринированной крови барана, лошади, кролика) с «бактерией-кормилкой». При исследовании контаминированного материала применяют среды Controni. Кровяной агар слегка подсушивают. Исследуемый материал засевают шпателем (бактериологической петлей) по всей поверхности среды. Затем по диаметру чашки в виде двух прямых линий под углом 90° засевают бактериологической петлей культуру негемо- 6 литического штамма стафилококка или Е. coli («бактериякормилка»). На плотные и жидкие питательные среды, содержащие готовые ростовые факторы (NAD, дрожжевой экстракт, гретую кровь), материал засевают обычным способом [4].Посевы культивируют при 37- 38°С в течение 24 - 48 часов в аэробных условиях.

2.2.2 Выделение чистой культуры

Возбудитель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,6, проявляет потребность при культивировании в NAD, сыворотке крови (лучше использовать куриную сыворотку), повышенном содержании СО2 в атмосфере. Исследуемый материал высевают на 10%-ный кровяной агар в чашках Петри (кровь овцы, кролика, курицы, крупного рогатого 9 скота) с последующим посевом «культуры-баккормилки» (стафилококк, кишечная палочка). Можно использовать кровяной агар Левинталя, сывороточно-дрожжевой агар. Поскольку материал обычно контаминирован сопутствующей микрофлорой, целесообразно применять селективные пи-тательные среды. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение 24-48 часов в эксикаторах в атмосфере 10% СО2. На кровяном агаре с «баккормилкой» возбудитель формирует вокруг штриха питающей культуры мельчайшие сателлитные, негемолитические колонии. На «шоколадном агаре», агаре Левинталя и сывороточно-дрожжевом агаре через 48 часов культивирования возбудитель формирует круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью, полупрозрачные, сероватые, диаметром до 1 мм колонии. В жидких питательных средах возбудитель растет со слабым равномерным помутнением питательной среды [7].

Последующие исследования окончательно показали, что серотип В является самостоятельным и не имеет ничего общего с серотипами А и С [3]. По результатам исследования большого количества изолятов инфекционного ринита кур было установлено, что в Германии циркулируют преимущественно серотипы А и В, в Испании – А, В и С, в Австралии, Южной Африке и Индонезии – А и С, а в Малайзии – А. Недостатком данной схемы является то, что около трети всех изолятов не типируются, возможно, из-за отсутствия агглютиногена.

Вторая схема типирования, разработанная K. Кумэ на основе реакции торможения гемагглютинации, предусматривала наличие 7 серотипов (НА-1-НА-7), распределенных по 3 серогруппам (I, II, III) [10]. Преимуществом данной схемы является то, что большинство изолятов, не типируемых в реакции агглютинации, были типированы в реакции торможения гемагглютинации. Однако данная схема не нашла широкого практического применения в связи техническими сложностями постановки теста.

Для удобства классификации A. paragallinarum по антигенным свойствам П. Блэкл совместил результаты исследований Л. Пейджа и К. Кумэ и предложил новую схему, включающую 3 серогруппы по агглютинину и 9 серотипов по гемагглютинину. В настоящее время по модифицированной схеме к серогруппе А относятся 4 серотипа (А-1, А-2, А-3 и А-4), к серогруппе В – 1 серотип (В-1), к серогруппе С – 4 серотипа (С-1, С-2, С-3 и С-4) [6].

Как показывают результаты исследований, серотиповой профиль возбудителя в разных странах мира разнообразен и имеет значительные различия. Так, в Австралии наибольшее распространение имеют серотипы А-4, С-2, С-4, в Африке – А-1, А-2, С-2, С-3, в Бразилии – А-3, в Германии – А-1, А-2, В-1, С-2, в Израиле – С-3, в Мексике – А-1, А-2, В-1, С-2, в США – А-1, В-1, С-2, в Японии – А-1, С-1 [9]. Третий метод типирования возбудителя основан на использовании моноклональных антител в иммуноферментном анализе [11].

Несмотря на ряд сообщений о достаточной специфичности и приемлемом уровне чувствительности, данный метод не нашел широкого применения в связи с наличием высокого потенциала изменчивости у A. paragallinarum и необходимостью создания широкой панели моноклональных антител. Четвертая схема типирования основана на выявлении термостабильных антигенов в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле. Недостатком этого метода является то, что у 6 серовариантов, выявленных по этой схеме, не удалось обнаружить корреляцию с основными иммунотипами возбудителя, поэтому и эта схема не нашла широкого применения [5].

Существует также сывороточный бактерицидный тест, с помощью которого возможно проведение дифференциации серологических групп А и С.