«Тонкослойная хроматография и ее роль в контроле качества пищевых продуктов». отчет. Отчет о производственой практике по программе переподготовки
 Скачать 3.47 Mb.
|
|
Глава 3. ТСХ – оборудование 3.1 Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ для инструментальной ТСХ Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ позволяет провести все рабочие этапы современной тонкослойной хроматографии: — дозировка и нанесение проб — проведение процесса хроматографии — УФ-обнаружение — детектирование (окрашивание) хроматограмм — видеозапись изображений пластинок — количественная обработка хроматограмм Объекты исследования и области применения планарной хроматографии 1. Готовые лекарственные формы — подлинность действующих веществ — точность дозировки — наличие вредных примесей и добавок 2. Фармакология — фармакокинетические исследования — изучение метаболизма действующих веществ 3. Биохимия и медицина — определение содержания важнейших биологически активных соединений в жидкостях и тканях организма — изменение содержания этих веществ при патологии — судмедэкспертиза — допинг-контроль 4. Охрана окружающей среды — анализ пестицидов в питьевой и сточных водах, осадках, продуктах питания — анализ токсических веществ (например, афлатоксинов) в продуктах питания 3.1.1 Портативный набор для тсх  Портативный набор для ТСХКомплект предназначен для качественного и полуколичественного анализов многокомпонентных смесей органических и неорганических веществ и может найти применение во всех областях науки и техники, где для анализа используется метод тонкослойной хроматографии.Комплект позволяет:— проводить анализ смесей методом ТСХ, основанном на разделении анализируемых веществ за счет различной скорости перемещения их по тонкому слою сорбента, нанесенного на плоскую подложку (стеклянную, полимерную или алюминиевую); — наносить точное количество анализируемых веществ на хроматографические пластины; — анализировать одновременно большое количество проб; — обнаруживать и просматривать хроматограммы в ультрафиолетовом свете; — окрашивать хроматограммы; — удалять органические растворители с хроматограмм высушивающим устройством с подогревом. Комплект включает: — Ультрафиолетовый осветитель УФО-254 — Хроматографическую камеру для пластин размером 130-130-56 см — Пластины для ТСХ (10х10), одна упаковка — 50 шт — Пульверизатор для вязких и агрессивных жидкостей — Пульверизатор для маловязких и неагрессивных жидкостей — Фен Торрированные стеклянные капилляры V=1 ml 3.1.2 Базовый набор для ТСХ Базовый набор для ТСХ (расширенный) — УФ-кабинет 254/365 (ультрафиолетовая лампа) — 1 шт. — Спрей-камера коррозионностойкая (камера для окрашивания хроматограмм методом опрыскивания) — 1 шт. — Столик с подогревом для нанесения образцов на пластины — 1 шт. — Камера хроматографическая (для пластин 15x15 см) — 2 шт. — Камера хроматографическая (для пластин 10x10 см) — 2 шт. — Сушильный шкаф ШСУ — 1 шт. — Пульверизатор для агрессивных жидкостей — 1 шт. — Пульверизатор для маловязких жидкостей с резиновой «грушей»- 1 шт. — Микрошприц V=1 мкл — 1 шт. — Микрошприц V=10 мкл — 1 шт. — Стеклянные капилляры V=1 мкл -100 шт. — Микрокап (держатель капилляров) — 1 шт. — Пластины на стеклянной подложке АТСХ (10x10 см) — 20 шт. — Пластины «Сорбфил» ПТСХ-П-А 10x10 см — 50 шт. — Пластины «Сорбфил» ПТСХ-П-А-УФ 10x10 см — 50 шт. — Пластины «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А 10x10 см — 50 шт. — Пластины «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ 10x10 см — 50 шт. 3.1.3 Оборудование для проведения ВЭТСХ анализов Качественный анализ: Набор для ВЭТСХ CAMAG, включая УФ-кабинет Набор для ВЭТСХ дополнен горизонтальной ВЭТСХ камерой и новым аппликатором CAMAG Nanomat 4, диспенсером капилляров с держателем для одноразовых капилляров объемом 0.5б1б2б и 5 мкл. При использовании горизонтальной камеры количество одновременно анализируемых проб удваивается, а расход растворителей значительно сокращается. В отличие от обычных, ВЭТСХ пластины имеют лучшее разрешение. Предназначен для качественного и количественного анализов (при использовании систем денситометрии). Система для документирования и видеоденситометрии Новейшая система для качественного и количественного анализа в ТСХ при детектировании в видимой области спектра, включая режим флуоресценции. Специально разработана для массовых анализов растительного сырья на подлинность или для скриннинга образцов на присутствие «ключевых» компонентов. Полное документирование оцифрованных изображений с хранением в базах данных эталонных изображений, например, для сравнения с рабочими анализами. Количественный анализ: Полуавтоматический аппликатор CAMAG Linomat 4 для нанесения «полос» способом распыления . Линомат 4 распыляет раствор пробы в форме узкой полосы на поверхность пластины (ТСХ или ВЭТСХ). Такой способ нанесения дает возможность дозирования большого объема образца по сравнению с контактным методом, а также гарантирует максимально возможное разрешение для выбранной хроматографической системы для любого варианта: качественного, количественного или препаративного разделения. Техника нанесения, используемая в приборе CAMAG Linomat 4, стала синонимом качества в количественной инструментальной хроматографии. Спектроденситометр CAMAG Scanner 3 Спектроденситометр третьего поколения с программным управлением от ПЭВМ. Уникальные характеристики оптико-механической части гарантируют высокое разрешение (до 25 мкм) и скорость сканирования. Возможность работы в режиме отражения (УФ и флуоресценция) и пропускания (УФ и флуоресценция). Развитое программное обеспечение с готовыми методами количественного анализа, включая статистические расчеты и методы калибровки. Сертифицирован по ISO и ГОСТ. Программа-менеджер для планарной хроматографии — winCATS Новейшее программное обеспечение для документирования всех стадий хроматографии от пробоподготовки, нанесения, элюирования, дериватизации до детектирования. С использованием процедур управления приборами EquiLink программа становится операционной оболочкой для управления всеми приборами, сбора данных и обработки результатов в соответствии с GLP/GMP. Новый информационные технологии превратили ТСХ в инструментальный метод, дополняющий ВЭЖХ в современной лаборатории. 3.1.4 Пластины многократного пользования для высокоэффективной и аналитической ТСХ В ИВС АН СССР разработана технология производства пластин для тонкослойной хроматографии на стеклянной, полимерной подложке и подложке из алюминиевой фольги. В настоящее время по этой технологии выпускаются пластины для ТСХ на стеклянной подложке размером 20x20 см и полимерной подложке размером 10x10 см в количестве 50000 и 500000 штук в год, соответственно, в двух модификациях: АТСХ (пластины для аналитической ТСХ) и ВЭТСХ (пластины для высокоэффективной ТСХ). В качестве сорбента используется фракционированный силикагель КСКГ (СССР) с диаметром пор 110-130 А и размером фракций 5-17 мкм (АТСХ) и 8-12 мкм (ВЭТСХ). Толщина слоя сорбента 110-130 мкм. Могут выпускаться пластины с толщиной слоя до 200 мкм. Выпускаются также пластины этих модификаций с люминофором с возбуждением 254 нм. Особенности ТСХ-пластин, выпускаемых по технологии ИВС, связаны с использованием в качестве связующего золя кремневой кислоты, который после нагревания переходит в силикагель. Таким образом, разработанные ТСХ-пластины не имеют связующего и состоят из двух компонентов: слоя силикагеля и подложки. Если применять стеклянную подложку, то такие ТСХ-пластины являются химически прочными. Их химическая устойчивость определяется химической стойкостью силикагеля. В результате ТСХ-пластины ИВС могут многократно обрабатываться агрессивными реагентами, например, горячей хромовой смесью, что снимает ограничения в использовании коррелирующих реагентов для модификации и детектирования пластин и позволяет проводить многократную (до 10 раз) регенерацию пластин с помощью хромовой смеси. Механическая прочность слоя сорбента может регулироваться, обеспечивая, с одной стороны, транспортировку и многократность обработки пластин и, с другой стороны, возможность экстракции слоя адсорбента с разделившимися веществами для их последующей эволюции. По эффективности АТСХ- и ВЭТСХ-пластины ИВС соответствуют ДС- и HPTLC-пластинам фирмы «Merck» (ФРГ). Пластины широко испытаны в анализе производных аминокислот, пестицидов, липидов, антибиотиков, а также других классов органических и неорганических соединений и высокополимеров.
3.1.5 Контроль эффективности разделения Для идентификации тонкослойных хроматограмм требуется ультрафиолетовое освещение двух типов: — длинноволновое, с длиной волны 365 нм — под которым разделенные вещества на пластинах флюоресцируют яркими пятнами, часто разного цвета, на темном фоне. Чувствительность детектирования в таком свете увеличивается с ростом интенсивности облучения; — коротковолновое, с длиной волны 254 нм — под которым вещества, адсорбируя свет, становятся видимыми. Эти вещества выглядят как темные пятна на ярком зеленом фоне пластины. УФ-кабинеты фирмы НТЦ «Ленхром» разработаны специально для лабораторий ТСХ. Однако, они могут использоваться и для решения других задач: проверки подлинности документов, и денежных знаков, в минералогии, археологии, криминалистике и др. Лампы помещены в защитный кожух, не пропускающий видимый свет, что позволяет исследовать хроматограммы в незатененных помещениях, сохраняя при этом высокую чувствительность. Выпускаются УФ-кабинеты двух типов: УФ-кабинет254/365, УФО-254. 3.1.6 Хроматографические камеры Камера с плоским дном и притертой крышкой — классическая емкость для хроматграфии, позволяющая проводить процедуру хроматографии в условиях частичного или полного насыщения атмосферы камеры парами растворителя. Благодаря оптимальным размерам, происходит низкое потребление растворителей в процессе работы. Размер камер предназначен для пластин разных стандартных размеров: 10х10, 15х15 и 20х20 см. Камера для проявления в парах йода Камера для окрашивания — плоская стеклянная камера предназначена для окрашивания хроматографических пластинок растворами реагентов в легколетучих растворителях методом погружения. Камера позволяет равномерно по площади окрасить поверхность пластины. Камера потребляет малое количество детектирующего реагента. Камеры предназначены для пластин размером 10х10 и 15х15 см. 3.1.7 Постхроматографическая дериватизация Пульверизатор для агрессивных жидкостей Благодаря конструктивным особенностям, пульверизатор безопасен при работе с агрессивными (н-р, концентрированные кислоты и щелочи) жидкостями. Пульверизатор может работать как с использованием резиновой груши (маловязкие жидкости), так и с использованием сжатого воздуха, что позволяет распылять вязкие жидкости. Пульверизатор для маловязких жидкостейПульверизатор работает с использованием резиновой груши. Пульверизатор используют для распыления маловязких и неагрессивных жидкостей, т.е. водных и спиртовых растворов. Спрей-камера Устойчивая к агрессивным средам спрей-камера предназначена для окрашивания хроматограмм методом орошения (опрыскивания) различными детектирующими реагентами. Камера гарантирует безопасность процесса распыления вредных веществ для организма человека. Камера, по желанию, может быть укомплектована гибкой трубой для соединения с вытяжной вентиляцией. 3.1.8 Оборудование для нанесения образцов Торрированные стеклянные капилляры Ассортимент капилляров: 1, 2, 3, 5, 10, 20 мкл. Использование держателя капилляров «Микрокап» позволяет достигать высокой точности дозировки вручную. 100 штук капилляров комплектуется 1 шт. «Микрокап». Шприцевой дозатор «MULTISTEP-50» в комплекте с микрошприцем V=1 мкл (Аналог РВ-600 фирмы Hamilton) Шприцевой дозатор «MULTISTEP-50» предназначен для многократной дозировки микроколичеств жидкости с помощью микрошприцев. «MULTISTEP-50» обеспечивает пятидесятикратное повторение дозы (50 шагов). Для микрошприцев с рабочим объемом 1 мкл каждый шаг дозатора «MULTISTEP-50» отмерит 0,02 мкл жидкости. Дозатор «MULTISTEP-50» существенно облегчает работы, связанные с многократным повтором микродоз. Столик для нанесения образцов на пластины (с подогревом) Использование для нанесения проб на пластины столика с подогревом дает возможность получения пятен стартовых зон минимального размера (2-3 мм), что необходимо для более эффективного разделения многокомпонентных смесей при хроматографии. 3.1 .9 Приборы и оборудование для высокоэффективной тонкослойной хроматографии СИСТЕМА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С ДЕНСИТОМЕТРОМ «ДенСкан» Назначение и область применения Системы для тонкослойной хроматографии и электрофореза с денситометром «ДенСкан» предназначены для качественного и количественного анализа состава проб веществ и материалов в видимой области спектра и ультрафиолетовом свете при длинах волн 254 и 365 нм. Область применения — исследования в химии, биохимии, биологии, медицине, фармакологии, аналитическом контроле чистых веществ, объектов окружающей среды и др. Технические данные · Денситометр обеспечивает расчет параметров и количественную оценку хроматограмм в видимой и ультрафиолетовой области спектра (max= 254 нм, max =365 нм) · Размер обрабатываемых пластин, не более 15 х 15 · Время ввода изображения, с не более 5 · Время обмера хроматограммы, мин 5 · Отношение сигнал/шум: видимая область не менее 5/1УФ, 254 нм не менее 5/1УФ, 365 нм не менее 5/1 · Относительное СКО по площади пятен, % видимая область не более 5УФ, 254 нм не более 5УФ, 365 нм не более 5 · Размах значений Rf : видимая область не более 0,02УФ, 254 нм не более 0,02УФ, 365 нм не более 0.02 · Масса осветительной камеры, кг не более 12 кг · Габаритные размеры осветительной камеры, мм не более длина. 420 ширина 420 высота 700 · Напряжение питания, В 220 ± 22/33 · Частота переменного тока, Гц 50 ± 1 · Средняя наработка на отказ денситометра, ч не менее 5000 1. Состав денситометра 2. Денситометр «ДенСкан» состоит из камеры осветительной, черно-белой либо цветной видеокамеры или сканнера, блока ввода изображения, системы обработки данных. Камера осветительная выполнена в виде блочной конструкции, включающей следующие основные узлы:- источники света: лампы дневного света. Лампы УФ диапазона, длина волны 254 нм лампы УФ диапазона, длина волны 365 нм- набор корректирующих светофильтров- детектор — черно-белая малогабаритная видеокамера OS-45D или аналогичная с чувствительностью не хуже 0,02 люкс, с ручной фокусировкой и ручной регулировкой диафрагмы либо цветной сканнер с разрешением от 200 d.p.i. и выше с интерфейсом, соответствующим TWAIN стандарту- установочный столик для пластин; — канал связи с блоком ввода изображенияСистема обработки данных с использованием персонального компьютера и программного обеспечения «Dens». Минимальные требования к компьютеру:- Операционная система — Microsoft Windows 95, Windows 98, Windows NT (версия 4.0 или выше) — Процессор — Pentium 100 MHz- Оперативная память (RAM) — 8 Мбайт, рекомендуется 16 Мбайт- Цветной монитор — с диагональю не менее 14 дюймов- Место на жестком диске — 10 Мбайт- Манипулятор — «мышь»Блок ввода изображения видеобластер AverMedia ( и программное обеспечение к нему) используется для получения изображения хроматограммы на мониторе компьютера. Возможно использование аналогичных систем. [12] Глава 4. Литература 1. Аналитическая хроматография / Под ред. В.И. Сакодынского и др. М.: Химия, 1993, с. 19 – 21. 2. Кнорре Д.Г., Крылова Л.Ф., Музыкантов В.С. Физическая химия. — М.: Высш. шк., 1990. — 416с. 3. Алесковский В.Б., Бардин В.В., Булатов М.И. Физико-химические методы анализа. Практическое руководство.- Л.: Химия, 1988. – 376 с. 4. Ольшанова К.М. Практикум по хроматографическому анализу. М., Высш. школа, 1970. -312с. 5. Определение ддт, ддэ, ддд, альдрина, дильдрина, гептахлора, кельтана, метоксихлора, эфирсульфоната и других ядохимикатов в продуктах питания хроматографией в тонком слое / Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. М.: Колос, 1977. с. 9 – 17 6. Е.С. Косматый, Б.М. Тверская, Ф.И. Полонская. Определение о, о-диэтил-8-(6-хлорбензоксазолинил-3-метил)-дитиофосфата (фозалона) в яблоках методом тонкослойной хроматографии / Методы анализа пестицидов // Проблемы аналитической химии. Том II / М., «Наука», 1972. С. 70 – 73. 7. W.Mc Kinley, S.J. Grahem. J. Assoc. Offic. Agric. Chemists, 43, 89 (I960). 8. L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47b (1966). 9. Р. Nangniot, G. Dardenne. Bull. Inst. Agr. St. Res., 31, 120 (1963). 10. A.R. Kittleson. Analyt. Chem., 24, 1173 (1952). 11. Л.М. Фукельман. Сборник трудов ВИЗР, вып. 20, ч. 4, 61 (1964). 12. lenchrom.spb.ru/chromatography/thinlayer_004.shtml Липецк – 2022 | ||||||||||||||
