Хемостат. Отчет по лабораторной работе 1 Энзиматические методы определения концентраций метаболитов
 Скачать 107.82 Kb.
|
|
Ход работы Определение концентрации глюкозы в плазме крови энзиматическим методом. Две чистые пробирки промаркировали как «О1» и «К1». Далее микропипеткой внесли в обе пробирки по 2 мл рабочего раствора глюкозы. В пробирку «О1» микропипеткой внесли 0,02 мл плазмы крови, в пробирку «К1» микропипеткой внесли 0,02 мл калибровочного раствора с концентрацией D-глюкозы 5,55 ммоль/л. Содержимое пробирок перемешали. После этого поставили обе пробирки в термостат на 10 мин для выдержки при температуре 37 °С. По окончании 10 мин пробирки вынули из термостата. Далее содержимое пробирки «О1» подвергли фотометрии против рабочего раствора глюкозы при длине волны 510 нм. Затем аналогичное проделали с содержимым пробирки «К1». Полученные результаты:   Концентрация глюкозы в плазме крови рассчитывается по формуле:   Таким образом, полученное значение концентрации глюкозы входит в референтный интервал. Это означает, что содержание глюкозы в исследуемой плазме крови находится в норме. Определение концентрации холестерина в плазме крови энзиматическим методом. Две чистые пробирки и промаркировали как «О2» и «К2». Далее микропипеткой внесли в обе пробирки по 2 мл рабочего раствора холестерина. В пробирку «О2» микропипеткой внесли 0,02 мл плазмы крови, в пробирку «К2» микропипеткой внесли 0,02 мл калибровочного раствора с концентрацией холестерина 5,17 ммоль/л. Содержимое пробирок перемешали.После этого поставили обе пробирки в термостат на 10 мин для выдержки при температуре 37 °С.По окончании 10 мин пробирки вынули из термостата. Далее содержимое пробирки «О2» подвергли фотометрии против рабочего раствора холестерина при длине волны 500 нм. Затем аналогично проделали с содержимым пробирки «К2». Полученные результаты:   Концентрация холестерина в плазме крови рассчитывается по формуле:   Таким образом, полученное значение концентрации холестерина не входит в референтный интервал, оно намного ниже минимально критического значения. Это означает, что содержание холестерина в исследуемой плазме крови находится не в норме. Определение концентрации мочевины в плазме крови кинетическим (двухточечным) уреазным/глутаматдегидрогеназным методом. Две чистые пробирки промаркировали как «О3» и «К3». Далее микропипеткой внесли в обе пробирки по 3 мл рабочего раствора мочевины. В пробирку «О3» микропипеткой внесли 0,03 мл плазмы крови, в пробирку «К3» микропипеткой внесли 0,03 мл калибровочного раствора с концентрацией мочевины 8,33 ммоль/л. Содержимое этих пробирок перемешали.После этого поставили обе пробирки в термостат на 30 сек для выдержки при температуре 37 °С. По окончании 30 сек пробирки вынули из термостата. Далее содержимое пробирки «О3» подвергли фотометрии на спектрофлуориметре против дистиллированной воды при длине волны 340 нм. Затем аналогично проделали с содержимым пробирки «К3». После содержимое пробирок оставили выдерживаться еще 60 сек при комнатной температуре. Далее вновь содержимое пробирок подвергли фотометрии против дистиллированной воды при длине волны 340 нм. Полученные результаты:     Расчет концентрации мочевины в плазме крови: 1. вычисление изменения оптической плотности опытной и калибровочной пробы:     2. расчет концентрации мочевины в плазме крови:   Таким образом, полученное значение концентрации мочевины не входит в референтный интервал, оно намного выше максимально критического значения. Это означает, что содержание мочевины в исследуемой плазме крови находится не в норме. Определение концентрации мочевой кислоты в плазме крови энзиматическим методом. Две чистые пробирки промаркировали их как «О4» и «К4». Далее микропипеткой внесли в обе пробирки по 2 мл рабочего раствора холестерина. В пробирку «О4» внесли 0,05 мл плазмы крови, в пробирку «К4» микропипеткой внесли 0,05 мл калибровочного раствора с концентрацией мочевой кислоты 500 мкмоль/л. Содержимое пробирок перемешали.После этого поставили обе пробирки в термостат на 5 мин для выдержки при температуре 37 °С. По окончании 5 мин пробирки вынули из термостата. Далее содержимое пробирки «О4» подвергли фотометрии против рабочего раствора мочевой кислоты при длине волны 520 нм. Затем аналогично проделали с содержимым пробирки «К4». Полученные результаты:   Концентрация мочевой кислоты в плазме крови рассчитывается по формуле:   Таким образом, полученное значение концентрации мочевой кислоты не входит в референтный интервал, оно намного ниже минимально критического значения. Это означает, что содержание мочевой кислоты в исследуемой плазме крови находится не в норме. |