Хемостат. Отчет по лабораторной работе 1 Энзиматические методы определения концентраций метаболитов
 Скачать 107.82 Kb.
|
|
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Уральский федеральный университет имени первого Президента России Б. Н. Ельцина» Химико-технологический институт Кафедра иммунохимии Отчет по лабораторной работе № 1 «Энзиматические методы определения концентраций метаболитов» по дисциплине: «Большой биотехнологический практикум» Студент: Д. В. Баранников гр. ХМ-280018 Преподаватель: В. В. Емельянов доцент, к.м.н. Екатеринбург 2019 Цель работы: изучить энзиматические методы определения концентраций метаболитов, определить концентрации глюкозы, холестерина и мочевой кислоты в плазме крови энзиматическим методом, определить концентрацию мочевины в плазме крови кинетическим (двухточечным) уреазным/глутаматдегидрогеназным методом, сравнить полученные результаты концентраций метаболитов с референтным интервалом. Теоретические основы принцип энзиматического метода определение концентрации глюкозы в плазме крови заключается в том, что D-глюкоза окисляется кислородом воздуха под действием фермента глюкозооксидазы до глюконовой кислоты и перекиси водорода. Образовавшаяся перекись водорода под действием фермента пероксидазы в реакции с 4-аминоантипирином и фенолом образует окрашенное соединение – хинонимин (реакция Триндера). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации D-глюкозы и определяется спектрофотометром при длине волны 510 нм. принцип энзиматического метода определения концентрации холестерина в плазме крови заключается в том, что эфиры холестерина гидролизуются ферментом холестеролэстеразой до свободного холестерина, а последний окисляется кислородом воздуха под действием фермента холестеролоксидазы с образованием перекиси водорода. Образовавшаяся перекись водорода под действием фермента пероксидазы в реакции с 4-аминоантипирином и фенолом образует окрашенное соединение – хинонимин (реакция Триндера). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина и определяется спектрофотометром при длине волны 500 нм.   принцип кинетического (двухточечного) уреазного/глутаматдегидрогеназного метода определения концентрации мочевины в плазме крови заключается в том, что мочевина под действием уреазы гидролизуется с образованием аммиака. Аммиак вступает в реакцию восстановительного амминирования α-кетоглутарата под действием глутаматдегидрогеназы с образованием L-глетамата и окислением НАДН2 в НАД+. Скорость окисления НАДН2 в НАД+ пропорциональна концентрации мочевины и определяется спектрофотометром при длине волны 340 нм.  принцип энзиматического метода определения концентрации мочевой кислоты в плазме крови заключается в том, что мочевая кислота из пробы окисляется уриказой до аллантоина и углекислого газа с образованием перекиси водорода. Окисление перекисью водорода хромогенного субстрата 4-аминоантипирина в присутствии 2,4-дихлорфенола под действием пероксидазы приводит к окрашенному продукту хинонимину (реакция Триндера). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты и определяется спектрофотометром при длине волны 520 нм.  |