Организация лабораторно-производственной деятельности на примере ветеринарной лаборатории. Организация лабораторно производственной деятельности (3). Организация лабораторно производственной деятельности

Название	Организация лабораторно производственной деятельности
Анкор	Организация лабораторно-производственной деятельности на примере ветеринарной лаборатории
Дата	11.08.2022
Размер	197.24 Kb.
Формат файла
Имя файла	Организация лабораторно производственной деятельности (3).docx
Тип	Реферат #644281
страница	6 из 6

1 2 3 4 5 6

2.3 Постановка биопробы

Применяют для определения патогенных свойств выделенной культуры NAD-зависимых бактерий. Культуру выращивают в желточном мешке 6-7-дневных развивающихся куриных эмбрионов или на оптимальной плотной питательной среде. Биопробу проводят на 2-3 клинически здоровых wpax восприимчивого возраста. Содержимое желточного мешка вводят курам интраназально в дозе 0,1-0,2 мл. Клинические признаки болезни Выявляются через 24-48 часов, но иногда инкубационный период составляет 6-7 суток [8].

Диагноз ставится комплексно, с учетом эпизоотических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений с обязательным проведением бактериологического исследования, для чего в лабораторию направляют трупы павшей или убитой с диагностической целью птицы, (экссудат носовой полости, трахеи, легкие). Биопробу ставят на цыплятах 3 месячного возраста, они заболевают на 2-7 день с характерными симптомами. Диагноз считают установленным при выделении возбудителя из патматериала с последующей его идентификацией, а также при получении позитивных результатов биопробы с последующей реизоляцией возбудителя. В процессе проведения диагностики следует исключить инфекционный ларинготрахеит, респираторный микоплазмоз, оспу и авитаминоз А, где решающее значение отводится лабораторным исследованиям.

2.4 Серологическая диагностика

Диагноз на гемофилез ставится комплексно, с учетом эпизоотологических данных, симптомов болезни (опухание голов, ринит, дыхание с открытым клювом), патологоанатомических изменений (ринит, синусит, ларинготрахеит, атрофия носовых раковин, «совиная голова»), результатов гистологического исследования кожи, гортани и трахеи, серологического исследования (в т.ч. ретроспективной диагностики), бактериологического исследования, ПЦР, биопробы. Для проведения бактериологического исследования в лабораторию направляют клинически больных птиц с признаками синусита или мазки, приготовленные из содержимого носовой полости и синусов (в таком случае посев на питательные среды должен быть произведен не позднее 24 часов после отбора) [3].

Серология – это метод исследования, при котором в крови обнаруживается не сам возбудитель заболевания, а реакция иммунной системы на него. Если антитела есть, то можно говорить о том, что в крови присутствует антиген, который вызвал активизацию работы иммунитета.

Дифференцировать гемофилез следует от: метапневмовирусной инфекции (серозное воспаление передней гортани, лимфоидно-макрофагальные периваскулиты и пролифераты в коже, гортани и трахее), инфекционного бронхита (пробочки фибрина в бифуркации трахеи); инфекционного ларинготрахеита (катарально-геморрагический, дифтеритический ларингит и трахеит); оспы (инфекционная сыпь в коже головы, дифтеритический ларингит); респираторного микоплазмоза (фибринозный аэросаккулит); колисептицемии (полисерозит, септическая селезенка, не поражаются дыхательные пути); пастереллеза (крупозная плевропневмония, катарально-геморрагический дуоденит, не поражаются дыхательные пути); гиповитаминоза А (ороговение желез пищевода - просовидные узелки в слизистой оболочке).

Возбудитель болезни – Haemophilus paragallinarum-мелкие грамотрицательные аэробные коккоподобные палочки. Спор не образуют, неподвижны, вызывают гемолиз эритроцитов. В воде, на деревянных и бетонных покрытиях возбудитель сохраняет жизнеспособность 50-90 суток. По антигенным свойствам H. paragallinarum подразделяется на 3 серологические группы: A,B,C с соответствующими серовариантами: А1, А2, А3,А4, В1, С1-С4. Перекрестное серологическое родство между представителями серологическими группами не установлено [6].

Вид антигенно неоднороден, подразделяется в РА на ряд сероваров. Биопромышленность РФ соответствующие диагностические сыворотки не выпускает.

Серологическая диагностика инфекционного ринита птиц — не менее важный инструмент контроля данного заболевания. Как известно, одним из самых главных преимуществ этого вида исследований является возможность контроля поствакцинального иммунитета. Для выявления специфических антител против A. paragallinarum используют иммуноферментный анализ (ИФА) и реакцию торможения гемагглютинации (РТГА). В настоящее время сертифицированных коммерческих наборов ИФА для диагностики инфекционного ринита не существует. Некоторые компании предлагают наборы ИФА для научных целей без гарантии воспроизводимости полученных результатов. РТГА, широко применяющуюся для серологической диагностики многих гемагглютинирующих вирусов и бактерий, таких как вирусы ньюкаслской болезни, гриппа птиц или возбудителя респираторного микоплазмоза, также используют для выявления антител к A. paragallinarum. С помощью РТГА достоверно определяют специфические антитела к серотипам А и С с использованием как нативного антигена, так и антигена, обработанного тиоцианатом калия. Чувствительность реакции к выявлению постинфекционных антител к серотипу С низкая. Также существует третий тип РТГА для обнаружения антител к A. paragallinarum, где для постановки реакции используют антиген, обработанный гиалуронидазой, и эритроциты, обработанные формальдегидом. Этот вариант реакции позволяет с высокой достоверностью выявлять специфические антитела к серотипам А и С. При этом ни одна из предложенных модификаций РТГА не обладает достаточной чувствительностью для выявления специфических антител к серотипу В.

2.5 Аллергическая диагностика

Не проводится, т. к возбудитель не аллергенный

2.6 Дифференциация от исходного микроорганизма

От других видов пастерелл H.paragallinarum легко отличить по потребности в NAD. Этот признак исследуют посевом культуры на сывороточный или кровяной агар с последующим высевом «баккормилки» или нанесением на поверхность питательной среды бумажного диска, пропитанного NAD (10 мг/мл). Через 24 часа инкубирования сателлитный рост дают только культуры Н. paragallinarum и P. avium, остальные пастереллы и другие родные виды бактерий растут с одинаковой интенсивностью по всей поверхности питательной среды (NAD-зависимость отсутствует).

2.7 Применение ПЦР

При патологоанатомическом вскрытии павшая птица от гемофилеза истощена, подкожная клетчатка в области головы пропитана студневидным экссудатом, под-глазничные синусы заполнены серозным и серозно-фибринозным экссудатом, на поверхности слизистой оболочки носовой полости, гортани и трахеи наблюдается вязкая слизь, в носовых пазухах плотные выделения. Гемофилез диагностируют на основа-нии клинических, патологоанатомических изменений и подтверждением выделения возбудителя на питательных средах или методом ПЦР [4].

Материал от каждой птицы отбирается отдельными инструментами в отдельные стерильные ёмкости. Забор крови: в объеме 2 мл в стерильные пробирки с 3% K2EDTA или K3EDTA (с фиолетовой крышкой). Закрытую пробирку с кровью необходимо аккуратно перевернуть несколько раз. Забор сыворотки: Кровь забирается в вакуумную пробирку с красной или коричневой крышкой (с активатором свертывания) в объеме 2-4 мл. Цельную кровь необходимо подержать при комнатной температуре до момента, когда она свернется, затем убрать в холодильник. По возможности отделите сыворотку и переместите ее в пустую пробирку типа Эппендорф или шприц. Отбор помета: отбирается в стерильную посуду в количестве 1-10 г. Отбор соскобов, мазков со слизистых оболочек: материал отбирается стерильными зондами (урогенитальный зонд типа А) вращательными движениями, захватывая клетки эпителия. После забора конец зонда помещается в стерильную одноразовую микропробирку типа Эппендорф на 1,5 мл с 0,5 мл физ. раствора. Материал хранить при температуре от +4 до +8 °C.

Для лабораторных исследований отправляют живую птицу в начальной стадии острой формы болезни и свежие трупы. Клинически здоровую птицу используют для проверки возможности контактного заражения. Выделение возбудителя гемофилеза Avibacterium(Haemophilus) paragallinarum сложно. Для роста Avibacterium (Haemophilus) paragallinarum необходим V-фактор. Возбудитель растет при пониженной концентрации кислорода, факультативный анаэроб. При установлении диагноза на гемофилез применяют для лечения птицы сульфаниламиды и макролиды, проверенные в лабораторных условиях на активность против Н. paragallinarum [10].

Таким образом, точно диагностировать гемофилез возможно только в лабораторных условиях, поскольку признаки заболевания характерны и для других инфекционных болезней домашней птицы. Диагноз должен быть основан на анализе выделений и установлении типа возбудителя и отделять гемофилез от схожих по симптоматике заболеваний: лейкоза, пуллороза, пастереллеза, болезни Марека.

3. Биопрепараты, используемые в ветеринарных лабораториях

Первый этап в лечении гемофилеза – облегчить страдания несчастной курицы и вернуть ей возможность полноценно дышать. Правда, он уместен только в условиях приусадебного хозяйства, где кур не много: марлевым тампоном, смоченным в простейшем растворе (тетрациклина, фурацилина или даже чайной заварки) очистить забитые корочками носовые ходы птицы и шприцем ввести лекарственный препарат (отлично действуют пенициллин или стрептомицин). Безусловно, это хлопотно и занимает немало времени даже на маленькой ферме, но такая процедура дает неплохой эффект и спасает кур от дальнейших осложнений в области дыхательных органов.

В крупных птицеводческих хозяйствах можно поступить несколько иным образом: добавить препараты, к которым гемофильная палочка очень чувствительна, в воду и пропаивать кур этим «зельем» 5-7 дней. В качестве основной составляющей для лечебного раствора очень подойдут сульфаниламидные препараты: дисульфан, фталазол, этазол, сульфадимезин. Все перечисленные процедуры дают положительный эффект на первом, не осложненном вторичными признаками, этапе заболевания.
Если же дело зашло слишком далеко и гемофилез у кур протекает очень тяжело, необходимо принять срочные карантинные меры, избавиться от зараженного поголовья и провести максимально полную дезинфекцию птичников [7].

Для лечения инфекционного насморка кур используют сульфаниламидные препараты и антибиотики. Лучше всего использовать антибиотики на основе действующих веществ тизолин и триметоприм.

В ваших аптеках вы можете встретить множество средств на основе сульфаниламидов, тизолина и триметоприма, например: «Септовет», «Бровасептол», «Би-септим» и пр.

Схема лечения указана в инструкции конкретного препарата. Например:

- «Бровасептол-концентрат» выпаивают 7-10 суток (1 г/3 л воды)

- «Тимил-250» выпаивают 3-5 суток (1 г/1 л воды)

- «Би-септим» - 3-5 суток (1,5 г/1 кг корма).

Обязательно следует провести дезинфекцию курятника (к примеру, препаратом «Бровадез-плюс»). Яйца от кур, переболевших гемофилезом, не следует брать на инкубацию, употребляя только в пищевых целях. Больную птицу обязательно отсаживают от здоровой, а здоровую выпаивают теми же препаратами, но в меньших дозах – для профилактики. Неплохо было бы и больной, и здоровой птице дать витаминных препаратов, особенно витамина А.
Также для лечения применяют препарат ВИРСИН 437. Вакцина Приготовлена из инактивированного вируса болезни Ньюкасла птиц штамм "VH" и инактивированной бактерии Авибактерум парагалинарум серотипы A-B-C. По внешнему виду препарат представляет собой однородную эмульсию белого цвета. При хранении допускается отслоение масла в верхней части флакона. При встряхивании однородность эмульсии восстанавливается [5].
Итак, профилактика инфекционного ринита кур включает в себя соблюдение правил содержания и кормления маточного стада и молодняка. Молодняк необходимо содержать изолировано от взрослого стада. При посадке птицы в птичник придерживаются принципа одноразовой комплектации: «все пусто – все занято».

Заключение

В начале работы для проведения исследования были поставлены следующие задачи:

– рассмотреть технику безопасности при работе в лаборатории;

– исследовать деятельность ветеринарных лабораторий;

– изучить оборудование и методы;

– проанализировать материал для исследования;

– рассмотреть бактериологическую диагностику;

– изучить постановку биопробы;

– проанализировать серологическую диагностику;

– изучить аллергическую диагностику;

– проанализировать дифференциацию от исходного микроорганизма;

– рассмотреть применение ПЦР;

– изучить препараты, используемые в ветеринарных лабораториях.

В ходе проведенного исследования были сделаны следующие выводы.

Область деятельности лаборатории – это управляемый документ, содержащий:

– виды конкретных испытаний, оценок и калибровок/поверок, которые лаборатория квалифицирована проводить;

– перечень оборудования, которое лаборатория использует для осуществления указанной выше деятельности;

- перечень используемых методов и эталонов.

Ветеринарная лаборатория осуществляет:

Участие в мониторинге здоровья животных, обеспечение своевременного установления причин их заболеваемости и гибели;
участие в мониторинге и контроле ветеринарно-санитарного качества животноводческой продукции, кормов и кормовых добавок;
изучение эпизоотической обстановки по особо опасным заразным болезням животных;
методическое руководство и контроль работы лабораторий ветеринарно-санитарной экспертизы на рынках;
участие в разработке нормативно-технической документации в области ветеринарии и животноводства.

С целью диагностики болезней животных и обеспечения безопасности в ветеринарно-санитарном отношении продуктов животного происхождения и кормов проводит многочисленные исследования.

Для бактериологической диагностики инфекционного ринита кур в лабораторию поступала живая птица разного возраста с признаками поражения респираторного тракта. Клинические признаки заболевания обычно проявлялись в виде водянистого истечения из носовых отверстий. У некоторых птиц, вследствие закупорки носовых отверстий, наблюдали ротовое дыхание с хрипами. Иногда у птиц наблюдали опухшие под - глазничные синусы и конъюнктивальные мешки. Для выделения A. paragallinarum из патологического материала использовали кровяной агар Колумбия (Becton, Dickinson and Co.), содержащий 5% дефибринированной крови барана с дополнительным посевом культуры негемолитичного штамма Staphylococcus aureus. Чистые культуры возбудителя выращивали на шоколадном агаре или сывороточном агаре, содержащем 20 мкг/мл НАД (AppliChem) и 5% сыворотки крови лошади. Культивирование бактерий проводили в течение 24–72 ч при температуре 37°С в условиях обычной атмосферы и повышенного содержания угле - кислого газа (8–10%). Морфологию бактерий изучали методом микроскопии мазков, окрашенных по Граму. Наличие капсулы у бактерий определяли в мазках, окрашенных по Гинсу. Флуоресценцию колоний изучали в косопроходящем свете под стереоскопическим микроскопом. Биохимические свойства изолятов изучали при по - мощи коммерческого набора API NH (bioMerieux) и по - севом на среды Гисса с моноуглеводами. Определение каталазы проводили на предметном стекле с 3%-м раствором перекиси водорода.

Список литературы

Белоусов В.И. Ветеринарная лаборатория / Белоусов В.Hi, Никитин И.Н. // Ветеринария. 2018. - №10. - С. 3-6.
Бессарабов Б.В. Болезни сельскохозяйственных птиц.- М.: Колос, 1970.- 183 с.
Борзова Л.Д. Ветеринарная микробиология и иммунология. Практикум: Учебное пособие / Л.Д. Борзова, Н.Ю. Черникова, В.В. Якушев и др. - СПб.: Лань П, 2016. - 368 c.

Гусев В.Ф., Кононов Г.А. Справочник по болезням сельскохозяйственных птиц.- Л.: Колос, 1969.- 367 с.
Корма и кормление сельскохозяйственной птицы / Р.Ф. Бессарабова, Л.В. опорова, И.А. Егоров и др. – М.: Колос, 1992. – 271с.
Коровин Р.Н., Байдевлятов А.Б., Бессарабов Б.Ф. Советы птицеводам.- Киев: Урожай, 1997.- 395 с.
Коровин Р.Н., Зеленский В.П., Грошева Г.А. Лабораторная диагностика болезней птиц.- М.: Агропромиздат, 1989.- 255 с.
Костюнина, В. Ф. Зоогигиена с основами ветеринарии и санитарии / В.Ф. Костюнина, Е.И. Туманова, Л.Г. Демидчик. - М.: Агропромиздат, 1991. - 480 c.
Микробиология: учебник / Под ред. Зверева В.В.. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2015. - 384 c.
Моисеенко, Л.С. Болезни сельскохозяйственной птицы. Диагностика, лечение и профилактика / Л.С. Моисеенко. - М.: Феникс, 2016. - 791 с.
Моисеенко, Л. С. Ветеринарный справочник фермера / Л.С. Моисеенко. - М.: Феникс, 2015. - 256 c.

1 2 3 4 5 6